孫立園，劉曉倩，薛 晶，申興斌

（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科）

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是我國(guó)常見的消化道惡性腫瘤之一，近年來世界范圍內(nèi)的發(fā)病率以每年2%的速度上升，在我國(guó)發(fā)病率的增長(zhǎng)速度約為4.2%，位于惡性腫瘤的第3位[1]。由于人們生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)的變化和環(huán)境的影響，其發(fā)病率和死亡率還在繼續(xù)增加。眾多研究表明[2-4]，胰島素樣生長(zhǎng)因子家族（IGFs）、基質(zhì)金屬蛋白酶家族（MMPs）與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但二者與CRC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系還不十分明確。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察了CRC組織胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3（IGFBP-3）、基質(zhì)金屬蛋白酶-14（MMP-14）的表達(dá)情況，以探討二者與CRC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，以及為CRC的早期診斷和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2016年1月至2016年12月在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃腸外科接受手術(shù)治療后存檔，并經(jīng)病人及家屬同意、由病理科醫(yī)師證實(shí)為CRC的組織標(biāo)本70例，同時(shí)選取距癌旁10cm經(jīng)病理證實(shí)為正常結(jié)直腸黏膜(NM)的組織標(biāo)本20例，在內(nèi)鏡室活檢及手術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)直腸腺瘤(CRA)的組織標(biāo)本30例。三組受試者年齡、性別、體重等比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有CRC患者均為首發(fā)病例，手術(shù)前均未接受過放療、化療和免疫治療，在接受治療前排除糖尿病、慢性腎臟病等。

1.2 方法及結(jié)果判定

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色：采用Max Vision免疫組化染色法檢測(cè)所取組織標(biāo)本MMP-14和IGFBP-3蛋白的表達(dá)。所取標(biāo)本固定后，常規(guī)脫水、包埋，5μm厚連續(xù)切片。一抗MMP-14、IGFBP-3為兔抗人多克隆抗體（濃度均為1∶100）、即用型羊抗兔Max Vision試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，即用型DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋有限公司。嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 結(jié)果判定：MMP-14、IGFBP-3陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，出現(xiàn)在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)。在染色均勻的組織區(qū)選取5個(gè)高倍鏡視野（×400），采用Vlom雙評(píng)分法[5]進(jìn)行判定：①A值，按陽性細(xì)胞百分率評(píng)分：＜25%為1分，25%～50%為2分，50%為3分；②B值，按染色強(qiáng)度評(píng)分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以A+B值判定最終結(jié)果：陰性（-），0分；弱陽性（+），1-2分；中度陽性（++），3-4分；強(qiáng)陽性（+++）：5-6分。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 不同結(jié)直腸組織IGFBP-3、MMP-14蛋白的表達(dá)情況IGFBP-3、MMP-14蛋白陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。CRC中IGFBP-3蛋白表達(dá)明顯低于NM和CRA，MMP-14蛋白表達(dá)明顯高于NM和CRA（P＜0.05）。見表1：

表1 不同結(jié)直腸組織IGFBP-3、MMP-14的表達(dá)情況

2.2 IGFBP-3、MMP-14蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系 CRC中，IGFBP-3表達(dá)與年齡、性別、分化程度、浸潤(rùn)深度無關(guān)（P＞0.05）；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期有關(guān)（P＜0.05）： 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯低于無轉(zhuǎn)移，C＋D期明顯低于A＋B期。CRC中，MMP-14表達(dá)與年齡、性別、分化程度無關(guān)；與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期有關(guān)（P＜0.05，P＜0.01）：超過肌層明顯高于未超過肌層，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無轉(zhuǎn)移，C＋D期明顯高于A＋B期。見表2：

表2 IGFBP-3、MMP-14蛋白表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CRC中IGFBP-3與MMP-14表達(dá)的相關(guān)性 CRC中MMP-14與IGFBP-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.460，P＜0.01)。

3 討論

作為最常見的消化道惡性腫瘤之一，與其他惡性腫瘤一樣CRC的發(fā)生發(fā)展過程極其復(fù)雜，涉及多種因子和多個(gè)步驟。目前認(rèn)為，CRC發(fā)生的基本途徑是正常黏膜-腺瘤-癌。近年來，雖然CRC的治療手段逐漸豐富，但大部分CRC被發(fā)現(xiàn)時(shí)已有轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響了CRC的治療效果和生存率。

近年來，IGFs與多種腫瘤的相關(guān)性已成為研究的熱點(diǎn)之一。許多研究證實(shí)[6-7]，IGF具有較強(qiáng)的有絲分裂原活性和抗凋亡活性，可通過絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）兩個(gè)主要的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮作用，參與細(xì)胞的增殖分化，與結(jié)直腸癌及腺瘤的發(fā)生密切相關(guān)。IGFBP-3是IGFs的主要調(diào)節(jié)蛋白，可競(jìng)爭(zhēng)性地與IGF結(jié)合阻斷IGF信號(hào)通過IGF受體向核內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，間接抑制腫瘤生長(zhǎng)[8]。

MMPs是鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，可降解細(xì)胞外基質(zhì)和基膜。MMP-14作為MMPs中的膜型蛋白水解酶，主要分布在上皮細(xì)胞膜，有激活其他種類MMPs的能力，可通過直接、間接降解細(xì)胞外基質(zhì)和基膜，為腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。且有研究提示[2]，IGFBP-3可抑制胃癌細(xì)胞的遷移侵襲過程，該過程受到一系列因素的調(diào)控，包括基質(zhì)金屬蛋白酶家族（MMPs）及其抑制劑（TIMPs）。

本研究發(fā)現(xiàn)，與NM和CRA相比，CRC中IGFBP-3的表達(dá)明顯降低、MMP-14的表達(dá)明顯升高；同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，CRC中IGFBP-3、MMP-14表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期有關(guān)，且CRC中MMP-14與IGFBP-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。上述研究結(jié)果提示，IGFBP-3、MMP-14與CRC的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)；在CRC的發(fā)生發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移過程中，IGFBP-3與MMP-14可能具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)了CRC的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，IGFBP-3、MMP-14可能參與了CRC的發(fā)生發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移過程，二者能否作為CRC診斷和判斷預(yù)后的標(biāo)志物，有待于進(jìn)一步地深入研究。

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