劉志良 高 玟 黃傳生 羅慶豐 蔡 勇 鄒彎彎

中國胃癌每年新發(fā)病例數(shù)十萬，居消化道腫瘤發(fā)病率的第1位，死亡率占癌癥致死率的第2位[1]。 我國半數(shù)以上的患者在確診時(shí)已經(jīng)處于中晚期，手術(shù)和化療不能明顯延長此類患者的生存時(shí)間，分子靶向治療正成為此類患者的新選擇。TOGA研究是胃癌治療的一個(gè)里程碑，其確立了曲妥珠單抗在胃癌HER-2陽性患者中的治療地位[2]。胃癌中HER-2狀態(tài)的準(zhǔn)確評(píng)估是提高靶向治療療效的關(guān)鍵，免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)法是最常用的檢測(cè)方法。本研究應(yīng)用IHC法檢測(cè)胃鏡活檢腫瘤組織HER-2蛋白的表達(dá)，并觀察其表達(dá)與胃癌患者生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2013年12月至2016年8月江西省腫瘤醫(yī)院病理科存檔資料完整的胃癌活檢標(biāo)本1136例，其中男性850例，女性286例；年齡20～90歲，<60歲者457例，≥60歲者679例；所有患者胃鏡活檢前均未行放化療及生物治療。所有腫瘤活檢組織經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定6～48 h后石蠟包埋切片。

1.2 檢測(cè)方法

標(biāo)本均采用IHC法染色，一抗及二抗均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，一抗為鼠抗人單克隆抗體CerbB-2(克隆號(hào)：EP3)，試劑盒采用 EnVision 兩步法。檢測(cè)儀器：石蠟切片機(jī)(型號(hào)：Leica RM2235)，顯微鏡(型號(hào)：OLYMPUS BX51)等。

石蠟組織切片常規(guī)脫蠟和水化，加3%過氧化氫溶液室溫孵育10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；高溫高壓抗原修復(fù)；PBS緩沖液沖洗3×3 min；滴加一抗(鼠抗人單隆抗體CerbB-2)，4 ℃冰箱過夜；室溫下孵育20 min，PBS緩沖液沖洗3×3 min，滴加二抗(生物素化山羊抗小鼠IgG)，室溫孵育20 min；PBS緩沖液沖洗3×3 min，滴加新配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，陽性為棕黃色顆粒狀、定位于細(xì)胞膜；自來水沖洗，蘇木精復(fù)染，脫水透明，封片、觀察結(jié)果。

1.3 結(jié)果判讀

無反應(yīng)或任何腫瘤細(xì)胞無膜染色為0；腫瘤細(xì)胞團(tuán)微弱或隱約可見膜染色(無論染色的腫瘤細(xì)胞比例多少)為1+；腫瘤細(xì)胞團(tuán)有弱～中度的基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜染色(無論染色的腫瘤細(xì)胞比例多少)為2+；腫瘤細(xì)胞的基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜的強(qiáng)染色(無論染色的腫瘤細(xì)胞比例多少)為3+。0和1+為HER-2陰性，3+為HER-2陽性，2+為HER-2不確定。內(nèi)鏡活檢胃癌標(biāo)本雖不存在腫瘤細(xì)胞百分比界值，但要求至少含有5個(gè)陽性細(xì)胞的細(xì)胞簇。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER-2蛋白的表達(dá)

HER-2蛋白IHC 3+為13.2%(150/1136)，IHC 2+為18.8%(214/1136)，IHC 1+為8.0%(91/1136)，IHC 0為60.0%(681/1136)。

2.2 HER-2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

HER-2蛋白的表達(dá)與患者的性別、患病年齡和病變部位無關(guān)，與胃癌的分化程度和Lauren分型相關(guān)。見表1。

3 討論

中國兩項(xiàng)大型多中心研究數(shù)據(jù)顯示，中國胃癌患者的HER-2陽性率為12%～13%[3-4],本研究中HER-2的陽性率為13.2%，略高于多中心研究的數(shù)據(jù)。有研究認(rèn)為胃癌HER-2蛋白過表達(dá)與胃癌的病理類型和分化程度密切相關(guān)[5]，本研究結(jié)果顯示胃癌活檢組織HER-2蛋白表達(dá)與腫瘤分化程度和Lauren分型密切相關(guān)，在分化好的胃癌組織中陽性率高于分化差的，在Lauren分型中，腸型胃癌HER-2蛋白的表達(dá)要顯著高于彌漫型和混合型。已有多項(xiàng)研究數(shù)據(jù)表明，在腸型胃癌和胃食管結(jié)合部腺癌中，HER2的陽性率較高[6-8]，本研究中胃食管結(jié)合部腺癌HER-2蛋白的陽性率(15.0%)高于其他部位，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能和腫瘤的異質(zhì)性有關(guān)。胃癌的腫瘤異質(zhì)性比乳腺癌更常見，5%～30%的胃癌出現(xiàn)腫瘤異質(zhì)性[9],為避免腫瘤的異質(zhì)性對(duì)結(jié)果的影響，要求活檢時(shí)盡可能多點(diǎn)取材、必要時(shí)可再次檢測(cè)。