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胚胎移植技術是生物工程領域一項高新技術，該項技術可以最大限度地發(fā)揮純種優(yōu)秀母畜的繁殖潛力，大大加快良種畜群的繁育速度。為了充分發(fā)揮利用從進口杜泊綿羊的優(yōu)秀遺傳基因，解決進口種羊難問題。2016年9月～ 2017 年3月在內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特前旗，對進口杜泊綿羊進行胚胎移植工作，取得了良好效果。表明將胚胎移植技術應用于大規(guī)模畜牧生產(chǎn)進入商品化推廣階段是可行的。主要包括：總結、驗證應用胚胎移植技術生產(chǎn)杜泊綿羊的最佳時間；研究供體羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵所用激素的合適計量；應用、掌握綿羊子宮角輸精的方法，增強超數(shù)排卵的效果。

1 研究材料與方法

1.1 實驗動物與材料

1.1.1 實驗動物：選擇健康狀況良好、膘情適中、正常發(fā)情的進口杜泊母羊7只為供體；選擇12月齡以上、體格較大、發(fā)情正常、膘情適中、母性好、無生殖器官疾病的小尾寒羊100只作受體。

1.1.2 藥品：PGF2α（氯前列烯醇）， 丹東生產(chǎn)，.2mL：0.2mg/支；FSH（垂體促濾泡素），凍干粉末，加拿大生產(chǎn)，100 u/瓶；PMSG（注射用血促性素）寧波生產(chǎn)，1000單位/瓶；CIDR（陰道栓），新西。

1.1.3 器械：手術器械3套（手術刀、剪刀、組織鑷、止血鉗、縫合針、持針鉗、手術推車、手術燈、保定架等），生物顯微鏡，體視顯微鏡， 電刺激采精儀，水浴鍋，恒溫箱， ，開膣器，滅菌鍋，放栓槍、集精杯、耗材（注射器、醫(yī)用紗布、脫脂棉、一次性手術帽、一次性手術口罩、一次性乳膠手套、一次性平皿、一次性輸液器、噴漆等）。

2 試驗方法

2.1 地點：內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特前旗。

2.2 時間：2016年9月9日-2016年10月15日。

2.3 供、受體羊的選擇：以杜泊綿羊為供體，選擇的標準為健康無病、膘情適中、生殖器官發(fā)育良好、發(fā)情正常。小尾寒羊為受體，要求12月齡以上、體格較大、發(fā)情正常、膘情適中、母性好、無生殖器官疾病，且堅決不能接觸公畜。

2.4 供、受體羊的飼養(yǎng)管理：在試驗開始前60d組織人員將供、受體羊只單獨組群，并加強對供體飼養(yǎng)管理，每只羊每天在自然放牧的基礎上飼喂TMR顆粒飼料1 kg，以保證其營養(yǎng)供給。供、受體羊群圈舍需遠離公羊舍，以免公羊進入配種。

2.5 公羊的飼養(yǎng)管理：配種前1個月開始調(diào)整公羊日糧，將精料中的蛋白質含量提高，并且保證每天每只羊各飼喂1個胡蘿卜和1個雞蛋，配種前2周開始用電刺激采精法對公羊進行采精訓練，排出死精，準備配種。

2.6 供體母羊的超數(shù)排卵：采用FSH遞減法，1批處理，用孕酮陰道海綿栓處理10 d，開始注射FSH，每日間隔12 h，連續(xù)3 d。注射FSH的第1針時同時注射PMSG， 注射FSH的第5針時同時注射PG。注射最后一針時撤去CIDR。

2.7 供體母羊的發(fā)情鑒定和配種：要經(jīng)過早、晚兩次試情，并記錄記錄母羊的發(fā)情時間。將供體母羊與帶有試情布的公羊放于同一面積適當?shù)娜ι?，觀察試情公羊及供體母羊，當母羊站立不動接受試情公羊爬跨時，肌肉注射LH1mL/只，然后開始用腹腔鏡輸精的方式進行配種，并記錄配種時間和公母羊號，每次輸原精0.2 mL以上，要求精子活力達到0.3以上。

2.8 受體羊的同期發(fā)情處理：采用PGF注射法，試劑用量每次1mL/只，間隔9～10 d再注射一次PGF ，12 h后開始用公羊試情，并標記發(fā)情羊只，要準確記錄發(fā)情的時間。

2.9 胚胎的采集、檢查和鑒定：供體羊母羊子宮角配種后7d開始收集胚胎。供體羊手術前需空腹24h，將其綁縛于手術架后對手術部位剪毛消毒，麻醉，開始手術。在乳房前2 cm腹中線兩側切口，長度為2～3 cm。將食指和中指伸入腹腔內(nèi)引出子宮角和輸卵管。用18#～20#針頭在子宮角基部扎一小孔，將Fr 8-10沖卵管導入子宮角內(nèi)給沖卵管氣囊充氣2～5mL，拔出沖卵管內(nèi)芯，然后在宮管結合部將6#～8#針頭導入子宮角內(nèi)，用40mL注射器抽取沖卵液與頭皮針連接進行子宮沖胚?；厥找河忙?20 mm表面皿接收。供體母羊創(chuàng)口采用兩層縫合法，即腹膜與肌肉進行連續(xù)縫合，皮膚進行結節(jié)縫合?？p合皮膚前給皮下撒適量的青霉素，并肌注青霉素。注意：在整個手術沖胚移植過程中，不暴露卵巢，只是將輸卵管和傘部輕輕地導出，同時輕輕向上提，即可檢查左右側黃體情況。

胚胎收集以后放在顯微鏡下進行胚胎等級鑒定。A級胚胎形態(tài)完整，輪廓清晰，呈球形，分裂球大小均勻，結構緊湊，色調(diào)透明度良好，無附著的細胞和液泡或很少；B級輪廓清晰，色調(diào)和細胞密度良好，可見到一些附著的細胞和液泡，變性細胞占10%～30%；C級輪廓不清晰，色調(diào)發(fā)暗，結構松散，游離的細胞或液泡較多，變性細胞超過30%，但仍有一團細胞存活；D級胚胎變性細胞占75%左右，無組織結構。其中A、B、C等級的胚胎可用于移植，D級不可用。確定胚胎可用后，把胚胎移入含有新鮮PBS的小檢卵杯中準備短期內(nèi)移植。

2.10 胚胎移植：與供體羊相同，受體羊手術前需空腹24h，將其綁縛于手術架后對手術部位剪毛消毒，麻醉，開始手術。將受體羊腹腔切開一個2～3cm的小口子，食指和中指伸入腹腔，引出子宮角，并用手感覺黃體，發(fā)現(xiàn)有黃體后給該側子宮角移植胚胎， 子宮角兩側如都有黃體的可在兩側同時移植，兩側都無黃體的不移植，縫合創(chuàng)口即可?？p合皮膚前需要撒適量的青霉素，術后需要給每只羊肌注一定量的青霉素。

2.11 術后處理：手術兩天后要密切觀察供、受體羊的狀態(tài)，防止意外不良情況的產(chǎn)生。術后7 d供體羊需注射PG用以消除黃體。并繼續(xù)觀察受體羊的發(fā)情狀況，對第2情期后未返情的受體羊需要加強飼養(yǎng)管理，防止流產(chǎn)；對返情羊需從受體羊群中分離，并對其繼續(xù)配種。

3 研究結果

3.1 供體羊人工授精及胚胎獲得結果

腹腔鏡輸精技術是家畜品種改良工作中的一項新的繁育技術，在肉羊胚胎移植技術使用過程中，雖使用技術較為復雜，但與經(jīng)陰道進入子宮頸輸精相比具有受胎率高的顯著特點，因而在目前胚胎移植技術中被廣泛使用。本次研究采用腹腔鏡輸精技術使7只供體杜泊母羊全部受孕，并成功獲得胚胎。7只供體共獲得胚胎58枚，胚胎合格率為86%。

3.2 受體羊同期發(fā)情效果

同期發(fā)情技術就是利用激素制劑調(diào)整母畜的發(fā)情周期，使其在相對集中的時間內(nèi)發(fā)情。利用該技術可將受體羊的發(fā)情調(diào)整到一定時間內(nèi)同時進行，使供、受體羊的發(fā)情時間同步，為胚胎移植到受體后繼續(xù)發(fā)育創(chuàng)造必要的條件。本研究共用同期發(fā)情方法處理100只受體母羊，其中88只表現(xiàn)發(fā)情，發(fā)情率為88%。

3.3 受體羊妊娠及產(chǎn)羔結果

在接受胚胎移植的49只受體中，有35只受體被確認為妊娠，妊娠率為71.4%，產(chǎn)下黑頭杜泊羔羊35只。

4 杜泊綿羊胚胎移植研究討論

4.1 杜泊綿羊胚胎移植效益

以杜泊綿羊作供體，小尾寒羊做受體，利用胚胎移植技術，可充分發(fā)掘杜泊綿羊種羊的繁殖力潛力，在不影響供、受體母羊以后繁殖性能的前提下，每只母羊每年可多產(chǎn)4只純種羊，比自然繁殖率提高了3倍以上，每只杜泊種羊可多創(chuàng)造2萬元的經(jīng)濟效益。

4.2 胚胎移植技術效果分析

4.2.1 胚胎移植時間合適

本次試驗研究選取在文獻介紹胚胎移植成功率較高的秋季進行，小尾寒羊母羊受體的妊娠率達到71.4%，與吳曉東等用小尾寒羊移植杜泊供體試驗妊娠率的53.8%結果高出32.7%，高與昭通綿羊秋季試驗妊娠率68.6%結果。表明小尾寒羊在秋季移植的妊娠率要高于春季。

4.2.2 注重對受、供體母羊及公羊管理

對供體母羊科學管理的程度決定了提供胚胎的質量，而受體母羊的管理水平則關系到胚胎移植后妊娠率的高低，因此胚胎移植前期對供、受體母羊及其公羊進行了精心的飼養(yǎng)管理。胚胎移植手術完成以后，及時的對受體羊返情情況進行了認真細致的觀察，并將妊娠成功的母羊單獨組群，并進行精細管理，在妊娠后期加強了補飼，臨產(chǎn)前加強管理，對難產(chǎn)嗎、母羊予以人工輔助生產(chǎn)，從而保證了較高的產(chǎn)羔成活率；種公羊在注重營養(yǎng)保證精子質量的同時，要適時進行采精訓練，使其性欲和精液品質在配種時達到最佳。

4.2.3 其他說明

本次試驗采用內(nèi)窺鏡輸精法對供體種羊進行輸精，這種方法與陰道輸精法相比受胎率顯著的增加，從而保證了超數(shù)排卵的數(shù)量較高與質量較好。

作者單位：內(nèi)蒙古巴彥淖爾市家畜改良工作站