楊玥熹 俞東寧 方建東 顧振宇

(浙江省食品微生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院1，杭州 310018)(國(guó)家級(jí)食品工程與質(zhì)量安全實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心2，杭州 310018)

隨著生活水平的不斷提高，高脂肪、高熱量食品的攝入量增大，人類健康正受到肥胖、糖尿病等“富貴病”的威脅。已有研究表明，抗性淀粉(resistant starch，RS)能夠抵抗α-淀粉酶分解并且不被小腸吸收[1]，具有預(yù)防便秘，控制血糖，調(diào)節(jié)脂類和膽固醇代謝的作用[2]。目前，根據(jù)其來(lái)源和物理化學(xué)性質(zhì)的不同可將其分為5類：RS1(物理包埋淀粉)、RS2(抗性淀粉顆粒)、RS3(回生淀粉)、RS4(化學(xué)改性淀粉)和RS5(淀粉-脂類復(fù)合物)[3]?；厣矸?RS3)是食品中最常見(jiàn)的一類抗性淀粉。淀粉食物經(jīng)蒸煮后再冷卻，會(huì)有部分形成回生淀粉，熱加工工藝條件對(duì)回生淀粉的形成量及其結(jié)構(gòu)有影響，壓熱法是制備回生淀粉(RS3)的常用方法[4]。國(guó)際市場(chǎng)上現(xiàn)有的幾種抗性淀粉產(chǎn)品價(jià)格昂貴，如美國(guó)National starch Chemical Corporation、英國(guó)Opta food Ingredients、日本Matsutani Chemical Industry Corporation生產(chǎn)的抗性淀粉產(chǎn)品，皆為RS3型抗性淀粉。

近些年，已有研究初步證明，抗性淀粉可在人體大腸中被微生物發(fā)酵所利用，產(chǎn)生短鏈脂肪酸[6]，進(jìn)而對(duì)腸道微環(huán)境起到調(diào)節(jié)作用。Qin等[7]指出2型糖尿病患者均有中等程度的腸道微生態(tài)紊亂，且表現(xiàn)為產(chǎn)丁酸細(xì)菌種類的缺乏。由此推測(cè)，通過(guò)抗性淀粉對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)，從而控制腸道中短鏈脂肪酸的產(chǎn)量，可對(duì)2型糖尿病進(jìn)行控制。

國(guó)內(nèi)外已經(jīng)對(duì)抗性淀粉的發(fā)酵特性進(jìn)行了一定的研究，包括體外模擬和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)[8-9]。謝濤等[10]利用紅薯抗性淀粉進(jìn)行體外發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)抗性淀粉能夠選擇性的促進(jìn)人糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌群、糞鏈球菌群等益生菌的增殖。研究發(fā)現(xiàn)，抗性淀粉經(jīng)腸道菌群的發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸(SCFAs)，SCFAs的成分受到抗性淀粉原料種類及發(fā)酵菌種的影響[11-13]。在已有的體外模型中，人和動(dòng)物糞便的懸濁液常被用于模擬腸道環(huán)境[14-16]，而腸道內(nèi)容物懸濁液由于取樣不易而較少使用；腸道有益菌，尤其是乳酸菌屬發(fā)酵抗性淀粉的研究較多，而有關(guān)來(lái)源于不同菌屬的混合菌利用抗性淀粉發(fā)酵的研究較少。本研究用小鼠結(jié)腸內(nèi)容物懸液模擬結(jié)腸環(huán)境，研究玉米抗性淀粉體外發(fā)酵產(chǎn)酸的特性以及多種外源菌對(duì)產(chǎn)酸的影響，進(jìn)一步推動(dòng)抗性淀粉與腸道菌群相互調(diào)節(jié)作用的研究發(fā)展，以期為抗性淀粉和益生菌制劑的開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

玉米抗性淀粉(由高直鏈玉米淀粉制備的RS3型抗性淀粉，抗性淀粉含量≥80%)：上海國(guó)民淀粉公司。

營(yíng)養(yǎng)肉湯：青島海博生物技術(shù)有限公司；分析純的偏磷酸、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、甲酰胺、尿素、冰醋酸、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、甲醛、氯化鉀、氯化鈉、甘油、瓊脂糖：杭州匯普化學(xué)試劑有限公司。

嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、大腸埃希氏菌(Escherichiacoli.)、青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)：中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，編號(hào)分別為1.1878、1.3344、1.2190、1.2024。

1.2 儀器與設(shè)備

WH-1微型漩渦混合器：上海瀘西分析儀器廠有限公司；GC-2010氣相色譜儀：日本島津公司；SW-CJ-1FD潔凈工作臺(tái)：蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；LRH智能生化培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 小鼠腸道內(nèi)容物處理

將24只28日齡健康昆明小鼠進(jìn)行斷頸處理，解剖后將其結(jié)腸內(nèi)容物迅速裝入已滅菌的50 mL帶蓋離心管中并稱重，鼓入高純二氧化碳5 min后密封，置于-20 ℃冰箱內(nèi)保存。

參照朱翠蘭[17]的方法制備小鼠結(jié)腸內(nèi)容物菌懸液，略有修改。首先根據(jù)結(jié)腸內(nèi)容物的質(zhì)量，用無(wú)菌生理鹽水按1:10比例稀釋結(jié)腸內(nèi)容物，旋渦震蕩2 min；之后用4層紗布過(guò)濾，所得濾液為小鼠結(jié)腸內(nèi)容物菌懸液。依照表1中的條件，分別用LBS瓊脂培養(yǎng)基、BBL瓊脂培養(yǎng)基、紫紅膽鹽葡萄糖培養(yǎng)基、腸球菌培養(yǎng)基測(cè)定小鼠結(jié)腸內(nèi)容物懸液中乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸桿菌和腸球菌的數(shù)量。

1.3.2 菌種的活化與培養(yǎng)

將保存在甘油中的嗜酸乳桿菌、大腸埃希菌埃希氏菌、青春雙歧桿菌、糞腸球菌分別以2%(V/V)的接種量接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件見(jiàn)表1。待菌種活化3次完全恢復(fù)活力后，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表1 細(xì)菌培養(yǎng)基種類及其培養(yǎng)條件

1.3.3 活菌計(jì)數(shù)

在超凈工作臺(tái)中，吸取0.5 mL經(jīng)活化后的菌懸液加入到4.5 mL的無(wú)菌生理鹽水中，搖勻，作10-1～10-7稀釋梯度，用移液槍移取100 μL稀釋液，分別用無(wú)菌的涂布棒均勻地涂布于選擇性培養(yǎng)基上，并在相應(yīng)條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件如表1所示。取長(zhǎng)有20～200個(gè)菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.4 體外模擬發(fā)酵

根據(jù)表2所示實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)配制含有玉米抗性淀粉的肉湯培養(yǎng)基，分裝于250 mL錐形瓶中，每瓶分裝量100 mL。滅菌后鼓入高純CO2氣體，20 min后旋緊橡膠塞蠟封。用無(wú)菌注射器將1 mL小鼠結(jié)腸內(nèi)容物懸液(處理方法見(jiàn)1.3.1)注入各瓶培養(yǎng)基中，再依表2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)用無(wú)菌注射器注入外源菌懸液，搖勻后用注射器吸取5 mL的發(fā)酵液作為發(fā)酵0 min的檢測(cè)樣本，之后放入37 ℃厭氧培養(yǎng)箱中，以80～100 r/min速度振搖，在6、12、18、24、30 h時(shí)吸取發(fā)酵液5 mL作為檢測(cè)樣本，用于短鏈脂肪酸(SCFAs)含量的測(cè)定。

表2 體外模擬發(fā)酵實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

注：W/W#：玉米抗性淀粉干重/營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基干重；0?：未注入外源菌懸液而注入1 mL無(wú)菌蒸餾水；1*：嗜酸乳桿菌+青春雙歧桿菌；2*：嗜酸乳桿菌+大腸埃希氏菌；3*：嗜酸乳桿菌+糞腸球菌；4*：青春雙歧桿菌+大腸埃希氏菌；5*：青春雙歧桿菌+糞腸球菌；6*：糞腸球菌+大腸埃希氏菌。

1.3.5 短鏈脂肪酸(SFCAs)含量測(cè)定

樣品預(yù)處理：將0.2 g樣品和0.2 mL正己酸加入到1.6 mL無(wú)菌蒸餾水，混勻后加入0.4 mL的硫酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)約50%)和2 mL的無(wú)水乙醚，并放置于搖床上混勻30 min，接著3 000 r/min離心5 min。加入無(wú)水CaCl2除去殘留水分，移取上清液用于氣相色譜(GC)測(cè)定。GC測(cè)定參照連曉蔚[18]的方法，略有修改。檢測(cè)器為氫火焰檢測(cè)器(FID)；色譜柱為DB-FFAP；載氣為N2，分流比為10:1，流速為2 mL/min；燃燒爐溫度為240 ℃，進(jìn)樣量為2 μL；升溫程序：起始溫度120 ℃保持5 min，以10 ℃/min升溫至250 ℃并保留1 min。采用外標(biāo)法，乙酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=14.03X-0.405；丙酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=30.37X+0.784；丁酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=45.66X+2.048；上述標(biāo)準(zhǔn)曲線中Y代表峰面積，X代表短鏈脂肪酸濃度(mmol/L)，線性擬合顯示R2>0.999。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均是3次平行實(shí)驗(yàn)的平均值，采用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析和OriginPro 9.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 活菌計(jì)數(shù)

采用梯度稀釋平板涂布法測(cè)定的活化后用于培養(yǎng)基注射的外源菌液中的活菌數(shù)，平均測(cè)定3次，計(jì)算平均值，見(jiàn)表3。

小鼠結(jié)腸內(nèi)容物懸液中，乳酸桿菌為(4.36±0.04)×108CFU/mL，雙歧桿菌為(1.54±0.02)×109CFU/mL，腸桿菌為(1.62±0.01)×108CFU/mL，腸球菌為(8.12±0.03)×107CFU/mL。4種外源菌液中活菌數(shù)都顯著高于小鼠結(jié)腸內(nèi)容物懸液中相應(yīng)的各類細(xì)菌的活菌數(shù)。

表3 外源菌液的活菌計(jì)數(shù)

2.2 抗性淀粉含量對(duì)小鼠結(jié)腸菌群發(fā)酵產(chǎn)酸的影響

由圖1a、圖1b和圖1c中可見(jiàn)，添加3%的抗性淀粉后，相比于未添加抗性淀粉的組(實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2中序號(hào)1～4)，在發(fā)酵的各時(shí)間點(diǎn)，乙酸、丙酸和丁酸的含量都有顯著性(P<0.05)的增長(zhǎng)。隨著抗性淀粉含量的增加，短鏈脂肪酸的產(chǎn)量也提高。在發(fā)酵12 h后，添加9%抗性淀粉的組與添加3%、6%抗性淀粉的組相比，乙酸、丙酸和丁酸的含量都有顯著性(P<0.05)差異。添加3%和6%抗性淀粉的組在發(fā)酵18 h后，乙酸、丙酸和丁酸的含量沒(méi)有顯著性(P>0.05)差異。添加9%抗性淀粉的組，發(fā)酵18 h后丁酸仍有顯著增長(zhǎng)(P<0.05)。相較于3種短鏈脂肪酸，各取樣時(shí)間點(diǎn)，乙酸的含量要高于丙酸和丁酸的含量。在12 h前，丙酸的含量要高于丁酸，而在發(fā)酵后期丁酸的含量要高于丙酸。說(shuō)明抗性淀粉能夠被腸道微生物利用，發(fā)酵產(chǎn)短鏈脂肪酸，與汪婕等[19]探究結(jié)果相似。Haenen等[20]給公豬喂養(yǎng)抗性淀粉后，發(fā)現(xiàn)公豬的腸道微生物變化具有顯著性差異，其中丁酸的產(chǎn)生菌增殖率有明顯的增加，因而腸道中丁酸的含量增加。

2.3 單一外源菌對(duì)小鼠結(jié)腸菌群發(fā)酵產(chǎn)酸的影響

由圖2a、圖2b和圖2c中可見(jiàn)，在肉湯培養(yǎng)中添加各實(shí)驗(yàn)外源菌后(實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2中序號(hào)5-9，序號(hào)5為空白組)，在各取樣時(shí)間點(diǎn)與空白組相比，丙酸的含量沒(méi)有顯著性變化(P>0.05)；添加大腸埃希氏菌組的乙酸含量在6、12 h顯著下降(P<0.05)，添加糞腸球菌組的乙酸含量在6 h顯著下降(P<0.05)；添加大腸埃希氏菌組的丁酸含量在各測(cè)試時(shí)間點(diǎn)都有顯著下降(P<0.05)，添加嗜酸乳桿菌組的丁酸含量在6、12、18、30 h也有顯著下降(P<0.05)。

圖1 抗性淀粉添加量對(duì)小鼠結(jié)腸菌群發(fā)酵產(chǎn)乙酸(a)、丙酸(b)和丁酸(c)的影響

由此可見(jiàn)，單獨(dú)添加本實(shí)驗(yàn)中的某一種外源菌并不能顯著提升發(fā)酵產(chǎn)物中短鏈脂肪酸的含量，甚至產(chǎn)生反效果。

2.4單一外源菌對(duì)小鼠結(jié)腸菌群利用抗性淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸的影響

為了研究外源菌對(duì)于小鼠結(jié)腸菌群利用抗性淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸的影響，在含抗性淀粉的培養(yǎng)基中加入小鼠結(jié)腸懸濁液后，再加入不同的單一外源菌種(實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2中序號(hào)10-14)。如圖3a所示，未添加外源菌的抗性淀粉在模擬結(jié)腸環(huán)境中單獨(dú)發(fā)酵，產(chǎn)生的乙酸含量最高可達(dá)12.96 mmol/L，但是當(dāng)發(fā)酵體系中添加嗜酸乳桿菌后，乙酸的含量顯著增加，最高時(shí)為24.26 mmol/L。與未添加外源菌組相比，在添加青春雙歧桿菌、大腸埃希氏菌和糞腸球菌后，發(fā)酵產(chǎn)物中的乙酸含量變化不大。朱翠蘭[17]也研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)外援乳酸菌和人體的糞便共同體外模擬腸道發(fā)酵也有相同影響產(chǎn)生短鏈脂肪酸的情況，添加乳酸桿菌能夠促進(jìn)乙酸含量的增加。

如圖3b所示，未添加外源菌的抗性淀粉在模擬結(jié)腸環(huán)境中單獨(dú)發(fā)酵，產(chǎn)生的丙酸含量最高可達(dá)5.19 mmol/L。與未添加外源菌組相比，當(dāng)發(fā)酵體系中添加雙歧桿菌或糞腸球菌后，丙酸的含量顯著增加(P<0.05)，最高時(shí)分別達(dá)可9.57和9.14 mmol/L；在添加嗜酸乳桿菌時(shí)，發(fā)酵產(chǎn)物中的丙酸含量在6、12 h沒(méi)有顯著性變化；18 h及以后有顯著性的增長(zhǎng)。在添加大腸埃希氏菌的發(fā)酵體系中，產(chǎn)生的丙酸含量與未添加外源菌組相比，沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。綜上可知，青春雙歧桿菌和糞腸球菌能夠協(xié)同腸道微生物發(fā)酵玉米抗性淀粉產(chǎn)生丙酸，而其他的外源菌不具有此種發(fā)酵特性。

如圖3c所示，未添加外源菌的抗性淀粉在模擬結(jié)腸環(huán)境中單獨(dú)發(fā)酵，產(chǎn)生的丁酸含量最高可達(dá)6.44 mmol/L。但是當(dāng)發(fā)酵體系中添加雙歧桿菌和糞腸球菌后，丁酸的含量增加，最高時(shí)分別為9.81 mmol/L和7.89 mmol/L。與未添加外源菌組相比，添加嗜酸乳桿菌后，發(fā)酵產(chǎn)物中的丁酸含量在發(fā)酵6 h后顯著增加，在12 h后減少，且在12、18 h時(shí)有顯著性差異(P<0.05)。添加大腸埃希氏菌的發(fā)酵體系中產(chǎn)生的丙酸含量顯著低于未添加外源菌組，在18 h后其含量約外源菌組的50%。因此，可以得知青春雙歧桿菌和糞腸球菌能夠協(xié)同腸道微生物發(fā)酵玉米抗性淀粉產(chǎn)生丁酸，而其他的外源菌不具有此種發(fā)酵特性。但是其中大腸埃希氏菌作為發(fā)酵優(yōu)勢(shì)菌時(shí)會(huì)抑制腸道微生物發(fā)酵抗性淀粉產(chǎn)丁酸。

圖2 單一外源菌對(duì)小鼠結(jié)腸菌群發(fā)酵產(chǎn)乙酸(a)、丙酸(b)和丁酸(c)的影響

圖3 單一外源菌對(duì)小鼠結(jié)腸菌群利用抗性淀粉發(fā)酵產(chǎn)乙酸(a)、丙酸(b)和丁酸(c)的影響

2.5混合外源菌對(duì)小鼠結(jié)腸菌群利用抗性淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸的影響

腸道微生物是一個(gè)包含種類繁多的微生物的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)，不同菌種之間相互制約，相互依存或是相互促進(jìn)，對(duì)于相同的發(fā)酵底物，通過(guò)不同的菌群發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)物組成將會(huì)發(fā)生變化。因此，本研究嘗試將兩種不同的外源菌混合添加到抗性淀粉發(fā)酵體系中，檢測(cè)發(fā)酵產(chǎn)物中短鏈脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)的變化(實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2中序號(hào)15-20)。如圖4a所示，在發(fā)酵體系中嗜酸乳桿菌和青春雙歧桿菌混合添加時(shí)，其發(fā)酵產(chǎn)物乙酸含量最高為29.86 mmol/L，對(duì)比圖2a可得，明顯高于嗜酸乳桿菌單一發(fā)酵時(shí)乙酸的產(chǎn)量；嗜酸乳桿菌與大腸埃希氏菌，或是嗜酸乳桿菌和糞腸球菌混合添加時(shí)，乙酸含量相比于嗜酸乳桿菌單一發(fā)酵時(shí)略有下降，但差異不顯著；相比于大腸埃希氏菌或糞腸球菌單獨(dú)發(fā)酵時(shí)有顯著提高(P<0.05)。其他混合菌群相對(duì)于各自單獨(dú)添加時(shí)，乙酸產(chǎn)量沒(méi)有顯著的變化。因此可以推斷，青春雙歧桿菌與嗜酸乳桿菌在發(fā)酵抗性淀粉產(chǎn)乙酸時(shí)有一定的協(xié)同作用。

由圖4b和圖4c可知，在體外發(fā)酵體系中添加青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌，或是青春雙歧桿菌和糞腸球菌時(shí)，其發(fā)酵產(chǎn)物丙酸含量最高值分別為13.45 mmol/L和12.12 mmol/L，顯著高于青春雙歧桿菌單一發(fā)酵時(shí)丙酸含量的最高值(P<0.05)，增加了大約40.5%和26.6%；青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌混合后其發(fā)酵產(chǎn)物丁酸含量也顯著性高于青春雙歧桿菌單一發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的量(P<0.05)，青春雙歧桿菌和糞腸球菌混合后丁酸的含量高青春雙歧桿菌單一發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的量，但增幅有限。嗜酸乳桿菌和糞腸球菌組合發(fā)酵時(shí)丙酸和丁酸含量比嗜酸乳桿菌單獨(dú)發(fā)酵時(shí)高，比糞腸球菌單獨(dú)發(fā)酵時(shí)低。相較于嗜酸乳桿菌、青春雙歧桿菌單一菌種發(fā)酵，當(dāng)嗜酸乳桿菌、青春雙歧桿菌分別與大腸埃希氏菌組合后，在各時(shí)間點(diǎn)的丙酸和丁酸的產(chǎn)量都呈現(xiàn)顯著性下降(P<0.05)，下降最明顯的是嗜酸乳桿菌和大腸埃希氏菌組合，其丁酸產(chǎn)量低至大腸桿菌單獨(dú)發(fā)酵產(chǎn)酸的水平；青春雙歧桿菌與大腸埃希氏菌組合后丁酸含量的下降幅度大于丙酸含量的下降幅度。糞腸球菌與大腸埃希氏菌組合后，在各測(cè)試時(shí)間點(diǎn)較未糞腸球菌發(fā)酵時(shí)的丙酸產(chǎn)量有顯著性下降(P<0.05)，丁酸含量有也有下降但并不顯著(P>0.05)。由此可以推斷，青春雙歧桿菌與嗜酸乳桿菌或糞腸球菌發(fā)酵在產(chǎn)丙酸、丁酸能力上有一定的協(xié)同作用，而大腸埃希氏菌會(huì)抑制其他菌種發(fā)酵產(chǎn)丙酸和丁酸，抑制效果依其他菌種不同而不同，對(duì)嗜酸乳桿菌的抑制效果最強(qiáng)。

3 結(jié)論

在通過(guò)營(yíng)養(yǎng)肉湯和小鼠結(jié)腸菌懸液構(gòu)建的模擬結(jié)腸環(huán)境中，添加玉米抗性可以顯著提升乙酸、丙酸和丁酸的生成量?？剐缘矸垠w外發(fā)酵產(chǎn)酸模式與腸道菌群種類相關(guān)，嗜酸乳桿菌、青春雙歧桿菌和糞腸球菌在一定程度上能夠促進(jìn)發(fā)酵體系中短鏈脂肪酸的產(chǎn)生，而大腸埃希氏菌則會(huì)抑制發(fā)酵體系中乙酸、丙酸和丁酸的產(chǎn)生。上述菌種在兩兩組合后，又顯示出不同的作用效果。嗜酸乳桿菌、青春雙歧桿菌產(chǎn)乙酸、丙酸和丁酸的協(xié)同增效作用最為明顯；大腸埃希氏菌顯示出較強(qiáng)的抑制產(chǎn)酸作用，尤其在和嗜酸乳桿菌組合時(shí)。

綜上可見(jiàn)，通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群可以調(diào)控抗性淀粉發(fā)酵產(chǎn)短鏈脂肪酸，嗜酸乳桿菌和青春雙歧桿菌組合在發(fā)酵玉米抗性淀粉產(chǎn)乙酸、丙酸和丁酸顯示出較好地協(xié)同作用。進(jìn)一步還需要還需通過(guò)研究菌群結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化、菌群來(lái)源性差異等，解釋不同菌種或菌種組合間發(fā)酵抗性淀粉產(chǎn)生短鏈脂肪酸差異的原因，以推動(dòng)抗性淀粉和益生菌類功能食品的開(kāi)發(fā)及效用的提升。

注：1：嗜酸乳桿菌+青春雙歧桿菌；2：嗜酸乳桿菌+大腸埃希氏菌；3：嗜酸乳桿菌+糞腸球菌；4：青春雙歧桿菌+大腸埃希氏菌；5：青春雙歧桿菌+糞腸球菌；6：糞腸球菌+大腸埃希氏菌。

圖4 混合外源菌對(duì)小鼠結(jié)腸菌群利用抗性淀粉發(fā)酵產(chǎn)乙酸(a)、丙酸(b)和丁酸(c)的影響

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