張紅巖 郭興蓮 楊 濤 劉 榮 黃宇寧 季一山 王 棟宗緒曉*

（1中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所，北京100081；2青海大學(xué)新農(nóng)村發(fā)展研究院，青海西寧 810016；3青海省海東市互助縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，青海海東 810500）

蠶豆（Vicia fabaL.）為豆科蝶形花亞科巢菜屬的唯一栽培種，為越年生（秋播）或一年生（春播）草本植物（鄭卓杰，1997）。據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)，2005～2014年全世界干蠶豆平均生產(chǎn)面積為243.25萬hm2，總產(chǎn)量429.80萬t，其中中國(guó)生產(chǎn)面積為96.99萬hm2，總產(chǎn)量164.877萬t，分別占世界的35.76%和38.36%（FAO，2017）。蠶豆在我國(guó)已有2 000余年的栽培歷史，是一種重要的糧食、蔬菜和飼料、綠肥兼用作物（馬鈺，2012），是豆類蔬菜中重要的食用豆之一。

種質(zhì)資源的多樣性是育種工作的基礎(chǔ)。早期，人們主要采用形態(tài)學(xué)的方法對(duì)蠶豆的遺傳多樣性進(jìn)行研究（Robertson & El-Sherbeeny，1991；Polignano et al.，1999），該方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)，但鑒定周期較長(zhǎng)、易受環(huán)境影響（王偉 等，2009）。隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展，RAPD（Link et al.，1995）、AFLP（Zeid et al.，2004）、ISSR（Fernandez et al.，2002；Terzopoulos & Bebeli，2008）等分子標(biāo)記技術(shù)被應(yīng)用于蠶豆種質(zhì)資源的遺傳多樣性研究之中。Link等（1995）利用RAPD標(biāo)記對(duì)3個(gè)蠶豆自交系群體進(jìn)行研究，結(jié)果表明，地中海種和歐洲小粒種被分為截然不同的2組，歐洲大粒種介于兩者之間。Zong等（2009）利用10對(duì)AFLP引物對(duì)204份國(guó)內(nèi)冬性蠶豆資源和39份國(guó)外冬性資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，聚類分析和主成分分析結(jié)果表明，中國(guó)蠶豆資源與國(guó)外蠶豆資源界限明顯。王海飛等（2011）利用11對(duì)ISSR標(biāo)記對(duì)國(guó)內(nèi)外蠶豆資源的遺傳多樣性進(jìn)行分析，揭示了中國(guó)春播型蠶豆資源遺傳多樣性較為豐富，美洲蠶豆種質(zhì)資源遺傳基礎(chǔ)相對(duì)狹窄。Gong等（2011）利用11對(duì)EST-SSR標(biāo)記對(duì)29份國(guó)內(nèi)外蠶豆品種進(jìn)行遺傳多樣性分析，發(fā)現(xiàn)參試中國(guó)蠶豆品種遺傳背景較為狹窄。目前，我國(guó)蠶豆種質(zhì)資源的研究水平較為落后，其龐大的基因組嚴(yán)重限制了從分子水平研究蠶豆資源遺傳多樣性的步伐。

基于全自動(dòng)遺傳分析儀的SSR熒光標(biāo)記具有省時(shí)、高通量、高準(zhǔn)確度等特點(diǎn)，目前已應(yīng)用于農(nóng)作物的遺傳多樣性分析。雍洪軍等（2009）基于該項(xiàng)技術(shù)對(duì)我國(guó)7個(gè)省的90份糯玉米進(jìn)行遺傳多樣性分析，初步將供試玉米品種劃分為3個(gè)類群。王瑞云等（2017）利用15對(duì)特異性SSR熒光標(biāo)記掃描我國(guó)11個(gè)省的132份糜子資源，聚類分析可將參試糜子資源劃分成4類。

蠶豆染色體組2n=12，基因組片段大小約為13 000 kb，基因組龐大、基因組學(xué)研究滯后、開發(fā)的SSR標(biāo)記十分有限。本試驗(yàn)利用中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所冷季食用豆類課題組自主開發(fā)的99對(duì)SSR熒光標(biāo)記引物，對(duì)102份國(guó)內(nèi)育成蠶豆品種（品系）及優(yōu)異種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行系統(tǒng)研究，旨在揭示中國(guó)代表性蠶豆品種（品系）和種質(zhì)資源間的遺傳多樣性差異，為我國(guó)蠶豆育種產(chǎn)業(yè)的快速推進(jìn)、科學(xué)合理選配親本及挖掘和利用優(yōu)異資源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試蠶豆材料共計(jì)102份，其中青海育成品種（品系）27個(gè)、云南育成品種19個(gè)、江蘇育成品種6個(gè)、優(yōu)異種質(zhì)資源50份。優(yōu)異種質(zhì)資源主要是指綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良、具有抗病蟲性及抗逆性等特殊性狀的蠶豆資源。參試材料均取自國(guó)家種質(zhì)資源中期庫，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所提供，2016年11月種植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所網(wǎng)室內(nèi)。參試材料具體信息見表1。

1.2 SSR熒光標(biāo)記

利用中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所冷季食用豆類課題組構(gòu)建的蠶豆SSR遺傳連鎖圖譜，經(jīng)8%非變性凝膠電泳多次篩選，獲得在連鎖群上均勻分布、多態(tài)性較高、PCR擴(kuò)增較穩(wěn)定的99對(duì)SSR標(biāo)記，標(biāo)記的5′端分別用FAM（藍(lán)色）、HEX（綠色）熒光染料標(biāo)記。SSR引物合成及PCR擴(kuò)增產(chǎn)物熒光檢測(cè)均委托北京梓熙生物科技有限公司。2×TaqPCR Master Mix購(gòu)自北京康潤(rùn)誠(chéng)業(yè)生物科技有限責(zé)任公司。DNA Marker購(gòu)自北京莊盟國(guó)際生物基因科技有限公司。

1.3 DNA提取

每份參試材料選擇生長(zhǎng)良好的4個(gè)單株，取幼嫩葉片混合后，采用改良的CTAB法（Wang et al.，2015）提取DNA，提取緩沖液中加入一定量的水溶性PVP和β-羥基乙醇（Gentile et al.，2017；Sokol et al.，2017），可以有效防止酚類物質(zhì)的氧化作用。采用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，采用NanoDrop 2000軟件（Yang et al.，2015）檢測(cè)DNA濃度，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果將其稀釋到工作液濃度（20～30 ng·μL-1）后于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 SSR-PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物熒光檢測(cè)

采用10 μL的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中2×TaqPCR Master Mix 5 μL，2 μmol·L-1的上、下游引物各 1 μL，DNA（30 ng·μL-1）模板 1.5 μL，ddH2O 2.5 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性35 s，55～60 ℃退火40 s，72 ℃延伸45 s，共32個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min，10 ℃保溫7 min。

將FAM（藍(lán)色）和HEX（綠色）熒光標(biāo)記的PCR產(chǎn)物用超純水稀釋25倍，分別取等體積的上述2種稀釋液混合，吸取1 μL混合液、0.1 μL LIZ500分子量?jī)?nèi)標(biāo)和8.9 μL去離子甲酰胺分別加入到DNA分析儀專用深孔板孔中；然后在PCR儀上95 ℃變性5 min，取出后立即置于碎冰上，冷卻15 min左右；瞬時(shí)離心10 s，在ABI3700 DNA遺傳分析儀上進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用DNA Collection和Genemapper軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)收集和分析，建立相應(yīng)數(shù)值數(shù)據(jù)庫。采用PopGenversion 1.32軟件（孫源文 等，2012）計(jì)算群體的等位變異數(shù)（observed number of alleles，Na）、有效等位變異數(shù)（effective number of alleles，Ne）、Shannon信息指數(shù)（I）。采用PowerMarker 3.25軟件計(jì)算標(biāo)記位點(diǎn)的多態(tài)性信息量（polymorphism information content，PIC）， 以 鄰 接 法（neighborjoining）計(jì)算參試材料間Nei’s遺傳距離，進(jìn)行聚類分析并用FigTree軟件（Rambaut，2009）做樹狀聚類圖。標(biāo)記系數(shù)（marker index，MI）按Senior等（1998）的公式MI=Allele×PIC計(jì)算，Allele為該引物的等位基因數(shù)。采用Structure 2.2軟件（Evanno et al.，2005）進(jìn)行群體遺傳結(jié)構(gòu)分析，Burnin Period和after Burnin各為10 000，K值為1～9，每個(gè)K值各運(yùn)行15次。利用GenALEX 6軟件（Peakall &Smouse，2006）計(jì)算材料間的遺傳距離并進(jìn)行主成分（PCA）分析。

表1 參試蠶豆類型及來源地

2 結(jié)果與分析

2.1 遺傳多樣性分析

102 份國(guó)內(nèi)蠶豆育成品種（品系）及優(yōu)異種質(zhì)在99個(gè)SSR位點(diǎn)（表2）共檢測(cè)出937個(gè)等位變異，每對(duì)引物平均檢測(cè)出4～19個(gè)等位變異，平均為9.46個(gè)。99個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性信息量PIC值變化范圍為0.38～0.88，平均為0.63；標(biāo)記系數(shù)MI變化范圍為1.74～15.40，平均為6.19；有效等位變異變化范圍為1.79～9.22，平均為3.41；Shannon信息指數(shù)變化范圍為0.79～2.44，平均為1.45。其中，標(biāo)記SSR12192的等位變異最多（19個(gè)），PIC值為0.78，MI值為14.77，有效等位變異為4.98，Shannon信息指數(shù)為2.01；SSR13513、SSR10910與EST2045的等位變異均為4個(gè)，它們的PIC值、MI值、有效等位變異與Shannon信息指數(shù)也相應(yīng)較低。

表明等位基因數(shù)、多態(tài)性信息量PIC、MI值、有效等位基因數(shù)與Shannon信息指數(shù)整體呈現(xiàn)出一致的變化趨勢(shì)。

表2 99對(duì)SSR標(biāo)記在102份蠶豆材料中的遺傳多樣性參數(shù)

2.2 不同種質(zhì)間的遺傳關(guān)系

2.2.1 聚類分析 基于NJ聚類法，102份參試材料在遺傳距離為0.324時(shí)被分成兩大類（圖1）。第一大類全部為青海蠶豆品種（品系），表現(xiàn)為春播生態(tài)類型。第二大類為云南、江蘇育成品種和蠶豆優(yōu)異種質(zhì)資源，整體表現(xiàn)為秋播生態(tài)類型。來源于青海的品種（品系）與其他供試材料界限較為明顯，可能由于育成品種的骨干親本多以當(dāng)?shù)貎?yōu)異農(nóng)家種為主，或者在獨(dú)特的地理環(huán)境下長(zhǎng)期自然選擇的結(jié)果。來源于青海的兩份具有抗逆特性的蠶豆資源F83和F100與青海育成品種（品系）并沒有聚類在一起，可能是由于引種所致，這兩份資源是否為外來資源還需進(jìn)一步驗(yàn)證。國(guó)內(nèi)外蠶豆優(yōu)異種質(zhì)資源與云南和江蘇蠶豆品種聚類在一起，這為我國(guó)秋播型蠶豆育種研究、科學(xué)選配親本及挖掘和利用優(yōu)異資源提供了依據(jù)。

圖1 102份蠶豆材料的NJ聚類圖

由表3可以看出，優(yōu)異蠶豆種質(zhì)資源和不同省份蠶豆品種的等位變異不同，其中優(yōu)異蠶豆資源組群最高，其次為青海組群和云南組群，江蘇組群最低。有效等位變異最高為優(yōu)異蠶豆資源，其次為青海組群和云南組群，江蘇組群最低。Shannon信息指數(shù)變化趨勢(shì)與有效等位變異相同，優(yōu)異蠶豆資源＞青海組群＞云南組群＞江蘇組群。綜合各組群間的遺傳多樣性參數(shù)可知，優(yōu)異蠶豆資源遺傳多樣性較高，其次為青海組群和云南組群，江蘇組群遺傳多樣性相對(duì)最低。

表3 優(yōu)異蠶豆種質(zhì)與不同省份蠶豆品種（品系）間遺傳多樣性參數(shù)

由表4可以看出，優(yōu)異種質(zhì)資源與云南品種和青海品種（品系）之間的親緣關(guān)系相對(duì)較近，與江蘇品種的親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，各蠶豆組群之間的親緣關(guān)系從某種程度上反映了優(yōu)異種質(zhì)資源在蠶豆主要產(chǎn)區(qū)的適應(yīng)性。青海品種（品系）與江蘇品種、云南品種親緣關(guān)系相對(duì)較近，云南品種與江蘇品種之間親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)。綜合來看，不同地理來源的蠶豆材料具有一定的地域生態(tài)性。

表4 優(yōu)異蠶豆種質(zhì)與不同省份蠶豆品種（品系）組群的遺傳相似系數(shù)（右上）與遺傳距離（左下）

2.2.2 群體結(jié)構(gòu)分析 采用Structure 2.2軟件對(duì)102份參試材料進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)分析，因后驗(yàn)概率值〔lnP（D）〕隨亞群數(shù)的增大而增大，故采用基于ΔK的最大似然估計(jì)確定適宜亞群數(shù)。結(jié)果表明，102份參試材料在K=3時(shí)ΔK出現(xiàn)峰值，即參試材料從群體結(jié)構(gòu)上可被分為3個(gè)亞群（圖2）。進(jìn)一步研究Structure軟件分析得到的亞群和地理生態(tài)型間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，亞群Ⅰ主要包括青海全部品種（品系）和小部分優(yōu)異種質(zhì)資源；亞群Ⅱ主要包括云南大部分品種以及小部分優(yōu)異種質(zhì)資源；亞群Ⅲ主要包括江蘇全部品種、大部分優(yōu)異種質(zhì)資源以及小部分云南品種?？梢?，亞群分類結(jié)果與參試材料地理來源及生態(tài)類型存在一定程度的相關(guān)性。

圖2 102份蠶豆材料的群體遺傳結(jié)構(gòu)圖

2.2.3 主成分分析 主成分分析結(jié)果與Structure群體遺傳結(jié)構(gòu)分析結(jié)果基本一致。102份蠶豆材料呈現(xiàn)出交叉分布的現(xiàn)象，在一定程度上說明其遺傳基礎(chǔ)較為廣泛（圖3）。第一大類主要以云南育成品種為主，中間混雜個(gè)別優(yōu)異種質(zhì)資源；第二大類全部為青海育成品種（品系）；第三大類主要為大部分優(yōu)異種質(zhì)資源以及全部江蘇育成品種。

圖3 102份參試蠶豆材料的PCA分析

3 結(jié)論與討論

3.1 SSR熒光標(biāo)記技術(shù)

SSR熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)利用不同熒光基團(tuán)染料（例如HEX、ROX、TET、FAM、Texas、Red）標(biāo)記引物，通過全自動(dòng)DNA分析測(cè)序儀精確分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的片段大小。傳統(tǒng)的銀染法經(jīng)濟(jì)，但靈敏度較低、數(shù)據(jù)的有效整合性較差，同一膠板或不同膠板上樣品譜帶間相對(duì)位置難以有效識(shí)別，嚴(yán)重制約了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。相對(duì)而言，SSR熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)具有高通量、高靈敏度、高準(zhǔn)確性、數(shù)據(jù)一致性高等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)不同板數(shù)樣品間數(shù)據(jù)的有效整合。目前，該項(xiàng)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于玉米（張全芳 等，2017）、枸杞（尹躍 等，2017）、水稻（王玲等，2015）、甘藍(lán)型油菜（周夢(mèng)妍 等，2015）、高粱（王瑞 等，2015）等作物。郝晨陽等（2005）利用24對(duì)SSR標(biāo)記擴(kuò)增小麥基因組，通過銀染法檢測(cè)到235個(gè)等位變異，每對(duì)引物平均檢測(cè)到3～20個(gè)等位變異，平均為9.8個(gè)；基于SSR熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)到312個(gè)等位變異，每對(duì)引物平均檢測(cè)到4～24個(gè)等位變異，平均為13.0個(gè)。通過分析兩種SSR分型方法，相對(duì)于銀染技術(shù)，熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)可以檢測(cè)到更多的等位變異，檢測(cè)效果更為理想，靈敏度更高，更適于當(dāng)前作物遺傳多樣性和指紋圖譜構(gòu)建的分析與研究。

3.2 蠶豆遺傳多樣性研究進(jìn)展

早期人們主要通過蠶豆的主要農(nóng)藝性狀（生育期、種皮顏色、株高、籽粒大小、分枝數(shù)、有效莢數(shù)等）開展遺傳多樣性研究。康智明等（2015）對(duì)6份國(guó)內(nèi)秋播型蠶豆品種和6份國(guó)外主栽品種進(jìn)行農(nóng)藝性狀和品質(zhì)的遺傳多樣性分析，結(jié)果表明品種的親緣關(guān)系與地理來源關(guān)系不大。徐東旭等（2010）通過分析國(guó)內(nèi)外不同地理來源的637份蠶豆種質(zhì)資源的18個(gè)農(nóng)藝性狀，推斷出參試資源由三大基因庫組成，國(guó)內(nèi)春、冬性蠶豆種質(zhì)資源間以及國(guó)內(nèi)外資源間具有較大的遺傳變異。隨著分子標(biāo)記技術(shù)的日益成熟，不同類型的分子標(biāo)記被應(yīng)用到蠶豆基礎(chǔ)性研究之中。本試驗(yàn)利用99對(duì)熒光SSR標(biāo)記分析102份中國(guó)代表性蠶豆品種（品系）和優(yōu)異種質(zhì)，聚類分析顯示春播型和秋播型蠶豆界限較為明顯，這與前人研究結(jié)果一致。優(yōu)異蠶豆資源的遺傳多樣性明顯高于育成品種（品系），優(yōu)異種質(zhì)資源與云南品種和青海品種（品系）之間的親緣關(guān)系相對(duì)較近，從某種程度說明優(yōu)異種質(zhì)整體上可以適應(yīng)兩地生態(tài)環(huán)境。在今后蠶豆育種過程中，建議育種家們擴(kuò)大種質(zhì)資源的篩選，充分挖掘和利用優(yōu)異種質(zhì)資源，提高育種效率。

3.3 種質(zhì)資源創(chuàng)新是蠶豆育種的關(guān)鍵

優(yōu)異的種質(zhì)資源是培育優(yōu)良作物品種的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)，調(diào)查、收集和保存蠶豆種質(zhì)資源顯得尤為重要。蠶豆作為世界上第六大類食用豆類作物，我國(guó)擁有豐富的蠶豆種質(zhì)資源，同時(shí)也是全球蠶豆栽培面積和總產(chǎn)量最高的國(guó)家。當(dāng)前我國(guó)蠶豆育種主要目標(biāo)以產(chǎn)量為主，部分骨干親本的過度使用造成了蠶豆品種間的遺傳基礎(chǔ)狹窄。本試驗(yàn)通過對(duì)102份蠶豆品種（品系）和優(yōu)異種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，云南、青海和江蘇育成品種界限較為明顯，表明蠶豆具有生態(tài)適應(yīng)性狹窄和極強(qiáng)的地域生態(tài)特點(diǎn)，這一結(jié)論與龐雯等（2002）的研究結(jié)果一致。加強(qiáng)地方蠶豆品種整理與鑒定、引種、系統(tǒng)選育以及雜交育種是當(dāng)前蠶豆育種的主要方式。尚啟兵等（2003）通過引種和系統(tǒng)選育成功選育出蠶豆新品系Divine，該品系具有單寧含量低、高蛋白、多抗性以及適應(yīng)性廣等特點(diǎn)，目前已經(jīng)成為多個(gè)蠶豆新品種的育種親本。呂梅媛等（2016）通過雜交育種方式成功選育出適應(yīng)性廣、產(chǎn)量較高、耐寒的蠶豆新品種云豆690。充分挖掘和利用蠶豆優(yōu)異種質(zhì)資源，合理選配雜交組合是蠶豆獲得高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要途徑。

郝晨陽，王蘭芬，賈繼增，董玉琛，張學(xué)勇．2005．SSR熒光標(biāo)記和銀染技術(shù)的比較分析．作物學(xué)報(bào)，31（2）：144-149．

康智明，鄭開斌，徐曉俞，李愛萍．2015．不同蠶豆品種農(nóng)藝及品質(zhì)性狀的遺傳多樣性分析．福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，30（3）：249-252．

呂梅媛，王麗萍，楊峰，代程，于海天，何玉華．2016．廣適、高蛋白優(yōu)質(zhì)蠶豆新品種“云豆690”選育．中國(guó)科技成果，17（18）：17-19．

馬鈺．2012．蠶豆SSR標(biāo)記的開發(fā)及遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建﹝碩士論文﹞．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院．

龐雯，楊示英，宗緒曉，蔡慶生，韋廣天．2002．廣西原產(chǎn)和外引蠶豆種質(zhì)資源鑒定評(píng)價(jià)．植物遺傳資源學(xué)報(bào)，3（4）：39-43．

尚啟兵，王志剛，李云霞，溫啟錄，張耀輝，宗緒曉．2003．蠶豆新品系Divine的篩選和利用．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，（4）：21-22．

孫源文，陳鈺輝，劉富中，張映，連勇．2012．基于SSR分子標(biāo)記的栽培種茄子遺傳多樣性分析．中國(guó)蔬菜，（22）：17-23．

王海飛，關(guān)建平，孫雪蓮，馬鈺，宗緒曉．2011．世界蠶豆種質(zhì)資源遺傳多樣性和相似性的ISSR分析．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，44（5）：1056-1062．

王玲，左示敏，張亞芳，陳宗祥，黃世文，潘學(xué)彪．2015．中國(guó)南方八?。ㄗ灾螀^(qū)）水稻紋枯病菌群體遺傳結(jié)構(gòu)的SSR分析．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，48（13）：2538-2548．

王瑞，張福耀，程慶軍，田承華，凌亮．2015．利用SSR熒光標(biāo)記構(gòu)建20個(gè)高粱品種指紋圖譜．作物學(xué)報(bào)，41（4）：658-665．

王瑞云，季煦，陸平，劉敏軒，許月，王綸，王海崗，喬治軍．2017．利用熒光SSR分析中國(guó)糜子遺傳多樣性．作物學(xué)報(bào)，43（4）：530-548．

王偉，楊文鵬，張文龍．2009．貴州48個(gè)玉米雜交種及其親本SSR指紋圖譜的構(gòu)建與分析．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，37（11）：1-8．

徐東旭，姜翠棉，宗緒曉．2010．蠶豆種質(zhì)資源形態(tài)標(biāo)記遺傳多樣性分析．植物遺傳資源學(xué)報(bào)，11（4）：399-406．

尹躍，安巍，趙建華，李彥龍，樊云芳，曹有龍．2017．枸杞品種SSR熒光指紋圖譜構(gòu)建及遺傳關(guān)系分析．西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，32（1）：137-141．

雍洪軍，張世煌，張德貴，李明順，李新海，郝轉(zhuǎn)芳，劉曉鑫，白麗，謝傳曉．2009．利用SSR熒光標(biāo)記分析90個(gè)糯玉米地方品種的遺傳多樣性．玉米科學(xué)，17（1）：6-12．

張全芳，梁水美，李燕，劉艷艷，范陽陽，郭慶法，魯守平，步迅．2017．基于熒光SSR標(biāo)記的玉米自交系遺傳結(jié)構(gòu)解析．植物遺傳資源學(xué)報(bào)，18（1）：19-31．

鄭卓杰．1997．中國(guó)食用豆類學(xué)．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社：93-140．

周夢(mèng)妍，吳金鋒，許鯤，李鋒，陳碧云，伍曉明．2015．甘藍(lán)型油菜核心種質(zhì)和新品種（系）的SSR等位變異分析．分子植物育種，（6）：1248-1258．

Evanno G，Regnaut S，Goudet J．2005．Detecting the number of clusters of individuals using the software structure：a simulation study．Molecular Ecology，14（8）：2611-2620．

FAO．2017．FAO Statistical Database．http：//www.fao.org．

Fernandez M，F(xiàn)igueiras A，Benito C．2002．The use of ISSR and RAPD markers for detecting DNA polymorphism，genotype identification and genetic diversity among barley cultivars with known origin．Theoretical and Applied Genetics，104（5）：845-851．

Gentile F，Arcaro A，Pizzimenti S，Daga M，Cetrangolo G P，Dianzani C，Lepore A，Graf M，Ames P，Barrera G．2017．DNA damage by lipid peroxidation productions：implications in cancer，inflammation and autoimmunity．AIMS Genetics，4（2）：103-137．

Gong Y M，Xu S C，Mao W H，Li Z Y，Hu Q Z，Zhang G W，Ding J．2011．Genetic diversity analysis of faba bean（Vicia fabaL．）based on EST-SSR markers．Agricultural Sciences in China，10（6）：838-844．

Link W，Dixkens C，Singh M，Schwall M，Melchinger A E．1995．Genetic diversity in European and Mediterranean faba bean germplasm revealed by RAPD markers．Theoretical and Applied Genetics，90（1）：27-32．

Peakall R，Smouse P E．2006．Genalex 6：genetic analysis in Excel．Population genetic software for teaching and research．Molecular Ecology Notes，6（1）：288-295．

Polignano G B，Alba E，Uggenti P，Scippa G．1999．Geographical patterns of variation in Bari faba bean germplasm collection．Genetic Resources and Crop Evolution，46（2）：183-192．

Rambaut A．2009．FigTree．v1.3.1．Available：http：//tree.bio.ed.ac.uk/software．

Robertson L D，El-Sherbeeny M．1991．Distribution of discretely scored descriptors in a pure line faba bean（Vicia fabaL．）germplasm collection．Euphytica，57（1）：83-92．

Senior M L，Murphy J P，Goodman M M，Stuber C W．1998．Utility of SSR for de-termining genetic similarities and relationships in maize using an agarose gel system．Crop Science，（38）：1088-1098．

Sokol E，Nijenhuis M，Sjollema K A，Jonkman M F，Pas H H，Giepmans B N G．2017．Particle bombardment of ex vivo skin to deliver DNA and express proteins．Methods in Molecular Biology，1559：107-118．

Terzopoulos P J，Bebeli P J．2008．Genetic diversity analysis of Mediterranean faba bean（Vicia fabaL．）with ISSR markers．Field Crops Research，108（1）：39-44．

Wang F，Yang T，Burlyaeva M，Li L，Jiang J，F(xiàn)ang L，Redden R，Zong X．2015．Genetic diversity of grasspea and its relative species revealed by SSR markers．PLoS One，10（3）：34-38．

Yang T，F(xiàn)ang L，Zhang X Y，Hu J G，Bao S Y，Hao J J，Li L，He Y H，Jiang J Y，Wang F，Tian S F，Zong X X．2015．Highthroughput development of SSR markers from pea（Pisum sativumL．）based on next generation sequencing of a purified Chinese commercial variety．PLoS One，10：103-107．

Zeid M，Sch?n C C，Link W．2004．Hybrid performance and AFLP-based genetic similarity in faba bean．Euphytica，139（3）：207-216．

Zong X，Liu X，Guan J，Wang S，Liu Q，Paull J G，Redden R．2009．Molecular variation among Chinese and global winter faba bean germplasm．Theoretical and Applied Genetics，118（5）：971-978．