蘇 欣 然， 劉 春 瑩， 王 越， 魚 紅 閃， 金 鳳 燮

( 大連工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院, 遼寧 大連 116034 )

0 引 言

人參(PanaxginsengC. A. Meryer)屬五加科(Araliaceae)多年生草本植物[1]，是重要的藥用植物[2]，已被廣泛使用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，人參皂苷是人參主要活性成分[3-4]，具有抗腫瘤、保護(hù)心血管、免疫系統(tǒng)等多種藥理活性[5-6]。

林下參是將人參種子撒播到森林地里、自然生長的野生山參[7]。目前，對林下參中皂苷含量和分布的研究很少，主要集中在人參主要皂苷的研究。鄭毅男[8]測定了兩種林下參中主要皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量；孫海等[9]分析了林下參中9種常見人參皂苷和3種丙二?；藚⒃碥盏暮浚荤姺禁惖萚10]從林下參中分離得到9種人參皂苷單體，李海軍等[11]分離得到8種皂苷單體，但沒有研究各皂苷含量。孫芳等[12]分析了移山參各部位皂苷組成與比例，檢測出含有稀有皂苷C-K、Rh1和Rh2。大部分研究并沒有涉及稀有皂苷，且大多數(shù)也沒有測定林下參中稀有皂苷的含量。

近年來，野山參資源瀕臨枯竭，林下參作為其替代品[13]，產(chǎn)量、銷量逐年上升。目前，我國吉林的15～30年林下參已開始大量產(chǎn)出。但市場上除了林下參原料、林下參酒等產(chǎn)品外，沒有其他相關(guān)制品。為了更好地利用林下參資源，本實驗對桓仁產(chǎn)的15年林下參和撫松產(chǎn)的25年林下參各部位的皂苷(包括稀有皂苷Rg2、Rg3、Rh1、Rh2、Rk2、Rh3等)的含量分布進(jìn)行了研究，以期為林下參加工、利用及其新制品的開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 原料與設(shè)備

15年生林下參，產(chǎn)自遼寧省桓仁縣；25年生林下參，產(chǎn)自吉林省撫松縣；人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rb1、Rd、Rg1、Rg2、Rg3、Rh1、Rh2、Rd，本實驗室提供(純度≥98%)。Silica gel 60-F254薄層層析板，德國Merck公司； 甲醇、乙腈，色譜純；其余試劑均為分析純。

美國Waters 2695高效液相色譜，美國Waters 2996二極管陣列檢測器及Empower色譜工作站；華譜Unitary系列C18色譜柱(5 μm，Φ4.6 mm×250 mm)。

1.2 方 法

1.2.1 林下參各部位皂苷的提取

將25年和15年林下參的蘆頭、主根、須根粉碎，于甲醇中加熱浸泡。將浸出液合并、過濾，減壓干燥后，用石油醚(沸點60～90 ℃)充分脫脂；加入少量去離子水溶解提取物，再用水飽和正丁醇充分萃取皂苷，合并萃取液后加入去離子水反復(fù)洗脫，除去糖類等物質(zhì)；將提取物減壓蒸干、稱重，即得人參總皂苷[14]。

1.2.2 薄層層析法測定不同部位皂苷成分

用刻度毛細(xì)管吸取樣品的甲醇溶液，點樣于薄層層析板，吹干后置于盛有展開劑的層析缸中展開，待展開至邊緣時取出、吹干，10% H2SO4加熱顯色。展開劑為體積比7∶3∶0.5的氯仿、甲醇、水混合液。

1.2.3 高效液相色譜法檢測兩種林下參各部位皂苷成分

精確稱取兩種林下參各部位總皂苷各4 mg，分別溶于1 mL色譜甲醇，配制成質(zhì)量濃度為4 mg/mL 溶液；同時配制1 mg/mL的對照用人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后進(jìn)行HPLC檢測。流動相：乙腈(A)-水(B)；0～20 min，20% A；20～31 min，0～32% A；31～40 min，32% ～ 43% A；40～70 min，43%～100% A；進(jìn)樣量，10 μL；柱溫，35 ℃；體積流量，1.0 mL/min；檢測波長，203 nm。

將各部位總皂苷譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜對照，以絕對保留時間定性，以峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量，確定其組成與含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 兩種林下參不同部位總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定

將20 g主根、10 g須根、10 g蘆頭粉碎，采取甲醇浸泡、石油醚脫脂、水飽和正丁醇萃取法提取各部位中的人參總皂苷。實驗重復(fù)3次，得到總皂苷平均質(zhì)量及質(zhì)量分?jǐn)?shù)如表1所示。從表1可知，同一種林下參中，總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的部位為蘆頭，主根中總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低；蘆頭中總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為主根的2倍；比較這兩種林下參相同部位的總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)，相差不大。

表1 兩種林下參蘆頭、主根、須根中人參總皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

Tab.1 Total ginsenosides contents of rhizome, main root and fibrous roots in two kinds of wild ginseng

參量撫松25年林下參桓仁15年林下參蘆頭主根須根蘆頭主根須根m/g10．7920．4710．9111．1320．3314．40m1/g0．830．710．710．740．580．71w/%7．683．476．486．672．884．93注：m為人參原料質(zhì)量，m1為總皂苷質(zhì)量，w為總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2.2 薄層層析法測定不同部位人參皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

從圖1可以看出，兩種林下參的蘆頭、主根、須根中均主要含有原人參二醇類皂苷Rb1、Rd等和原人參三醇類皂苷Re、Rg1，還含有少量的Rg2、Rg3、Rh1、Rh2等人參稀有皂苷。

1～7，人參皂苷Rb1、Rd、Rg1、Rg2、Rg3、Rh1、Rh2標(biāo)準(zhǔn)品；8～10，15年林下參蘆頭、主根、須根；11～13，25年林下參蘆頭、主根、須根

圖1 兩種林下參各部位皂苷成分的TLC圖

Fig.1 Components of ginsenoside in two different wild ginseng determined by TLC

2.3 高效液相色譜法測定不同部位人參皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

從圖2中可知，兩種林下參的蘆頭、主根、須根中，均含有7種人參主要皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd和8種人參稀有皂苷20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、20(R)-Rg3、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3。

按色譜峰面積計算各種皂苷在總皂苷中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果列于表2。從表2中可以看出，撫松產(chǎn)的25年林下參蘆頭與主根中Rb1、Rg1、Re的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，占總皂苷的54%、52%；須根中Rb1、Rc、Rg1、Re的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，占總皂苷的52%?；溉十a(chǎn)的15年林下參蘆頭中Rb1、Rg1、Re的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，占總皂苷的48%，主根和須根中Re、Rb1、Rc的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，分別占總皂苷的40%、45%。兩種林下參各部位中主要皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)由高到低依次為蘆頭、主根、須根；隨著林下參生長年限的增加，各部位中主要皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)也逐漸增加。

人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品出峰時間(min)：Rg1，28.899；Re，29.085；Rf，37.406；Rb1，38.626；Rc，39.466；Rg2，39.820；Rb2，40.367；20(S)-Rh1，40.345；20(R)-Rh1，41.083；Rd，42.264；20(S)-Rh2，57.556；20(R)-Rh2，57.960；Rk2，60.982；Rh3，61.262

圖2 兩種林下參各部位總皂苷的HPLC圖譜

Fig.2 Total ginsenosides in different wild ginseng and different parts determined by HPLC

兩種林下參各部位所含的8種稀有皂苷中， 20(S)-Rh2、Rk2、Rh3的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，占總皂苷的5%～9%；15年生林下參各部位中稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)由高到低依次為蘆頭、須根、主根；25年生林下參各部位稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)由高到低依次為蘆頭、主根、須根。

表2 兩種林下參蘆頭、主根、須根中各皂苷的組成

Tab.2 Components of ginsenosides in rhizome, main root and fibrous roots in two kinds of wild ginseng

%

3 結(jié) 論

通過對不同產(chǎn)地的15年和25年生林下參各部位皂苷組成的研究，得到了7種人參主要皂苷和8種高活性人參稀有皂苷在林下參各部位中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分布情況。

15年生林下參各部位中，主要皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)由高到低依次為蘆頭、主根、須根，稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)由高到低依次為蘆頭、須根、主根；25年生林下參各部位中，主要皂苷和稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)由高到低依次為蘆頭、主根、須根。林下參各部位中人參主要皂苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與生長年限成正比；但稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化情況不同，林下參蘆頭和須根中，人參稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨著生長年限的增加而減少，只有主根中稀有皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨年限的增長而增加。

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