楊蕾蕾，李文良，毛 立，許寶軍，唐朝忠，楊 恒，郝 飛，張紋紋，邵 坤，李華春，江杰元*

藍(lán)舌病是由藍(lán)舌病病毒（Bluetongue Virus，BTV）引起的一種通過媒介昆蟲（如庫蠓、伊蚊等）傳播的非接觸性病毒性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病，我國將其列為一類動物傳染?。?］。BTV屬于呼腸弧病毒環(huán)狀病毒屬病毒，目前已確認(rèn)存在至少27種血清型［2－3］，主要感染綿羊、山羊和牛等，反芻動物亦能呈現(xiàn)隱性感染。其以庫蠓為媒介進(jìn)行傳播，能傳播該病的庫蠓在我國有4種，主要分布在北緯40°以南的大部分省區(qū)，云南、廣東、廣西、湖北、安徽、四川、內(nèi)蒙古、河北、江蘇和遼寧等省均檢出BTV血清學(xué)陽性動物［4－9］。隨著全球氣候的變化、生態(tài)環(huán)境的改變和國際動物貿(mào)易的逐年增加，藍(lán)舌病在全球范圍內(nèi)有擴大流行的趨勢，對畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展構(gòu)成威脅。

江蘇處在亞熱帶和暖溫帶的氣候過渡地帶，夏季炎熱多雨、地勢低平、河湖眾多，適合庫蠓等多種吸血媒介昆蟲的滋生和藍(lán)舌病的傳播。但是，自1989年報道該病病例以來，尚未有藍(lán)舌病病例和病原分離的報道。為了解BTV在江蘇的流行情況，筆者在之前的研究中對江蘇部分地區(qū)牛、羊血清樣品進(jìn)行BTV抗體檢測，發(fā)現(xiàn)在江蘇某些縣市存在較高的抗體陽性率，并通過設(shè)置陰性小牛作為監(jiān)控動物監(jiān)測血清學(xué)抗體轉(zhuǎn)陽的試驗證明BTV感染的存在［8］。本研究在此基礎(chǔ)上，繼續(xù)對2014～2016年江蘇省部分地區(qū)羊血清進(jìn)行BTV抗體檢測，并統(tǒng)計流行病學(xué)數(shù)據(jù)，并在監(jiān)測監(jiān)控點設(shè)置陰性羊作為監(jiān)控動物，同時采用燈光誘捕法捕捉監(jiān)測點蚊蠓，監(jiān)測2014～2016年度BTV抗體和蚊蠓數(shù)量的變化趨勢，以進(jìn)一步了解江蘇省藍(lán)舌病血清學(xué)流行情況，為該病的預(yù)警預(yù)報及防控提供科學(xué)資料。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

羊血清樣品隨機采自江蘇省9個市的規(guī)?；B(yǎng)殖場及農(nóng)村散養(yǎng)戶，共419份，置于－20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。采集時間為2014～2016年。

1.2 檢測方法

血清樣品用云南省熱帶亞熱帶動物病毒病重點實驗室提供的BTV C－ELISA試劑盒，按照說明書進(jìn)行抗體檢測。

1.3 監(jiān)控點選擇和感染監(jiān)測

根據(jù)之前的血清學(xué)調(diào)查和分析，選擇盱眙縣桂五鎮(zhèn)某養(yǎng)殖戶作為監(jiān)控點，投放BTV陰性山羊5只，與監(jiān)控點養(yǎng)殖戶羊混群放牧，不使用殺蟲藥。分別于2014～2015年、2015～2016年、2016～2017年 3個年度，每年5～10月每周采血1次，11月～次年4月每月采血1次，收集血清，采用1.2所述方法檢測學(xué)血清中BTV抗體，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果分析BTV感染的動態(tài)變化規(guī)律。

1.4 捕捉蚊蠓方法

采用燈光誘捕法捕捉蚊蠓。利用國產(chǎn)“蚊博士”牌捕蚊器進(jìn)行改造，加一個蠓籠防止庫蠓飛出。將改造好的捕蚊器掛在羊圈的合適位置。庫蠓和蚊的成蟲往往在日出前和日落后的活動最頻繁，故將捕蚊器的工作時間段設(shè)置為日落前1 h至日出后1 h。收集蟲盒內(nèi)的蟲子時，先拔掉電源插頭，然后將蟲盒旋轉(zhuǎn)擰下，將蟲盒放入－20℃冰箱20 min，將蟲子凍僵，再倒入平皿內(nèi)置于4℃冰箱中，待運輸分揀。捕捉蚊蠓時間自2014～2016年的5～8月份，共計12個月。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清學(xué)檢測

采用BTV C－ELISA抗體檢測試劑盒檢測9個地區(qū)共419份血清BTV樣品，總體陽性率為7.2%（30／419）。統(tǒng)計分析各地陽性樣品數(shù)量和比例（表1），發(fā)現(xiàn)徐州、淮安、宿遷、揚州均能檢到BTV抗體，其中淮安市陽性率最高，為24.6%（16／65），其次為徐州和宿遷。此結(jié)果與之前的檢測結(jié)果基本相符［8］，從地理上判斷，發(fā)現(xiàn)BTV抗體陽性地區(qū)主要集中在江蘇中北部。

表1 江蘇省部分地區(qū)BTV抗體檢測

2.2 監(jiān)控點羊群BTV抗體檢測及分析

BTV C－ELISA試劑盒檢測監(jiān)控點采集的山羊血清，檢測結(jié)果見圖1。2015～2016年度和2016～2017年度，每年自6月開始，羊BTV抗體檢測出現(xiàn)陽性結(jié)果，至12月，監(jiān)控羊群檢測全為BTV抗體陽性，且BTV抗體水平穩(wěn)定直至監(jiān)測結(jié)束。只有2014～2015年度，直至次年1月份才有一只羊轉(zhuǎn)陽。

2.3 監(jiān)控點蚊蠓的捕捉與分類統(tǒng)計

采用燈光誘捕法在監(jiān)控點捕捉蚊蠓，分類統(tǒng)計結(jié)果見表2。每年6月份開始蚊蠓數(shù)量開始激增，7月份蚊蠓量達(dá)到高峰。2014年蚊蠓數(shù)量明顯偏少。江蘇省2014年6～9月份的氣溫持續(xù)偏低，尤其是8月6日～9月16日出現(xiàn)持續(xù)低溫陰雨天氣。這些氣候因素可能影響了蚊蠓的活動。

3 討論

我國對動物蟲媒病毒包括BTV的研究相對滯后，對BTV的分布、流行情況及變化規(guī)律缺乏系統(tǒng)的研究。自1979年張念祖等在中國云南省師宗縣首次發(fā)現(xiàn)藍(lán)舌病并成功分離到病毒后，在1983～1993年間，湖北、安徽、廣西、四川、山西等地先后報道了該病，但之后鮮有研究報道。受全球氣候變化及畜產(chǎn)品貿(mào)易增長的影響，藍(lán)舌病呈現(xiàn)出向北方、高緯度蔓延的流行趨勢。因此，有必要對BTV流行分布情況進(jìn)行監(jiān)測。

圖1 監(jiān)控動物抗體消長曲線

表2 監(jiān)控點蚊蠓捕捉數(shù)統(tǒng)計 只

江蘇省地處亞熱帶和暖溫帶的氣候過渡地帶，氣候溫暖潮濕，適合蟲媒滋生和疾病傳播。本研究針對江蘇省內(nèi)9個市現(xiàn)有羊群進(jìn)行藍(lán)舌病感染血清學(xué)調(diào)查。調(diào)查的羊群未接種過BTV疫苗，所以血清陽性率能夠反映其自然感染情況。調(diào)查結(jié)果顯示，江蘇省9個地區(qū)共419份血清樣品中BTV樣品陽性率為0～24.6%，總體陽性率為7.2%（30／419）。此結(jié)果基本與之前的檢測結(jié)果相符［8］，這說明部分地區(qū)存在BTV感染，但感染程度有差異。從地理上判斷，發(fā)現(xiàn)BTV抗體陽性地區(qū)主要集中在江蘇中北部。

根據(jù)先前的調(diào)查結(jié)果，選擇陽性率高的盱眙縣某養(yǎng)殖戶作為監(jiān)控點，該地為丘陵山區(qū)，靠近洪澤湖，且附近有水庫，有利于蟲媒病毒的傳播。牛、綿羊、山羊感染BTV多為持續(xù)性或隱性感染，往往不表現(xiàn)特征性臨床癥狀，這給BTV流行病學(xué)監(jiān)測與防控帶來困難。在高陽性率地區(qū)投入BTV抗體陰性動物作為“監(jiān)控動物”或“哨兵動物”，通過監(jiān)測監(jiān)控動物感染情況可以評價BTV流行情況。本研究發(fā)現(xiàn)2015～2016年度和2016～2017年度，每年自6月開始，羊BTV抗體檢測出現(xiàn)陽性結(jié)果，至12月監(jiān)控羊群檢測全為BTV抗體陽性，且BTV抗體水平穩(wěn)定直至監(jiān)測結(jié)束。BTV主要通過媒介昆蟲——庫蠓傳播，庫蠓的活動季節(jié)大致在5～10月間，其生活史正與監(jiān)控羊群BTV抗體轉(zhuǎn)陽的時間相吻合。監(jiān)控動物BTV抗體全部轉(zhuǎn)陽，而且BTV抗體抑制率趨近穩(wěn)定，說明了該地區(qū)存在BTV感染，且通過媒介昆蟲互相傳播流行普遍，這也與血清學(xué)調(diào)查結(jié)果相符。只有2014～2015年度，直至次年1月份才有1只羊轉(zhuǎn)陽。同時通過對監(jiān)控點蚊蠓的捕捉和分類，發(fā)現(xiàn)2014年蚊蠓數(shù)量明顯偏少。庫蠓的孳生常常受環(huán)境因素的影響，特別是溫度、濕度、降雨量等。庫蠓成蟲平時隱蔽于或者多棲息于樹叢、雜草等避風(fēng)、避光處，下雨時不活動。當(dāng)溫度、光照適合且無風(fēng)時，成蟲即成群飛出［10］。江蘇省2014年6月到9月份的氣溫持續(xù)偏低，尤其是8月6日～9月16日出現(xiàn)持續(xù)低溫陰雨天氣，這些氣候因素可能干擾了庫蠓的活動，從而影響了藍(lán)舌病的發(fā)生。

本研究在之前工作的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對2014～2016年江蘇省部分地區(qū)羊血清進(jìn)行BTV抗體檢測并統(tǒng)計流行病學(xué)數(shù)據(jù)，獲得了可信的流行病學(xué)資料，在一定程度上反映了羊藍(lán)舌病近年來在江蘇的流行情況。并于2014～2017上半年度在監(jiān)控點對監(jiān)控動物的BTV感染情況進(jìn)行定點監(jiān)控，發(fā)現(xiàn)在庫蠓活動高峰時期的持續(xù)低溫陰雨天氣，對BTV的感染可能有嚴(yán)重干擾，為進(jìn)一步研究和防治藍(lán)舌病等蟲媒病提供科學(xué)依據(jù)。

［1］陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

［2］ Sun E C，Huang L P，Xu Q Y，et al.Emergence of a novel bluetongue virus serotype， China 2014［J］.Transbound Emerg Dis， 2016， 63（6）： 585－589.

［3］ Savini G，Puggioni G，Meloni G，et al.Novel putative Bluetongue virus in healthy goats from Sardinia， Italy［J］.Infect Genet Evol， 2017， 51： 108－117.

［4］覃紹敏，白安斌，吳健敏，等.廣西山羊藍(lán)舌病血清學(xué)調(diào)查及流行區(qū)域分布的影響因素分析［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2011，33（1）：28－31.

［5］王慧，覃嵐，尹鑫，等.2012年貴州羊藍(lán)舌病血清流行病學(xué)調(diào)查及影響因素分析［J］.中國動物檢疫，2013，30（11）：52－56.

［6］呂敏娜，林麗琴，陳琴苓，等.廣東地區(qū)藍(lán)舌病流行病學(xué)初步研究［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2015，37（7）：499－501.

［7］林麗琴，呂敏娜，孫銘飛，等.廣東某奶牛場藍(lán)舌病病毒分離株血清型與基因型的鑒定［J］.中國獸醫(yī)科學(xué)，2015，45（6）：615－621.

［8］毛立，李文良，楊蕾蕾，等.江蘇省部分地區(qū)牛羊藍(lán)舌病血清學(xué)調(diào)查及監(jiān)控［J］.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2015，28（6）：2784－2787.

［9］張勝男，李華春，朱建波，等.2015年內(nèi)蒙古地區(qū)藍(lán)舌病及流行性出血熱流行病學(xué)調(diào)查及血清型鑒定［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2016，38（12）：939－943.

［10］虞以新.中國蠓科昆蟲［M］.第 2卷.北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2005：816－1323.