李遠(yuǎn)，王桂霞,胡大鵬，Abidallah Eltayib，張麗雅，張祥，陳源，陳德華

（揚(yáng)州大學(xué)江蘇省作物遺傳生理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇揚(yáng)州225009）

轉(zhuǎn)Bt基因棉花是利用現(xiàn)代生物技術(shù)將蘇云金桿菌的Bt基因?qū)朊藁ㄖ仓牦w內(nèi)培育的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品[1]，是當(dāng)今世界種植面積最大、分布范圍最廣的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物之一[2-5]。轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉表達(dá)的Bt蛋白，對(duì)棉鈴蟲等鱗翅目害蟲有較好殺蟲效果，能減少化學(xué)農(nóng)藥的用量和使用次數(shù)，降低植棉成本，減少農(nóng)藥對(duì)農(nóng)田生態(tài)環(huán)境的破壞[6]，具有較好的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益[7]。雖然Bt棉在生產(chǎn)上被大面積應(yīng)用，但在種植過程中暴露諸多問題，主要表現(xiàn)在2個(gè)方面：即抗蟲性存在時(shí)空差異[8-11]且易受環(huán)境影響[12-15]。環(huán)境因子中溫度是最重要的影響因子之一。在棉花產(chǎn)量形成的關(guān)鍵時(shí)期——盛鈴期常常出現(xiàn)高溫天氣，因此研究高溫特別是晝夜變溫下高溫對(duì)棉鈴Bt殺蟲蛋白表達(dá)量的影響，對(duì)于準(zhǔn)確預(yù)測(cè)Bt棉的抗蟲性及時(shí)防治棉鈴蟲具有重要意義。長江中下游地區(qū)棉花盛鈴期常常受高溫氣候的影響，白天的溫度高達(dá)37～40℃，研究晝夜變溫下高溫對(duì)Bt棉鈴殼殺蟲蛋白表達(dá)量及相關(guān)的氮代謝生理機(jī)制，可為高溫逆境下Bt棉的抗蟲性安全應(yīng)用和合理防治棉鈴蟲提供科學(xué)依據(jù)。鈴殼作為棉鈴蟲等相關(guān)害蟲危害棉鈴的首食器官，研究其殺蟲蛋白含量在高溫下的變化是確定棉鈴抗蟲能力高低的首要依據(jù)。前人研究發(fā)現(xiàn)高溫脅迫能顯著降低Bt棉鈴殼中殺蟲蛋白表達(dá)量，且隨著溫度升高，下降的幅度變大[16-18]。路獻(xiàn)勇等[19]研究Bt棉的抗蟲性對(duì)不同晝夜溫差變化的響應(yīng)機(jī)理時(shí)發(fā)現(xiàn)，白天高溫35℃，夜間低溫18℃，能顯著影響B(tài)t棉殺蟲蛋白表達(dá)量和幼蟲死亡率，且隨著脅迫時(shí)間的延長，殺蟲蛋白含量和幼蟲死亡率急劇下降。陳源等[20]研究表明在38℃以上高溫時(shí)，Bt棉棉蕾中殺蟲蛋白表達(dá)量顯著下降，且隨溫度升高，殺蟲蛋白含量下降幅度增大。周桂生等[21]研究發(fā)現(xiàn)同一高溫下，脅迫時(shí)間越長，棉鈴蟲取食后的死亡率越低。王永慧等[22]通過研究不同生育期溫濕度脅迫及脅迫解除后Bt棉殺蟲蛋白表達(dá)量的變化發(fā)現(xiàn)，溫濕度脅迫顯著抑制Bt棉殺蟲蛋白的表達(dá)。張美俊等[23]研究表明，較高溫度和適宜土壤含水量有利于Bt蛋白前期快速降解。呂春花[24]研究表明，棉蕾中Bt殺蟲蛋白含量在環(huán)境溫度達(dá)38℃以上時(shí)急劇下降。陳德華等[25]研究表明，鈴期37℃高溫脅迫24 h和48 h，會(huì)引起棉株葉片中Bt殺蟲蛋白含量顯著下降。雖然溫度對(duì)Bt棉殺蟲蛋白表達(dá)量的影響的研究較多，但都是在溫度不變的條件下進(jìn)行的，而棉花的生長是在晝夜變溫的環(huán)境下。已有報(bào)道表明[26]，在高溫脅迫終止后，棉花葉片的Bt蛋白含量都有一定程度的恢復(fù)。因此本研究探討晝夜變溫條件下高溫對(duì)鈴殼Bt蛋白表達(dá)量影響能更準(zhǔn)確反映自然環(huán)境下棉鈴抗蟲能力的變化。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2011―2012年在揚(yáng)州大學(xué)江蘇省栽培生理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)采用盆栽種植方式進(jìn)行。盆缽用土為大田土經(jīng)自然風(fēng)干、過篩去雜后的砂質(zhì)壤土，用水沉實(shí)，含有機(jī)質(zhì)1.88%，水解氮 134.7 mg·kg－1、速效磷 22.5 mg·kg－1和速效鉀81.3 mg·kg－1， 土壤 N、P、K 含量分別為 108 mg·kg－1、40.5 mg·kg－1和 82.0 mg·kg－1。 盆缽直徑 35 cm，高30 cm，每盆裝土20 kg。栽培方式為營養(yǎng)缽育苗移栽，定期澆水，保持盆中土壤含水量接近田間持水量。肥料與化控運(yùn)籌按當(dāng)?shù)馗弋a(chǎn)栽培技術(shù)，按等量均分，單株定量原則施用。

試驗(yàn)以轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉常規(guī)種泗抗1號(hào)和雜交種泗抗3號(hào) （分別以SK-1和SK-3表示）為材料，兩年均于4月6日播種，5月17日移植于盆中。在棉花生長至盛鈴期，于人工氣候室設(shè)計(jì)39℃/27℃高溫脅迫試驗(yàn)（T），持續(xù)時(shí)間分別為4 d、7 d和10 d。氣候室內(nèi)相對(duì)濕度保持60%～70%。在人工氣候室達(dá)到預(yù)期溫濕度，移入棉花樣本。同時(shí)設(shè)對(duì)照（CK），溫度為32℃/25℃（白天/夜晚）。每處理3盆，重復(fù)3次，共9盆。脅迫至預(yù)定時(shí)間后，取10日齡棉鈴，液氮速凍。

1.2 測(cè)定項(xiàng)目

1.2.1 Bt蛋白含量的測(cè)定。用酶聯(lián)免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）進(jìn)行測(cè)定，藥盒由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)提供。

1.2.2 可溶性蛋白含量的測(cè)定?？扇苄缘鞍缀繙y(cè)定應(yīng)用G-250考馬斯亮藍(lán)比色法。

1.2.3 游離氨基酸含量的測(cè)定。游離氨基酸含量的測(cè)定應(yīng)用抗壞血酸茚三酮染色法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.4 谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase,GPT）活性測(cè)定。鮮樣在Tris-HCl緩沖液中研磨離心后，提取液用賴氏比色法測(cè)定。

1.2.5 蛋白酶活性的測(cè)定。運(yùn)用考馬斯亮藍(lán)法、茚三酮和抗壞血酸比色法測(cè)定可溶性蛋白質(zhì)含量、游離氨基酸含量，進(jìn)而計(jì)算蛋白酶和肽酶活性。

表1晝夜變溫下高溫對(duì)鈴殼Bt殺蟲蛋白表達(dá)量對(duì)影響Table 1 Effects of high alternating day and night temperature conditions on the Bt protein content in boll wall(ng·g-1)

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析方法

用MS Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理和作圖，用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析（One-way ANOVA）和最小顯著差異法（LSD，α＝0.05）比較同一品種不同處理間差異的顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 晝夜變溫下高溫不同持續(xù)期對(duì)Bt棉鈴殼殺蟲蛋白表達(dá)量的影響

表1表明，盛鈴期晝夜變溫條件下高溫持續(xù)脅迫至4 d時(shí)，2個(gè)品種鈴殼中Bt殺蟲蛋白表達(dá)量與各自對(duì)照相比均無明顯變化，但脅迫至7 d時(shí)，Bt殺蟲蛋白表達(dá)量均明顯降低，且隨著脅迫時(shí)間的延長，下降的幅度也越大。其中，2011年常規(guī)種SK-1在脅迫至4 d、7 d和10 d時(shí)，鈴殼中Bt殺蟲蛋白表達(dá)量分別下降了0.53%、18.44%和39.54%；雜交種SK-3分別下降了2.37%、14.82%和34.67%。2012年常規(guī)種SK-1在脅迫至4 d、7 d和10 d時(shí)，鈴殼中Bt殺蟲蛋白表達(dá)量分別下降了2.82%、19.07%和44.48%；雜交種SK-3分別下降了2.26%、15.26%和33.23%。方差分析表明，無論是常規(guī)種還是雜交種，變溫條件下高溫脅迫持續(xù)至7d時(shí)，Bt蛋白表達(dá)量顯著下降，且隨脅迫持續(xù)時(shí)間的延長，下降速率加快。品種間則表現(xiàn)為常規(guī)棉的Bt蛋白表達(dá)量下降幅度比雜交棉稍高，說明在晝夜變溫下高溫脅迫對(duì)雜交棉鈴殼的抗蟲性下降影響比常規(guī)棉小。

2.2 晝夜變溫下高溫不同持續(xù)期對(duì)Bt棉鈴殼的氮代謝生理的影響

2.2.1 對(duì)鈴殼中游離性氨基酸含量的影響。圖1表明，2個(gè)棉花品種在晝夜變溫條件下高溫脅迫至4 d時(shí)，鈴殼中游離氨基酸含量變化較??；脅迫至7 d時(shí)，游離氨基酸含量均明顯增加。隨著脅迫時(shí)長的增加，增長幅度均增加。其中，SK-1在脅迫至4 d、7 d和10 d時(shí)，游離氨基酸含量比0 d分別上升 2.59%、36.33%和 90.26%；SK-3分別上升4.30%、18.61%和59.26%。品種間表現(xiàn)為常規(guī)種鈴殼中游離氨基酸含量上升幅度比雜交種稍高。

2.2.2 對(duì)鈴殼中可溶性蛋白含量的影響。由圖2可知，晝夜變溫條件下高溫脅迫至4 d時(shí)，鈴殼中的可溶性蛋白含量下降較??；脅迫至7 d，下降速度明顯加快，下降幅度增大。SK-1在晝夜變溫持續(xù)脅迫4 d、7 d、10 d條件下，鈴殼中的可溶性蛋白含量分別下降了0.67%、24.14%和 50.39%；SK-3分別下降了0.21%、17.71%、38.47%。品種間表現(xiàn)為常規(guī)種鈴殼中的可溶性蛋白含量下降幅度高于雜交種。

由圖2可知，晝夜變溫條件下高溫脅迫至4 d時(shí)，鈴殼中的可溶性蛋白含量下降較??；脅迫至7 d，下降速度明顯加快，下降幅度增大。SK-1在晝夜變溫持續(xù)脅迫4 d、7 d、10 d條件下，鈴殼中的可溶性蛋白含量比0 d時(shí)分別下降了0.67%、24.14%和 50.39%；SK-3分別下降了 0.21%、17.71%、38.47%。品種間表現(xiàn)為常規(guī)種鈴殼中的可溶性蛋白含量下降幅度高于雜交種。

2.2.3 對(duì)鈴殼中GPT活性的影響。由圖3可知，2個(gè)不同類型品種在晝夜變溫下高溫持續(xù)脅迫至7 d時(shí)，GPT活性均明顯下降，且隨著脅迫時(shí)間的延長，下降幅度增加。其中，SK-1在脅迫至4 d、7 d和10 d時(shí)，GPT活性比0 d時(shí)分別下降了3.34%、18.06%和42.40%；SK-3比0 d時(shí)分別下降了0.50%、15.11%和36.81%。品種間表現(xiàn)為雜交種的GPT活性下降幅度稍低于常規(guī)種。

圖1晝夜變溫下高溫對(duì)棉鈴殼中游離性氨基酸含量的影響Fig.1 Effects of high alternating day and nighttemperature conditions on the free am ino acid content in boll wall

圖2晝夜變溫下高溫對(duì)棉鈴殼中可溶性蛋白含量的影響Fig.2 Effects of high alternating day and night temperature conditions on the soluble protein content in the boll wall

圖3晝夜變溫下高溫對(duì)棉鈴殼中GTP活性的影響Fig.3 Effects of high alternating day and night temperature conditions on GPT activity in the boll wall

2.2.4 對(duì)鈴殼中蛋白酶活性的影響。圖4表明，盛鈴期2個(gè)品種在晝夜變溫條件下高溫脅迫至4 d時(shí)，棉鈴殼中蛋白酶活性變化較小，脅迫至7 d時(shí)，蛋白酶活性明顯增加，隨著脅迫時(shí)長的增加，增長幅度均增加。常規(guī)種在變溫脅迫至4 d、7 d、10 d時(shí)，鈴殼中蛋白酶活性與0 d時(shí)相比，分別上升了0.79%、44.73%和95.11%；雜交種鈴殼中蛋白酶活性與0 d時(shí)相比，則分別上升了0.29%、27.64%和78.54%。在脅迫時(shí)長為7 d以上時(shí)，鈴殼中的蛋白酶活性增加速度明顯加快，且脅迫時(shí)間越長，增長幅度越大。雜交種SK-3鈴殼中蛋白酶活性表現(xiàn)相似。

圖4晝夜變溫下高溫對(duì)棉鈴殼中蛋白酶活性的影響Fig.4 Effects of high alternating day and night temperature conditions on protease activity in the boll wall

3 討論

3.1 晝夜變溫下高溫引起B(yǎng)t棉鈴殼殺蟲蛋白顯著下降的時(shí)間明顯推遲

關(guān)于溫度對(duì)Bt棉抗蟲性表達(dá)影響的研究有許多，但大都是以持續(xù)高溫為處理。馬愛麗等[27]研究發(fā)現(xiàn)，在盛蕾期和盛鈴期36℃以上的高溫持續(xù)脅迫24 h，殺蟲蛋白表達(dá)量急劇下降。呂春花[24]等研究發(fā)現(xiàn)在高溫持續(xù)脅迫條件下Bt殺蟲蛋白含量在3 d內(nèi)下降幅度較大。衡麗等[28]研究結(jié)果表明，39℃高溫持續(xù)脅迫7 d，鈴殼中Bt蛋白含量呈持續(xù)下降特征，持續(xù)脅迫3 d內(nèi)尤其是在1 d內(nèi)下降幅度最大。

本試驗(yàn)白天高溫、夜晚溫度脅迫解除的高溫持續(xù)脅迫結(jié)果進(jìn)一步表明，盛鈴期鈴殼中殺蟲蛋白表達(dá)量同樣隨著脅迫時(shí)間的延長而下降。但無論是常規(guī)種還是雜交種，在持續(xù)脅迫4 d內(nèi)，鈴殼中Bt殺蟲蛋白表達(dá)量與相應(yīng)對(duì)照相比均下降較小，且無顯著差異；在持續(xù)脅迫7 d以上時(shí)，鈴殼中Bt殺蟲蛋白表達(dá)量顯著下降。說明晝夜變溫下高溫持續(xù)脅迫需要更長的時(shí)間才會(huì)引起鈴殼抗蟲性的顯著降低。在棉花實(shí)際生產(chǎn)中，由于有晝夜溫度變化，高溫影響實(shí)際上是1種變溫脅迫，因而本試驗(yàn)結(jié)果更能反映大田環(huán)境下棉鈴抗蟲性的變化。因此，Bt棉花的生產(chǎn)則更應(yīng)注意持續(xù)7 d以上的高溫，應(yīng)及時(shí)采取措施應(yīng)對(duì)棉鈴蟲的防治策略。

3.2 晝夜變溫下高溫持續(xù)脅迫同樣會(huì)引起鈴殼中Bt蛋白合成下降，分解加劇，從而導(dǎo)致抗蟲性下降

高溫脅迫對(duì)Bt棉殺蟲蛋白表達(dá)量的影響機(jī)理已經(jīng)有了較多的研究。陳德華等[29-30]認(rèn)為其與氮代謝密切相關(guān)。本研究進(jìn)一步表明，晝夜變溫下高溫影響B(tài)t棉鈴殼殺蟲蛋白濃度下降與氮代謝生理密切相關(guān)。在晝夜變溫下高溫脅迫7 d以上時(shí)，鈴殼中Bt蛋白含量下降的同時(shí)，游離性氨基酸含量和蛋白酶活性明顯上升，可溶性蛋白含量和GPT活性則顯著下降。相關(guān)分析進(jìn)一步表明，晝夜變溫不同持續(xù)期脅迫處理下，鈴殼中可溶性白含量、GPT活性與Bt殺蟲蛋白含量之間呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)分別為0.954**、0.988**)；而游離氨基酸含量、蛋白酶活性與Bt殺蟲蛋白含量呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)分別為－0.924**、－0.775**)。因此，晝夜變溫下高溫脅迫7 d以上時(shí)會(huì)引起鈴殼中Bt蛋白的分解加強(qiáng)，合成減弱，從而導(dǎo)致Bt蛋白表達(dá)量下降。

4 結(jié)論

在晝夜變溫（39/27℃）下高溫脅迫下，鈴殼中Bt殺蟲蛋白隨脅迫時(shí)間的延長而降低，7 d后鈴殼中Bt殺蟲蛋白急劇下降，常規(guī)種泗抗1號(hào)和雜交種泗抗3號(hào)分別下降了19%左右和15%左右。在鈴殼中Bt殺蟲蛋白下降同時(shí)，游離性氨基酸含量和蛋白酶活性明顯上升，可溶性蛋白含量和GPT活性則顯著下降。這說明晝夜變溫下的高溫脅迫會(huì)導(dǎo)致Bt棉蛋白質(zhì)合成減弱，分解加劇，從而引起抗蟲性下降。

[1]鄭繼有.對(duì)我國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種選育情況的思考與建議[C]//中國棉花學(xué)會(huì).中國棉花學(xué)會(huì)2007年年會(huì)論文匯編.安陽：中國棉花雜志社,2007:13-14.Zheng Jiyou.Consideration and suggestion on breeding of transgenic Bt cotton varieties in China[C]//China Cotton Association.Proceedings of the 2007 Annual Conference of China Cotton Association.Anyang:China Cotton Magazine House,2007:13-14.

[2]JAMESC.Preview:Globalstatus of commercialized biotech/GM crops[J].ISAAA Briefs,2004(32):1-12.

[3]郭香墨,范術(shù)麗,王紅梅,等.我國棉花育種技術(shù)的創(chuàng)新與成就[J].棉花學(xué)報(bào),2007,19(5):323-330.Guo Xiangmo,Fan Shuli,Wang Hongmei,et al.Achievements of technical innovation about cotton genetics and breeding in China[J].Cotton Science,2007,19(5):323-330.

[4]夏敬源,鄒奎,馬志強(qiáng),等.國產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉技術(shù)集成創(chuàng)新與推廣應(yīng)用[J].中國棉花,2006,33(10):2-5.Xia Jingyuan,Zou Kui,Ma Zhiqiang,et al.Domestic transgenic cotton technology integration innovation and application[J].China Cotton,2006,33(10):2-5.

[5]魏艷麗,黃玉杰,李紅梅.棉花轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究[J].山東科學(xué),2008,21(3):38-41.Wei Yanli,Huang Yvjie,Li Hongmei.A survey of cotton transgene technology[J].Shandong Science,2008,21(3):38-41.

[6]鄭志明,黃磊,袁連卿,等.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的特性及病蟲草害綜合防治技術(shù)[M].北京:中國社會(huì)出版社,2005:231-235.Zheng Zhiming,Huang Lei,Yuan Lianqing,et al.The characteristics of transgenic insect-resistant cotton and pests integrated control techniques[M].Beijing:China Social Press,2005:231-235.

[7]張社梅.國產(chǎn)轉(zhuǎn)基因棉花科研與應(yīng)用的經(jīng)濟(jì)分析[D].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2007:1-7.Zhang Shemei.economic analysis on Chinese domestic genetically modified cotton R&D investment and application[D].Beijing:Chinese Academy of Agricultural Sciences,2007:1-7.

[8]溫四民,董合忠,辛呈松.Bt棉抗蟲性差異表達(dá)的研究進(jìn)展[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2007，36(1):9-12.Wen Sim in,Dong Hezhong,Xin Chengsong.Research progress on the differential expression of insect resistance of Bt cotton[J].Journal of Henan Agricultural Sciences,2007，36(1):9-12.

[9]張寶紅,豐嶸.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉研究的現(xiàn)狀、問題、與對(duì)策[J].作物學(xué)報(bào),1998,24(2):248-256.Zhang Baohong,Feng Rong.Present situation of study on transgenic insect-resistant cotton,problem,and countermeasure[J].Acta Agronomica Sinica,1998,24(2):248-256.

[10]王冬梅,李建平,孟慶玉.Bt殺蟲蛋白在轉(zhuǎn)基因抗蟲棉中的表達(dá)[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,47(3):495-498.Wang Tongmei,Li Jiangping,Meng Qingyv.Expression of Bt(Bacillus thuringiensis)insecticidal protein in transgenic Bt cotton[J].Xinjiang Agricultural Sciences,2010,47(3):495-498.

[11]徐麗娜,胡本進(jìn),李路,等.轉(zhuǎn)Bt基因棉花殺蟲蛋白表達(dá)規(guī)律及對(duì)棉鈴蟲控制作用研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2015,42(5):797-802.Xu Lina,Hu Benjin,Li Lu,et al.Expression patterns of Bacillus thuringiensis insecticidal protein and the control to cotton boll worm of different Bt transgenic cotton[J].Journal of Anhui A-gricultural University,2015,42(5):797-802.

[12]王家寶,王留明,沈法富,等.環(huán)境因素對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因棉Bt殺蟲蛋白表達(dá)量的影響[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2000(6):4-6.Wang Jiabao,Wang Lium in,Shen Fafu,et al.Effect of environment elements on Bt-protein content in transgenic Bt cotton[J].Shandong Agricultural Sciences,2000(6):4-6.

[13]張順,陳剛,房衛(wèi)平,等.施氮量對(duì)抗蟲棉Bt蛋白表達(dá)和降解的影響[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),2011,26(6):148-153.Zhang Sun,Chen Gang,Fang Weiping,et al.Effects of nitrogen fertilizer rates on expression and degradation of Bt-protein in transgenic cotton[J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica,2011,26(6):148-153.

[14]楊長琴,徐立華,楊德銀.氮肥對(duì)杭蟲棉Bt蛋白表達(dá)的影響及其氮代謝機(jī)理的研究[J].棉花學(xué)報(bào),2005,17(4):227-231.Yang Changqin,Xu Lihua,Yang Deyin.Effects of nitrogen fertilizer on the bt protein content in transgenic cotton and nitrogen metabolism mechanism[J].Cotton Science,2005,17(4):227-231.

[15]王永慧,陳建平,蔡立旺,等.氣象因子對(duì)Bt棉抗蟲性表達(dá)影響的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(33):20530-20535.Wang Yonghui,Chen Jianping,Cai Liwang,et al.Research progress in effects of meteorological factors on pest resistance expression of Bt cotton[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2011,39(33):20530-20535.

[16]姜周庚,張延昭,馮夢(mèng)詩,等.高溫脅迫對(duì)盛鈴期Bt棉棉鈴中殺蟲蛋白表達(dá)量及氮代謝的影響[J].中國棉花,2012,39（4）：13-16.Jiang Zhougeng,Zhang Yanzhao,Feng Meishi,et al.Effect of high temperature on the insecticidal properties and nitrogen metabolism in Bt cotton at peak bolling stage[J].China Cotton,2012，39(4):13-16.

[17]陳德華,楊長琴,陳源,等.高溫脅迫對(duì)Bt棉葉片殺蟲蛋白表達(dá)量和氮代謝影響的研究[J].棉花學(xué)報(bào),2003,15(5):288-292.Chen Dehua,Yang Changqin,Chen Yuan,et al.The effects of the high temperature stress on the leaf bt protein content and nitrogen metabolism of Bt cotton[J].Cotton Science,2003,15(5):288-292.

[18]張祥,王桂霞,顧超,等.高溫和濕度對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因棉葉片Bt蛋白表達(dá)的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2012,23(11):3016-3020.Zhang Xiang,Wang Guixia,Gu Chao,et al.Effects of high tem-perature and humidity on leaf Bt protein expression of transgenic Bt cotton[J].Chinese Journal of Applied Ecology,2012,23(11):3016-3020.

[19]路獻(xiàn)勇,李淑英,朱加保,等.晝夜不同溫度對(duì)2種Bt棉苗期葉片殺蟲蛋白表達(dá)量和棉鈴蟲死亡率的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2015,31(36):103-108.Lu Xianyong,Li Shuying,Zhu Jiabao,et al.Effects of alternating temperatures day and night on cotton boll worm mortality and insecticidal protein expression of two kinds of Bt cottons[J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2015,31(36):103-108.

[20]陳源,韓勇,王俊,等.高溫對(duì)Bt棉盛蕾期蕾中Bt蛋白表達(dá)及氮代謝生理的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2014,25(9):2623-2628.Chen Yuan,Han Yong,Wang Jun,et al.Effects of high temperature on Bt proteins expression and nitrogen metabolic physiology in square of Bt cotton at the peak squaring stage[J].Chinese Journal of Applied Ecology,2014,25(9):2623-2628.

[21]周桂生,周福才,謝義明,等.溫度脅迫對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉毒蛋白的表達(dá)和棉鈴蟲死亡率的影響[J].棉花學(xué)報(bào),2009,21(4):302-306.Zhou Guisheng,Zhou Fucai,Xie Yim ing,et al.Effects of temperature stress on bt insecticidal protein expression in Bt transgenic cotton leaves and death rate of cotton boll worm[J].Cotton Science,2009,21(4):302-306.

[22]王永慧,陳建平,蔡立旺,等.溫濕度處理對(duì)Bt棉殺蟲蛋白表達(dá)的影響[J].棉花學(xué)報(bào),2013,25(1):63-67.Wang Yonghui,Chen Jianping,Cai Liwang,et al.Effect of combination stress of temperature and humidity on insecticidal protein expression of Bt transgenic cotton[J].Cotton Science,2013,25(1):63-67.

[23]張美俊,楊武德,馮美臣,等.土壤含水量、溫度對(duì)Bt棉間苗葉、蕾Bt蛋白降解的影響[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,22(3):300-307.Zhang Meijun,Yang Wude,Feng Meicheng,et al.Effects of soil water content and temperature on Bt protein degradation in leaves at thinning stage and buds of Bt cotton[J].Chinese Journal of Eco-Agriculture,2014,22(3):300-307.

[24]呂春花.高溫脅迫對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因棉生殖器官Bt殺蟲蛋白表達(dá)量及氮代謝的影響[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2013:1-10.Lü Chunhua.The effect of high temperature on the insecticidal properties and nitrogen metabolism of Bt cotton reproductive organ[D].Yangzhou:Yangzhou University,2013:1-10.

[25]Chen D H,Ye G Y,Yang C Q,et al.The effect of high temperature on the insecticidal properties of Bt Cotton[J].Environmental and Experimental Botany,2005,53(3):333-342.

[26]王桂霞.高溫脅迫與終止后棉生殖器官殺蟲蛋白表達(dá)量變化及相關(guān)生理機(jī)制研究[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2014:1-7.Wang Guixia.Effect of both high temperature and after the stress term ination on the bt insecticidal protein of the reproductive organ and correlative physiological mechanisms in Bt Cotton[D].Yangzhou:Yangzhou University,2014:1-7.

[27]馬愛麗.Bt棉生殖器官殺蟲蛋白表達(dá)量特征及高溫的影響[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2011:1-10.Ma Aili.The Bt insecticidal protein expression characteristics and the effect of high temperature for the reproductive organ in Bt cotton[D].Yangzhou:Yangzhou University,2011:1-10.

[28]衡麗,王俊,Abidallah Eltayib,等.高溫脅迫對(duì)Bt棉鈴殼Bt蛋白含量及氮代謝影響[J].棉花學(xué)報(bào),2016,28(1):27-33.Heng Li,Wang Jun,Abidallah Eltayib,et al.The effect of high-temperature stress on Bt protein content and nitrogen metabolism in the boll shell of Bt cotton[J].Cotton Science,2016，28(1):27-33.

[29]中國作物學(xué)會(huì).2015年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C].哈爾濱:[出版者不詳],2015.Crop Science Society of China.Abstracts of the 2015 Academic Annual Conference[C].Harbin:[s.n.],2015.

[30]中國作物學(xué)會(huì).2011學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C].成都:[出版者不詳],2011.Crop Science Society of China.Abstracts of the 2011 Academic Annual Conference[C].Chengdu:[s.n.],2011.