劉志茹

[摘要]目的 探討分析化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）和酶聯(lián)免疫法（ELISA）在乙型肝炎病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果。方法 選取我院2016年1月～2017年1月收治的68例乙型肝炎患者作為研究對(duì)象，所有患者分別給予ECLIA和ELISA檢測(cè)，對(duì)比分析兩種檢驗(yàn)方法的臨床檢驗(yàn)效果。結(jié)果 在乙型肝炎核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的檢驗(yàn)中，ECLIA檢出率與ELISA檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在乙型肝炎e抗體（HBeAb）檢驗(yàn)中，ECLIA檢出率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在高濃度HBsAg的批間檢測(cè)中，ECLIA、ELISA檢出結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在批內(nèi)檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性低于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在中濃度、低濃度的HBsAg檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性低于ELISA，批內(nèi)、批間數(shù)據(jù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 對(duì)乙型肝炎病毒患者給予ECLIA進(jìn)行診斷，具有較高的陽(yáng)性診斷率，可作為臨床上較佳的診斷方式。

[關(guān)鍵詞]乙型肝炎病毒；血清學(xué)檢驗(yàn)；化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法；陽(yáng)性；效果

[中圖分類(lèi)號(hào)] R512.6+2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）12（c）-0137-03

[Abstract] Objective To investigate and analyze the application effect of electrochemiluminescence immunoassay （ECLIA） and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） in the serological test of hepatitis B virus. Methods A total of 68 patients with hepatitis B admitted to our hospital from January 2016 to January 2017 were enrolled. All patients were tested by ELISA and ECLIA. The clinical efficacy of the two test methods were compared and analyzed. Results In the tests of hepatitis B core antibody （HBcAb）， hepatitis B e antigen （HBeAg）， hepatitis B surface antibody （HBsAb）， and hepatitis B surface antigen （HBsAg）， the detection rates were not statistical significance between the two test methods （P>0.05）. In the hepatitis B e antibody （HBeAb） test， the detection rate of ECLIA was higher than that of ELISA， with significant difference （P<0.05）. In the inter-assay of high concentration of HBsAg， the detection results of ECLIA and ELISA were not statistical significant （P>0.05）. In the intra-assay， the repeatability of ECLIA was lower than that of ELISA， with significant difference （P<0.05）. In the detection of medium and low concentrations of HBsAg， the repeatability of ECLIA was lower than that of ELISA， there were statistical differences after comparison of the intra- and inter-assay data （P<0.05）. Conclusion The diagnosis of ECLIA in patients with hepatitis B virus has a high positivity diagnosis rate and can be used as a favorable diagnosis mode in clinical practice.

[Key words] Hepatitis B virus； Serological test； Electrochemiluminescence immunoassay； Enzyme-linked immunosorbent assay； Positivity； Efficacy

乙型肝炎是臨床上一種最為常見(jiàn)的傳染性疾病，若不加以及時(shí)治療，隨著病情的發(fā)展，乙型肝炎可進(jìn)一步發(fā)展為重型肝炎、肝硬化、甚至肝癌，嚴(yán)重威脅患者的生命，因此，必須加強(qiáng)乙型肝炎患者的臨床診斷工作，達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早治療的目的[1-3]。但是在臨床上，乙型肝炎具有一定的潛伏期，多數(shù)患者在潛伏期并無(wú)明顯的臨床癥狀，這就對(duì)其臨床診斷工作帶來(lái)了一定的難度。通常，在對(duì)乙型肝炎患者進(jìn)行臨床診斷的過(guò)程中，均采用化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）和酶聯(lián)免疫法（ELISA）對(duì)其血清學(xué)進(jìn)行檢驗(yàn)，以實(shí)現(xiàn)臨床診斷[4-7]。為了進(jìn)一步研究ECLIA和ELISA在乙型肝炎病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果，我院選取了收治的68例乙型肝炎患者作為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取我院2016年1月～2017年1月收治的68例乙型肝炎患者作為研究對(duì)象，其中男36例，女32例；年齡為19～57歲，平均（38.0±19.0）歲；病程為1.5～9.0年，平均（5.25±1.02）年。所有患者均自愿簽署知情同意書(shū)，并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①滿足乙型肝炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②所有患者均具有良好的治療依從性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①相關(guān)代謝系統(tǒng)疾病患者；②惡性腫瘤患者；③血液系統(tǒng)疾病患者；④精神障礙患者。

1.2方法

所有患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行靜脈抽血10 ml，之后利用3000 r/min的離心率對(duì)已抽取的靜脈血液進(jìn)行10 min離心，對(duì)患者的血液進(jìn)行血清分離。將患者的血清樣本分為2份，采用ECLIA和ELISA分別進(jìn)行檢驗(yàn)。在每一次檢驗(yàn)的過(guò)程中，都將定值參比血清作為質(zhì)控，并嚴(yán)格按照試劑盒相關(guān)說(shuō)明進(jìn)行嚴(yán)格操作。

ECLIA采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)（雅培ARCHITECTi1000sr），利用雙抗體夾心方法進(jìn)行血清檢驗(yàn)。將檢驗(yàn)過(guò)程中所需要的工具放置在預(yù)定的位置上，并采用75%的乙醇棉球擦拭試劑，共同培育出生物素標(biāo)記的乙型肝炎表面抗體（HBsAb）和乙型肝炎表面抗原（HBsAg），之后與親和素標(biāo)記的磁微粒培育，然后加入三丙胺，并采用電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，利用激光的強(qiáng)度，判斷HBsAb的濃度，以10 mIU/ml為判斷標(biāo)準(zhǔn)，如果其濃度值>10 mIU/ml，則表示為陽(yáng)性；若其濃度值<10 mIU/ml，則判定為陰性。

ELISA采用酶標(biāo)儀（無(wú)錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司，型號(hào)為BIORAD680）、洗板機(jī)（型號(hào)為 BIORAD1575），試劑由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按照試劑盒上的操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行規(guī)范化的操作。其具體方法為：選擇雙抗原夾心的方法對(duì)患者血清的樣本進(jìn)行測(cè)定，將50 ml的洗滌液利用去離子水稀釋的方法稀釋到100 ml，并將其放置在專(zhuān)門(mén)的洗液瓶中，并用美標(biāo)試劑進(jìn)行調(diào)整，使其達(dá)到試劑頂位置，并讀取其吸光度（OD）值。當(dāng)S/OD>1.00時(shí)，表示為陽(yáng)性；當(dāng)S/OD<1.00時(shí)，表示為陰性（其中，S表示標(biāo)本OD值，OD表示臨界OD值）。

在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，從68例患者的血清中選擇20份低、中、高濃度的HBsAg陽(yáng)性血清，先將其進(jìn)行冷凍處理，之后每天對(duì)其進(jìn)行1次測(cè)量，并選擇10份低、中、高濃度的HBsAg陽(yáng)性血清進(jìn)行批間、批內(nèi)重復(fù)性計(jì)算。

1.3觀察指標(biāo)與判斷標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)所有患者乙型肝炎病毒的檢測(cè)物檢測(cè)率進(jìn)行判定。檢測(cè)物結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)中，將乙型肝炎核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、HBsAb、HBsAg、乙型肝炎e抗體（HBeAb）作為檢測(cè)內(nèi)容，其參考值如下。HBcAb：1.5 NCU/ml；HBeAg：0.05 NCU/ml；HBsAb：10.00 mU/ml；HBsAg：0.2 ng/ml；HBeAb：2.0 NCU/ml。當(dāng)檢測(cè)值大于參考值時(shí)，表示為陽(yáng)性[8]。對(duì)HBsAg不同濃度下的兩種檢測(cè)方法的重復(fù)性進(jìn)行判定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果的比較

在HBcAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg檢驗(yàn)中，兩種檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在HBeAb檢驗(yàn)中，ECLIA檢出率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩種檢測(cè)方法重復(fù)性的比較

在高濃度HBsAg的批間檢測(cè)中，兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；但在批內(nèi)檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性低于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在中濃度、低濃度的HBsAg的檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性低于ELISA，批內(nèi)、批間數(shù)據(jù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

3討論

乙型肝炎是生活中最為常見(jiàn)的一種慢性傳染病，若不及時(shí)加以治療，極容易誘發(fā)肝癌，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[9]。在普通人群中，乙型肝炎具有較高的發(fā)病率，并且患者在感染上乙型肝炎病毒之后，由于缺少有效的治療藥物和治療方法，在具體的臨床治療中，很難將患者體內(nèi)的乙型肝炎病毒進(jìn)行有效清除，其臨床治療效果較為有限。而且一部分患者即使暫時(shí)緩解了病情，但患者體內(nèi)的乙型肝炎病毒卻未能徹底清除。在這種情況下，許多乙型肝炎患者即便治愈后，也將會(huì)終身攜帶乙型肝炎病毒[10-12]。因此，在臨床上，必須加強(qiáng)乙型肝炎的早期臨床診斷工作，以便實(shí)現(xiàn)乙型肝炎患者的臨床治療和預(yù)后。

就目前而言，在臨床上關(guān)于乙型肝炎的早期診斷方法主要有ECLIA和ELISA[13]。其中，ELISA診斷具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，在臨床上應(yīng)用較為廣泛，但是在具體檢測(cè)的過(guò)程中，該方法容易受到其他因素的影響，在檢測(cè)的過(guò)程中，其靈敏度較弱，容易出現(xiàn)誤診、漏檢等現(xiàn)象。ECLIA則是利用全自動(dòng)儀器以及與其相配套的試劑，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的檢測(cè)，在臨床檢測(cè)過(guò)程中，該檢測(cè)方法靈敏度相對(duì)較高，具有較強(qiáng)的精準(zhǔn)性。張英霞[14]的研究結(jié)果顯示，ECLIA對(duì)患者陽(yáng)性的檢出率為55.0%，而ELISA對(duì)患者陽(yáng)性檢出率為39.0%，ECLIA陽(yáng)性檢出率明顯高于ELISA檢出率；且ECLIA對(duì)患者不同濃度下檢測(cè)血清的表面抗原靈敏度檢測(cè)結(jié)果均高于ELISA檢測(cè)結(jié)果。

在研究中發(fā)現(xiàn)，ECLIA檢測(cè)過(guò)程全面實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)自動(dòng)化和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化，大大降低了因人工操作帶來(lái)的誤差，并通過(guò)精確的定量分析，大大減少了批內(nèi)、批間的檢測(cè)誤差。張怡莎[15]的研究顯示，在對(duì)比ELISA和ECLIA兩種檢測(cè)方法的重復(fù)性上，除了高濃度HBsAg含量外，其余指標(biāo)結(jié)果的比較均顯示ECLIA的重復(fù)性明顯優(yōu)于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究結(jié)果也基本與其一致，在HBcAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg的檢測(cè)中，ECLIA檢出率分別為86.76%、49.15%、33.82%、61.76%和32.35%，ELISA檢出率分別為83.82%、41.18%、32.35%、45.59%和29.41%。對(duì)比結(jié)果顯示，HBeAb檢測(cè)中，ECLIA檢出率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其他各項(xiàng)指標(biāo)檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在對(duì)高濃度HBsAg的批間檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)重復(fù)性為3.83%，ELISA檢測(cè)重復(fù)性為3.81%，兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；但在批內(nèi)檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性為0.95%，ELISA檢測(cè)的重復(fù)性為8.23%，兩種檢測(cè)方法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在中濃度HBsAg的批內(nèi)檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性為1.39%，ELISA檢測(cè)重復(fù)性為13.19%；在中濃度HBsAg的批間檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性為4.21%，ELISA檢測(cè)重復(fù)性為12.43%；在低濃度HBsAg的批內(nèi)檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性為2.69%，ELISA檢測(cè)重復(fù)性為18.59%；在低濃度HBsAg的批間檢測(cè)中，ECLIA檢測(cè)的重復(fù)性為7.73%，ELISA檢測(cè)重復(fù)性為13.71%；在中、低濃度HBsAg的批間、批內(nèi)檢測(cè)中，兩種檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述，在乙型肝炎病毒血清的臨床檢測(cè)中，ECLIA具有較為明顯的優(yōu)勢(shì)，明顯提高了患者的陽(yáng)性檢出率，并能夠進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量分析，大大提高了臨床診斷的精準(zhǔn)性，從而為臨床治療提供了依據(jù)，具有較高的臨床推廣價(jià)值。

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