朝魯門格日樂(lè)

（鄂爾多斯市伊金霍洛旗動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 東勝 017200）

豬血凝性腦脊髓炎是由豬血凝性腦脊髓炎病毒（PHEV）感染引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病主要侵害1～3周齡哺乳仔豬，以仔豬嘔吐、衰竭或顯著神經(jīng)癥狀為主要臨床特征，死亡率高達(dá)20%～100%[1]，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 病原

豬血凝性腦脊髓病毒（PHEV）屬冠狀病毒科乙型冠狀病毒屬，是有囊膜包被的單股、正鏈RNA病毒，在形態(tài)上呈現(xiàn)出帽子型結(jié)構(gòu)特征。病毒粒子為球形，直徑120nm，囊膜表面的棒狀突起排列如日冕。該病毒在酸性或堿性環(huán)境下均能穩(wěn)定存在，但不耐熱，56℃、30min或30℃、72h條件下，病毒即可喪失活性。在低溫狀態(tài)下相對(duì)比較穩(wěn)定，冰凍或凍干狀態(tài)下能夠存活至少1年的時(shí)間，因此該病毒可以在凍干狀態(tài)下進(jìn)行保存[2]。該病毒最大特性表現(xiàn)在被感染細(xì)胞可吸附紅細(xì)胞，能凝集雞、小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠和火雞等動(dòng)物的紅細(xì)胞。

2 流行病學(xué)

豬是該病唯一的自然宿主，尤其是哺乳仔豬最易感，較大的豬多為隱性感染，而且隱性感染率很高。感染PHEV的發(fā)病豬和隱性感染豬為最主要的傳染源，帶毒豬也可以成為傳染源。病毒通常存在于病豬的上呼吸道及腦組織中，經(jīng)口、鼻感染發(fā)病。不同毒株感染不同日齡豬只后，臨床表現(xiàn)明顯不同。在老疫區(qū)，母豬初乳中含有該病毒抗體，仔豬在哺乳過(guò)程中獲得病毒抗體，因而哺乳仔豬一般呈隱性感染，斷奶仔豬已能抵抗該病，發(fā)病率較低。新疫區(qū)以3周齡以內(nèi)的哺乳仔豬易感，多數(shù)是在引進(jìn)新種豬之后發(fā)病，死亡率高達(dá)100%。

3 臨床癥狀

感染仔豬通常具有腦脊髓炎型和嘔吐消耗型2種臨床表現(xiàn)型[3，4]。前者多為急性暴發(fā)，可以在患病早期發(fā)現(xiàn)，具有較明顯的神經(jīng)癥狀，具有腦脊髓炎的典型特征；后者由于表現(xiàn)形式多為嘔吐或生長(zhǎng)緩慢，所以很容易被診斷為胃腸疾病或營(yíng)養(yǎng)缺乏，是一種慢性臨床表型。出現(xiàn)這2種截然不同臨床癥狀的原因，與病毒本身毒力，以及易感動(dòng)物自身年齡、抵抗能力和個(gè)體差異有關(guān)[5]。隱性感染豬雖不發(fā)病，但會(huì)向周圍環(huán)境散毒，而且病毒在宿主體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間復(fù)制，極有可能發(fā)生基因變異，使病毒毒力增強(qiáng)。隱性感染豬群亦會(huì)相繼消瘦，發(fā)育遲緩，嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)效益。

嘔吐消耗型。嘔吐消耗型在臨床上主要表現(xiàn)為打噴嚏、咳嗽、精神沉郁、食欲不振、消瘦和嘔吐等癥狀。發(fā)病初期，病豬表現(xiàn)為聚堆、打噴嚏、磨牙，還伴有體溫升高、被毛逆立等癥狀。隨著發(fā)病時(shí)間的延長(zhǎng)，病豬開(kāi)始出現(xiàn)各種神經(jīng)癥狀，如后肢麻痹、呈劃水狀運(yùn)動(dòng)，四肢共濟(jì)失調(diào)等。最后患病豬因全身衰竭而逐漸昏迷，直至死亡。病程比較短通常為10d左右。新生仔豬在感染后，會(huì)出現(xiàn)身體發(fā)紺、脫水，最終也以死亡告終。大豬感染后，因?yàn)槌掷m(xù)嘔吐而引發(fā)食欲不振，最終病豬因饑餓而導(dǎo)致全身衰竭，直至死亡。

腦脊髓炎型。腦脊髓炎型的癥狀很可能是從嘔吐和腹瀉的癥狀發(fā)展而來(lái)的。發(fā)展為血凝性腦脊髓炎后，大多數(shù)病例表現(xiàn)出以神經(jīng)癥狀為主的臨床癥狀，發(fā)病豬表現(xiàn)為肌肉震顫、神經(jīng)過(guò)敏反應(yīng)、運(yùn)動(dòng)失調(diào)，出現(xiàn)劃水狀姿勢(shì)，最終以死亡告終。此外，臨床癥狀表明，仔豬的發(fā)病日齡越小，癥狀會(huì)越嚴(yán)重，發(fā)病仔豬的死亡率高達(dá)100%。腦脊髓炎的癥狀僅限于28日齡以內(nèi)的仔豬。臨床上還有極少數(shù)的病豬出現(xiàn)失明和反應(yīng)遲鈍的癥狀，通常該癥狀于2～6d后基本恢復(fù)正常。

4 診斷

4.1 病理學(xué)診斷

對(duì)送檢病死豬進(jìn)行病理剖檢，內(nèi)臟組織器官未見(jiàn)有明顯的病變，但可見(jiàn)腦組織淤血、水腫，胃腸內(nèi)充滿大量?jī)?nèi)容物。采集病豬的脾臟、腎臟、腦、脊髓等多個(gè)組織，制作石蠟切片并進(jìn)行HE染色，鏡檢可見(jiàn)肝臟發(fā)生輕度的顆粒變性，肝小葉間門管區(qū)靜脈嚴(yán)重淤血；脾臟脾小體淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松，少量淋巴細(xì)胞胞核濃縮，動(dòng)脈周圍淋巴鞘顯著增厚；脊髓灰質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞圍繞在神經(jīng)元周圍形成明顯的“衛(wèi)星現(xiàn)象”；部分腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死。

臨床上呈急性感染的發(fā)病豬，腦軟膜表面出血和充血現(xiàn)象比較嚴(yán)重，同時(shí)腦實(shí)質(zhì)和腦脊髓膜上可見(jiàn)有紫紅色小點(diǎn)分布。而慢性感染的豬死亡后，胃充氣膨脹，腹圍增大，出現(xiàn)惡病質(zhì)狀態(tài)。肌肉間結(jié)締組織出現(xiàn)輕度或中度水腫。偶有病例出現(xiàn)肝臟和腎臟實(shí)質(zhì)變性，胃黏膜淤血、充血，肺泡壁毛細(xì)血管充血、淤血，表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎，胃腸呈卡他性炎，尤以小腸最為明顯。臨床上大多數(shù)病例呈現(xiàn)非化膿性腦炎的典型病變。神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生不同程度的變性，腦軟膜和腦內(nèi)小靜脈充血，大腦實(shí)質(zhì)可見(jiàn)有輕微的水腫，血管腔周圍單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，形成“血管套”現(xiàn)象。疾病呈慢性經(jīng)過(guò)時(shí)，鏡下可以觀察到神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生，并且聚集在一起，形成膠質(zhì)結(jié)節(jié)。此外，在有些病例中我們會(huì)看到少突膠質(zhì)細(xì)胞圍繞在神經(jīng)細(xì)胞周圍增生，形成明顯的“衛(wèi)星現(xiàn)象”，有的神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生變性、壞死，出現(xiàn)“噬神經(jīng)現(xiàn)象”；腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生顆粒變性和壞死。

4.2 病毒的分離鑒定

首先采集疑似PHEV感染病豬的腦、脊髓以及脾組織進(jìn)行病毒的分離，按照基本的操作方法將病料組織研磨并且反復(fù)凍融后，進(jìn)行無(wú)菌處理，然后接種于長(zhǎng)滿單層的易感細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，在接種后72h，觀察有無(wú)明顯的病變出現(xiàn)，如果沒(méi)有病變，則繼續(xù)傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)至10代以內(nèi)如果出現(xiàn)病變則證明病毒分離陽(yáng)性，反之則說(shuō)明病毒分離陰性。最后將分離后的細(xì)胞病毒液收集后，反復(fù)凍融并離心，取少量病毒液，借助透射電鏡觀察病毒粒子的形態(tài)，從而可以進(jìn)一步鑒定所分離的病毒。PHEV屬于冠狀病毒屬的成員，病毒粒子的形態(tài)呈現(xiàn)出典型的“帽子”結(jié)構(gòu)，直徑大小為120nm左右，形狀為近似圓球形。

4.3 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

首先制作瓊脂糖平板，然后分別在中間和周圍打孔，中央孔與周圍孔的間距一般以3mm為宜。在中間的孔中加入抗原，待檢血清、陰性和陽(yáng)性血清分別加入到周圍孔中，將瓊脂糖平板置于25℃條件下培養(yǎng)24～48h后，觀察特異性沉淀曲線，如果抗原與待測(cè)血清產(chǎn)生的沉淀曲線與抗原與陽(yáng)性對(duì)照的血清作用產(chǎn)生的沉淀曲線相一致，則可判斷該待測(cè)血清為陽(yáng)性，不出現(xiàn)曲線則為陰性。該方法操作簡(jiǎn)單，可以用于PHEV血清抗體的流行病學(xué)調(diào)查。

4.4 中和試驗(yàn)（NT）

將PHEV病毒液與不同稀釋濃度的待測(cè)血清按照1:9均勻混合，37℃溫箱孵育1h。然后將混合后的懸液加入到長(zhǎng)滿單層PK-15細(xì)胞的試管中。培養(yǎng)72h后，檢測(cè)雞紅細(xì)胞的凝集活性，以此來(lái)檢測(cè)病毒是否在細(xì)胞上增殖。通常把中和抗體的效價(jià)大于1:8時(shí)，判斷為陽(yáng)性，反之結(jié)果則為陰性。該方法主要是利用PHEV病毒粒子中含有的一個(gè)特殊的結(jié)構(gòu)，即病毒囊膜表面存在一種特異性結(jié)構(gòu)蛋白-HE蛋白，這種蛋白可以引起雞的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。

5 防治

5.1 隔離和消毒

豬場(chǎng)在發(fā)生該病時(shí)，首先要將圈舍的其他未感染豬群與發(fā)病感染豬群即刻分離開(kāi)來(lái)，然后對(duì)豬場(chǎng)圈舍的地面、墻壁、天花板、水槽、食槽等嚴(yán)格進(jìn)行徹底消毒處理，消毒可用5%的熱火堿水。對(duì)于已經(jīng)感染的病死豬，焚燒或者深埋處理，防止病原的進(jìn)一步擴(kuò)散和傳播。另外對(duì)消毒的豬舍要及時(shí)地進(jìn)行通風(fēng)換氣，保持圈舍的清潔衛(wèi)生。

5.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

目前針對(duì)PHEV的感染，尚沒(méi)有比較有效的治療方法和有效的疫苗，因此飼養(yǎng)管理?xiàng)l件的完善非常關(guān)鍵。由于臨床上PHEV主要通過(guò)呼吸道和消化道等途徑進(jìn)行傳播，因此通過(guò)對(duì)豬群進(jìn)行隔離來(lái)切斷病毒的傳播途徑，可以有效的防止疾病的進(jìn)一步流行和擴(kuò)散。