吳立群 鄒小秋 李榮蓉 謝 丹 李可欣 湯順莉 易 瑋

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510405）

癲癇（epilepsy）是由多種原因?qū)е碌哪X部神經(jīng)元高度同步化異常放電的臨床綜合征，臨床表現(xiàn)具有發(fā)作性、短暫性、重復(fù)性和刻板性的特點。癲癇狀態(tài)若不及時治療可因高熱、循環(huán)衰竭、電解質(zhì)紊亂或神經(jīng)元興奮毒性損害導(dǎo)致永久性腦損害，甚至死亡，必要時需按急癥方式處理。針灸作為中醫(yī)特色的療法之一，在急救中具有一定的作用，對于本病的治療也有較好效果。近年來，開展了大量的針灸抗癲癇的動物實驗，研究其發(fā)病機制和作用途徑，并取得了突破性的進展，進一步為臨床上針灸治療癲癇提供了確切的實驗依據(jù)，并得到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論的支持?，F(xiàn)將針灸治療癲癇作用機制的實驗研究進展概述如下。

1 針灸對腦電活動的影響

癲癇的病因復(fù)雜，發(fā)病機理也不盡相同，但大量神經(jīng)元反復(fù)發(fā)作的異常同步放電卻是其細胞水平的基本特點之一[1]。癲癇的發(fā)作期均存在腦電圖的改變，因此腦電圖對癲癇的診斷、指導(dǎo)用藥和預(yù)后評價都有著重要作用。何偉等[2]探討了電針耳甲對癲癇大鼠的抑制效應(yīng)及機制。結(jié)果表明電針耳甲、大椎穴都能改善癲癇大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，且電針耳甲效果優(yōu)于電針大椎穴的效果；電針耳甲預(yù)處理也具有預(yù)防癲癇發(fā)作的作用，但其作用機制與迷走神經(jīng)刺激療法（VNS）的不同，而是可能與刺激了迷走神經(jīng)耳支相關(guān)。王津存等[3]利用腦立體定位手段，將電極埋入大鼠腦部雙側(cè)額葉皮質(zhì)、海馬和杏仁核，觀察電針刺激百會穴對鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)致癇大鼠的行為及腦電活動的影響。結(jié)果表明電針穴位刺激干預(yù)在明顯抑制誘導(dǎo)致癇大鼠慢性期自發(fā)反復(fù)發(fā)作次數(shù)的同時，也明顯抑制了致癇大鼠與癲癇發(fā)作關(guān)系密切部位的放電次數(shù)，尤其以杏仁核為著；因電針穴位刺激后多個腦區(qū)放電明顯受到抑制，而推測出電針穴位刺激治療癲癇的電生理機制與可能存在的穴位-神經(jīng)傳入解剖途徑有關(guān)。又因百會穴被認為是三叉神經(jīng)和兩側(cè)枕大神經(jīng)的重疊支配區(qū)域，而認為電針刺激致癇大鼠百會穴產(chǎn)生的腦電和行為學(xué)改變與電針刺激產(chǎn)生的神經(jīng)沖動傳入腦干三叉神經(jīng)感覺核后，經(jīng)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)投射到腦內(nèi)多個區(qū)域，繼而產(chǎn)生由針灸啟動的抑癇信號有關(guān)，該抑癇信號糾正清除了中樞神經(jīng)系統(tǒng)已形成的異常放電的錯誤行為，從而改善了致癇大鼠腦電圖和行為學(xué)表現(xiàn)。張艷等[4]觀察針刺治療對發(fā)作間期癲癇患者腦電圖背景的影響：將40例間歇期癲癇患者隨機分為針刺組和單純西藥組，結(jié)果腦電圖引導(dǎo)下針刺的治療臨床顯效率高于西藥組，明顯降低發(fā)作間期癲癇患者致癇灶及周圍腦區(qū)的α1、α2、β2、θ和δ頻段的絕對功率，同時能增加健側(cè)腦區(qū)的α1、α2絕對功率，降低健側(cè)腦區(qū)β2、θ和δ的絕對功率，作用較西藥組明顯。其機制可能是通過針刺改善腦電功率譜、提高腦電基本頻率，使腦電圖背景漸趨穩(wěn)定和順應(yīng)性，達到抗癇作用。

2 針灸對腦神經(jīng)細胞的影響

海馬神經(jīng)元損傷既是癲癇發(fā)作的病理結(jié)果，又是進一步導(dǎo)致癲癇反復(fù)發(fā)作的重要原因[5]，故如何減輕癲癇發(fā)作后神經(jīng)元損傷，防治癲癇進展與控制癲癇發(fā)作同樣重要。楊俊等[6]用TUNEL法及免疫熒光法觀察了電針預(yù)處理對癲癇持續(xù)狀態(tài)誘發(fā)的海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡的情況。結(jié)果電針預(yù)處理減少了海馬CA1/CA3區(qū)TUNEL及Caspase-3陽性神經(jīng)元的數(shù)量。表明電針百會及大椎穴預(yù)處理，可以減低SE誘發(fā)的海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡，其機制可能是通過調(diào)節(jié)神經(jīng)元凋亡過程中某些蛋白的表達。楊帆等[7]通過建立戊四唑誘發(fā)大鼠癲癇模型，并給予針刺治療，觀察了癲癇大鼠海馬區(qū)病理改變情況，并探討了針刺對大鼠癲癇發(fā)作繼發(fā)腦神經(jīng)元損傷的保護作用，及其保護作用與PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系。實驗結(jié)果為針刺組大鼠海馬神經(jīng)元損傷明顯減輕，表明針刺具有明顯保護癲癇繼發(fā)腦神經(jīng)元損傷作用；另一結(jié)果為L Y 294002（一種能夠阻斷PI 3 K細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的蛋白激酶抑制劑）能部分阻斷針刺的神經(jīng)元保護作用，說明針刺對癲癇繼發(fā)腦損傷的保護作用與PI3K/AKT通路有著潛在的相關(guān)性。楊春曉等[8]觀察電針對急性癲癇誘發(fā)大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明，電針“百會”和“大椎”穴可顯著修復(fù)癲癇大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)，神經(jīng)元核表面有輕度的切記，核仁非常明顯，核內(nèi)高密度染色質(zhì)沉積消失。胞質(zhì)內(nèi)尼氏體和線粒體腫脹消失，可見少數(shù)脂褐素顆粒。神經(jīng)絲結(jié)構(gòu)完好，神經(jīng)氈區(qū)纖維成彌漫空腔結(jié)構(gòu)。突觸小泡減少，突觸前膜和后膜及突觸間隙清晰，髓殼板層結(jié)構(gòu)致密。其實驗結(jié)果從神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)驗證了針刺具有保護癲癇繼發(fā)腦神經(jīng)元損傷的作用。

3 針灸對細胞因子的影響

神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)失衡參與了癲癇的發(fā)病過程。而免疫調(diào)節(jié)因子能調(diào)節(jié)特定的神經(jīng)系統(tǒng)功能，從而在癲癇過程中發(fā)揮重要作用。張余山等[9]通過艾灸戊四氮癲癇大鼠關(guān)元、足三里穴，發(fā)現(xiàn)艾灸關(guān)元及雙側(cè)足三里穴可以改善癲癇大鼠血清IL-2水平。實驗結(jié)果表明艾灸關(guān)元和足三里穴可治療癲癇大鼠，其作用機制可能與升高IL-2有相關(guān)性。張艷曉等[10]觀察了艾灸關(guān)元和足三里穴對戊四氮導(dǎo)致癲癇模型大鼠血清細胞因子TNF-α含量的影響，探討其治療癲癇的作用機制。實驗結(jié)果為艾灸關(guān)元、足三里穴能降低血清中TNF-α的含量，并且可以降低癲癇大鼠的發(fā)作等級與發(fā)作次數(shù)。表明艾灸關(guān)元、足三里穴有抑制癲癇發(fā)作的作用，而其作用機制與調(diào)節(jié)體內(nèi)TNF-α含量有著密切的關(guān)系。張麗芳等[11]通過建立LI-PC癲癇大鼠模型，觀察了癲癇大鼠海馬NF-κB的表達變化及針刺督脈穴位對NF-κB表達的影響。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)癲癇發(fā)作后NF-κB被激活后轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)，其表達明顯增加，而針刺督脈穴位可明顯抑制癲癇大鼠海馬NF-κB的表達，其作用機理可能是使刺激沖動傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，適度抑制NF-κB表達，減輕其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，抑制細胞過度凋亡，降低神經(jīng)元興奮性，從而達到抗癇的目的。

4 針灸對鈣離子、鈣調(diào)素的影響

癲癇的共同病理基礎(chǔ)是神經(jīng)元過度放電，這種自發(fā)性放電，目前認為是短暫快速的Ca2+內(nèi)流和緩慢的Ca2+內(nèi)流引起的細胞去極化。當鈣通道發(fā)生改變，過度的Ca內(nèi)流進入細胞內(nèi)后與鈣調(diào)蛋白（CaM）結(jié)合，形成的復(fù)合物Ca/CaM能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的許多蛋白、離子通道等，對神經(jīng)細胞的生長發(fā)育發(fā)揮重要的作用[12-14]。楊帆等[15]觀察了電針對癲癇大鼠腦電的影響，并利用激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)觀察了癲癇大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2+的熒光強度。發(fā)現(xiàn)電針組大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2+熒光強度明顯低于模型組，同時癲癇發(fā)作潛伏期延長，癇波密度明顯減小，表明針刺可能是通過調(diào)節(jié)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2+含量，抑制胞內(nèi)Ca2+超載，而達到抗癲癇的目的。還通過另一個實驗用免疫組織化學(xué)SABC法觀察PTZ致癇大鼠電針百會、大椎穴后海馬神經(jīng)元內(nèi)鈣調(diào)素的表達情況。發(fā)現(xiàn)電針組CaM表達較PTZ組明顯減少，表明電針對癲癇大鼠海馬內(nèi)CaM表達具有一定的抑制作用，從而減少因Ca2+超載所致的腦細胞功能和結(jié)構(gòu)的損傷[16]。同時發(fā)現(xiàn)電針治療能明顯延長癲癇發(fā)作的潛伏期，減少癲癇發(fā)作頻率，說明電針有很好的抗癲癇作用。因此推測出電針抗PTZ點燃型大鼠癲癇發(fā)作的作用途徑之一可能是調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2+/CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的某些靶位點，從而調(diào)節(jié)一些依賴Ca2+/CaM的酶，減輕了神經(jīng)元的損傷，有效地減少了神經(jīng)元放電現(xiàn)象，達到抗癲癇的目的。

5 針灸對NO的影響

研究表明，癲癇發(fā)作時會伴隨著NO的大量產(chǎn)生[17]，而過量的NO會導(dǎo)致細胞功能紊亂。因此NO在癲癇發(fā)生發(fā)展的細胞病理過程中起著非常重要而又復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用。姜波等[18]選用腹腔注射青霉素納造成癲癇大鼠模型，于大鼠百會、大椎穴及肝俞透膽俞穴位埋線，觀察對其癲癇發(fā)作行為及大腦皮層NO及NOS含量的影響。結(jié)果表明，在百會、大椎穴及肝俞透膽俞穴位埋藥線，可以降低腹腔注射青霉素鈉造成癲癇大鼠模型的大腦皮層NO、NOS的含量。而其控制癲癇發(fā)作的途徑之一可能是NO/NOS的比率降低致Ca2+內(nèi)流減少，抑制Glu的釋放。

有研究表明多種化學(xué)致癇劑誘導(dǎo)癲癇發(fā)作，均可引起腦內(nèi)cGMP含量的增加[19]。NO的多種生物效應(yīng)是通過激活可溶性鳥苷酸環(huán)化酶（sGC），升高腦內(nèi)cGMP水平，cGMP作用于相關(guān)靶分子或通過影響離子通道活性而在生物系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。因此NO介導(dǎo)cGMP在神經(jīng)傳導(dǎo)中起很重要的作用。楊帆等[20]探討了戊四唑點燃型癲癇大鼠海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)NO-cGMP信息通路的變化及針刺對此通路的影響。表明PTZ可引起大鼠海馬內(nèi)cGMP濃度顯著升高，同時給予NO前體L-精氨酸或NOS抑制劑L-硝基精氨酸甲酯，得出的結(jié)果為cGMP升高被加強或抑制，提示神經(jīng)元活動增強伴有NO-cGMP途徑的開放；注射PTZ前給予針刺治療30min，則大鼠海馬內(nèi)cGMP濃度顯著降低，而針刺的同時給予NO前體L-精氨酸則cGMP濃度變化不明顯，表明針刺可明顯降低癲癇大鼠海馬內(nèi)cGMP濃度，而針刺的這種作用與腦內(nèi)NO有關(guān)，即NO-cGMP途徑在針刺抗癲癇作用中起著重要作用。

6 針灸對神經(jīng)遞質(zhì)的影響

目前認為，神經(jīng)元突觸間各種神經(jīng)遞質(zhì)的改變會導(dǎo)致癲癇的發(fā)作，因而興奮性遞質(zhì)和抑制性遞質(zhì)的平衡失調(diào)在癲癇的發(fā)病機制中占有重要地位。郝娟娟等[21]觀察了針刺督脈穴位對氯化鋰一匹羅卡品癲癇大鼠模型平均逃避潛伏期和平均游泳路程以及血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA、NE含量的影響，結(jié)果表明針刺督脈腧穴可改善癲癇大鼠的行為記憶能力，并使癲癇大鼠血清單胺類遞質(zhì)含量降低，從而達到治療目的，與西藥組相比較，此法雖無明顯差異，但針刺督脈穴位療法副作用小，安全性高，具有廣泛的適用性。

7 針灸對相關(guān)基因表達的影響

陳國蓉等[22]從分子水平探討了穴位埋線治療癲癇的可能作用機制。通過采用TUNEL法和免疫組化法檢測了各組大鼠的神經(jīng)元凋亡及凋亡相關(guān)基因P53和Bcl-2的表達，發(fā)現(xiàn)穴位埋線可能是通過抑制P53蛋白，提高Bcl-2蛋白的表達，阻止海馬神經(jīng)元細胞凋亡的發(fā)生發(fā)展，從而減輕SE發(fā)生后對大腦的損害。

8 結(jié)語

綜上所述，針灸治療癲癇的作用機制的相關(guān)研究已相對成熟，其機理主要與改善腦電活動，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)遞質(zhì)、細胞因子，保護腦神經(jīng)細胞，調(diào)控相關(guān)基因水平等作用途徑有關(guān)。但是癲癇的發(fā)病機理復(fù)雜并且尚未明確，單一對象的研究較難闡明針灸抗癲癇的作用機制，以致同種方法的作用途徑也眾說紛紜。目前針灸治療癲癇的機制研究以動物實驗為主，其選穴較局限，目前對百會、大椎的選穴頻率較高，研究較為集中，缺少突破性的穴位觀察及辨證選穴、隨癥加減的整體調(diào)節(jié)作用的研究，難以進行有效比較。為進一步研究本病，應(yīng)制定統(tǒng)一的中醫(yī)辨證分型標準，應(yīng)用循證醫(yī)學(xué)的方法進行合理的科研設(shè)計，這是提高研究科學(xué)性、可靠性的前提條件。

為了進一步推動相關(guān)研究的發(fā)展，深入探討針灸治療癲癇的機制，可以從以下方向進行完善：（1）規(guī)范標準：不同穴位的配伍及針刺方法存在差異，應(yīng)遵循嚴格的科研設(shè)計原則，開展多中心、大樣本、前瞻性的臨床研究，探討臨床治療方法的統(tǒng)一標準。（2）回歸臨床：動物與人體的結(jié)構(gòu)及生理病理機制存在較大差異，未來研究應(yīng)以臨床實驗為主，尋找更加合理、優(yōu)化的實驗設(shè)計方案，以進一步探索針灸治療癲癇的作用機制。（3）深入研究：近年來有研究表明microRNA可能與癲癇的發(fā)生有著密切的聯(lián)系[23]。microRNA作為一種基因調(diào)控因子，參與了細胞的程序性死亡、增殖、分化、發(fā)育和代謝等多種生理過程，對于闡明癲癇的發(fā)病機理具有一定的作用。目前已有研究通過探討microRNA在癲病發(fā)生中相關(guān)的靶基因和靶通路來發(fā)現(xiàn)治療癲癇的新策略，因此我們可以通過研究針灸對癲癇模型大鼠的microRNA表達情況，更多地從基因水平、分子水平等更高層次的研究為臨床上針灸治療癲癇提供確切的實驗依據(jù)，并增強其治療效果。

[1] 趙璐，王淑秋，王結(jié).靈芝孢子粉對戊四氮致癇大鼠腦組織GDNF與NT－3表達的影響[J].中國病理生理雜志， 2010，26（4）：812．

[2] 何偉，趙長龍，李艷華，等.電針耳甲對癲癇大鼠行為學(xué)和腦電圖的影響[J].中國病理生理雜志，2011，27（10）：1913.

[3] 王津存，黃遠桂，溫曉妮，等.電針穴位刺激對鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)致癇大鼠行為及腦電活動的影響[J].中國臨床康復(fù)，2006，10（7）：110.

[4] 張艷，黃禮華，石云，等.針刺治療對癲癇間歇期腦電圖背景的影響[J].針灸臨床雜志，2017，33（9）：9.

[5] RATTKA M， BRANDT C， L SCHER W. The intrahippocampal kain ate model of temporal lobe epilepsy revisited：epileptogenesis，behavioral and cognitive alterations，pharmacological response，and hippoccampal damage in epileptic rats[J]. Epilepsy Res，2013，103（3）：135.

[6] 楊俊，黃遠桂，徐江濤.電針預(yù)處理抑制癲癇持續(xù)狀態(tài)誘發(fā)的海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，13（3）：104.

[7] 楊帆，昂文平，沈德凱，等.磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與針刺保護癲癇繼發(fā)海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系[J].針刺研究，2013，38（1）：20.

[8] 楊春曉，梁慶成，吳云，等.電針對急性癲癇誘發(fā)海馬CA3區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，50（2）：99.

[9] 張余山，張艷曉，黃靜波，等.艾灸關(guān)元和足三里穴對癲癇大鼠細胞因子IL－2影響的研究[J].針灸臨床雜志，2013，29（1）：63.[10] 張艷曉，張余山，黃靜波，等.艾灸關(guān)元和足三里穴對癲癇大鼠細胞因子TNF－α的影響[J].針灸臨床雜志，2013，29（6）：70.

[11] 張麗芳，趙立新，倪文杰，等.針刺督脈穴位對癲癇大鼠海馬NF-κB表達的影響[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，8（4）：355.

[12] BADEA T， GOLDBERG J， MAO B， et al. Calcium imaging of epileptiform events with single-cell resolution [J].J Neurobiol，2001，48（3）：215.

[13] 呂聞，董秀蘭.鈣調(diào)蛋白、鈣調(diào)蛋白激酶與癲癇[J].社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2008，6（1）：39．

[14] 馬麗華，呂昕瞳，劉雅靜，等.Ca_V1.2和鈣調(diào)蛋白在自發(fā)性遺傳性癲癇大鼠小腦中的異常表達[J].解剖科學(xué)進展，2013，19（1）：27.

[15] 楊帆，徐國龍，楊永清，等.電針對戊四唑點燃型癲癇大鼠腦電及海馬神經(jīng)元內(nèi) Ca2+含量的影響[J].針刺研究，2009，34（3）：163.

[16] 楊帆，徐國龍，馮品智，等.電針對癲癇大鼠行為及海馬神經(jīng)元鈣調(diào)素表達的影響[J].中國中醫(yī)急癥，2009，18（1）：77.

[17] 趙秀鶴，遲兆富，鄧小梅，等.癲癇發(fā)作后腦內(nèi)一氧化氮、一氧化氮合酶及相應(yīng)氨基酸的變化[J].中國神經(jīng)精神疾病雜志，2000，26（2）：101.

[18] 姜波，林海紅，裴磊.穴位埋藥線對癲癇大鼠行為學(xué)與大腦皮層NO及NOS含量的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（2）：415.

[19] FERRENDELLI J A， BLANK A C， GROSS R A. Relationship between seizures activity and cyclic nucleotide levels in brain[J].Brain Res，1980，200 ：93.

[20] 楊帆，王頻，沈德凱，等.電針對戊四唑點燃型癲癇大鼠海馬內(nèi)NO-cGMP信息通路的影響[J].中國中醫(yī)藥科技，2008，15（5）：325.

[21] 郝娟娟，趙立新，倪文杰，等.針刺督脈穴位對癲癇大鼠行為學(xué)及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J]. 山西中醫(yī)，2017，33（4）：56.

[22] 陳國蓉，唐純志，肖生紅，等.穴位埋線對大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬神經(jīng)元凋亡及相關(guān)基因表達的影響[J].天津中醫(yī)藥，2007，24（3）：211.

[23] JORDAN C， LI H H， KWAN H C， et al. Cerebellar gene expression profiles of mouse models for Rett syndrome reveal novel MeCP2 targets[J].BMC Med Genet，2007，8 ：36.