鄯善縣七克臺(tái)鎮(zhèn)農(nóng)技推廣站,新疆吐魯番 838203

蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)作為一種定性的檢測(cè)技術(shù)，因其快速、簡(jiǎn)便、靈敏、經(jīng)濟(jì)，適用于大樣品的篩查檢測(cè)，較多地應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)、蔬菜生產(chǎn)基地、各大超市以及基層農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)機(jī)構(gòu)的日常檢測(cè)工作。

1 規(guī)范檢測(cè)操作環(huán)節(jié)

1.1 檢測(cè)室管理

檢測(cè)室必須保持清潔、整齊、安靜，禁止在檢測(cè)室吸煙、飲食。各種儀器、器皿、試劑標(biāo)志清晰。所有器具及藥品應(yīng)分類有序存放，并張貼明顯的標(biāo)簽。儀器設(shè)備、物品使用完畢后，清洗或擦洗干凈歸還原處。嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求保管好檢測(cè)試劑，管理、維護(hù)、使用好檢測(cè)設(shè)備，保持儀器設(shè)備始終處于良好狀態(tài)。檢測(cè)人員必須嚴(yán)謹(jǐn)務(wù)實(shí)，操作規(guī)范、準(zhǔn)確，客觀公正地做好檢測(cè)記錄結(jié)果，檢測(cè)完畢后，必須切斷水、電源，關(guān)好門窗后離開檢測(cè)室。

1.2 藥品的存放

酶、底物、顯色劑易變質(zhì)失效（通常藥品的保質(zhì)期為一年），其中酶是檢測(cè)成功的關(guān)鍵。酶的種類、活性、純度都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成很大影響，因此藥品的日常存放非常重要。通常藥品需在冷藏條件下存放，0～5℃為宜。已配置好的液體藥劑（如沒有用完的提取液、底物和顯色劑）也要在此條件下存放，切勿冷凍結(jié)冰。另外，建議將配置好的溶液采取分裝制存放，即取即用。

1.3 藥品的配置

提取液（也稱緩沖液）作為其他試劑配制的稀釋劑，它的配置是關(guān)鍵的。提取液需用蒸餾水配置，規(guī)定值pH=0.8，在實(shí)際配置中應(yīng)對(duì)pH值進(jìn)行校正。底物用蒸餾水配置，顯色劑用提取液配置。以上三種藥品的配置要嚴(yán)格按照試劑瓶上規(guī)定的量加入蒸餾水和提取液，同時(shí)注意溫度控制。這三種藥品以及酶試劑需在室溫條件下使用，即藥品的溫度在15～20℃之間為宜。

1.4 樣品的選擇和處理

葉菜類應(yīng)去爛葉、枯葉、蕊葉;果實(shí)類從表皮至果肉1～2 cm處，果肉不宜取過多;含葉綠素和其他色素較高的蔬菜應(yīng)采取整株（體）浸提，盡量避免過多色素浸出，干擾測(cè)定。若實(shí)驗(yàn)室有條件，對(duì)色素干擾嚴(yán)重的過濾液，可用活性碳脫色處理，過濾或離心后，取清液作為待測(cè)液。

蔥（含有揮發(fā)性硫化物）姜（姜辣素）、蒜類（含硫揮發(fā)物，硫化亞磺酸如大蒜素等）、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，往往由于基質(zhì)效應(yīng)引起的干擾產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時(shí)，可采取整株（體）浸提，避免次生物質(zhì)干擾。

1.5 移液器和試劑使用

使用移液器時(shí)，必須遵循器具專用原則:吸取酶、顯色劑、底物的移液器貼上專用標(biāo)簽，移取試劑時(shí)一一對(duì)應(yīng)使用，避免混用污染試劑。使用試劑時(shí)，嚴(yán)格遵循只出不進(jìn)原則:從酶、顯色劑、底物試劑瓶中移出的試劑，不得返回原試劑瓶中，以免污染原試劑。

2 檢測(cè)值常出現(xiàn)的異常問題和解決辦法

2.1 對(duì)照值偏小

首先要保證儀器良好的穩(wěn)定性，同時(shí)確保提取液和藥品均在室溫狀態(tài)下;其次將顯色劑和底物加入提取液后的時(shí)間要嚴(yán)格控制，加入底物后應(yīng)立即檢測(cè)（加入底物10 s內(nèi)即將比色皿放入儀器開始檢測(cè)為宜），盡量縮短操作時(shí)間，否則對(duì)照值會(huì)偏小。

2.2 樣品吸光值偏高

這種現(xiàn)象是由于酶本身活性低，樣品待測(cè)液顏色深以及反應(yīng)中化學(xué)、物理的干擾造成的。解決辦法:一是將酶和其他藥品的溫度提高至室溫;二是按上面提到的方法對(duì)這類蔬菜樣品進(jìn)行特殊處理。

2.3 檢測(cè)結(jié)果中抑制率為負(fù)值

當(dāng)樣品出現(xiàn)較小的負(fù)值誤差-10%以內(nèi)，是在允許范圍之內(nèi)的。這是由檢測(cè)員人為因素導(dǎo)致的。酶分解底物，分解物與顯色劑結(jié)合的過程很快，檢測(cè)員稍有耽擱或不熟練都會(huì)產(chǎn)生人為誤差，導(dǎo)致抑制率為負(fù)值。

2.4 檢測(cè)結(jié)果抑制率無效

一是試劑從冰箱取出后，未恢復(fù)至室溫即進(jìn)行檢測(cè)。二是對(duì)照測(cè)試時(shí)間與樣品測(cè)試時(shí)間相隔太久，導(dǎo)致對(duì)照與樣品測(cè)試溫度條件相差較大。三是被測(cè)樣品色素干擾較嚴(yán)重。四是反應(yīng)試劑取用量是否準(zhǔn)確。

3 假陽性與假陰性

假陽性是由于酶活性降低或失活，底物不與之反應(yīng)，從而不能被水解，無法與顯色劑結(jié)合顯色。假陰性是因?yàn)槟承┺r(nóng)藥對(duì)酶抑制作用很小或無作用而產(chǎn)生的，表現(xiàn)出無農(nóng)藥殘留的假象。另外，在反應(yīng)過程中化學(xué)、物理干擾都有可能導(dǎo)致假陽性、假陰性的發(fā)生。