鄭傳勝，白薇琦

鼻咽癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤，在我國(guó)南方地區(qū)發(fā)病率很高，男性的發(fā)病率是女性發(fā)病率的2～3倍。目前，已有令人信服的證據(jù)支持EB病毒（EBV）是鼻咽癌的重要致病因子，參與鼻咽癌的多階段、多因素發(fā)生過程[1]。近年來，臨床上在利用血清學(xué)協(xié)助診斷鼻咽癌，以重組EBV蛋白制備的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（ELISA） 正在取代傳統(tǒng)的VCA-IgA和EA-IgA酶標(biāo)檢測(cè)[2-3]。國(guó)內(nèi)已有數(shù)篇采用ELISA血清學(xué)診斷鼻咽癌和評(píng)估患鼻咽癌風(fēng)險(xiǎn)的報(bào)道[4-7]。因此，EBV血清學(xué)檢測(cè)在鼻咽癌的早期篩查、輔助診斷、放療后隨訪及轉(zhuǎn)移等方面具有重要意義。

1 EBV及其抗原性

1.1 EBV簡(jiǎn)介 EBV是1970年被發(fā)現(xiàn)的DNA病毒，皰疹病毒屬（人類皰疹病毒5型），人感染EBV的概率極高，達(dá)90%～100%[8]。EBV被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）歸為I類致癌物質(zhì)，并且與鼻咽癌有直接聯(lián)系[9]。EBV與人類多種疾病相關(guān)，其中在鼻咽癌中的研究最多。EBV可致鼻咽上皮永生化，并使其進(jìn)一步惡變[10]。

1.2 EBV的抗原性分類

1.2.1 病毒增殖感染相關(guān)抗原 包括：EBV 早期抗原（EA）、EBV 殼抗原（VCA）及EBV膜抗原（MA），其中EA出現(xiàn)是EBV活躍增殖的標(biāo)志，而VCA和MA屬于EBV的結(jié)構(gòu)抗原。

1.2.2 病毒潛伏感染時(shí)表達(dá)的抗原 即EBV核抗原（EBNA），包括：EBNA1、EBNA2、EBNA3和主導(dǎo)蛋白（LP）。EBNA1為細(xì)胞轉(zhuǎn)化所必須的抗原，也是EBV游離體DNA復(fù)制的必須蛋白，通過與 EBV-DNA直接作用而發(fā)揮作用；EBNA2一般認(rèn)為是B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的必須蛋白，可反式調(diào)節(jié)潛伏膜蛋白 1（LMP1），并能刺激CD21和CD23的產(chǎn)生；EBNA3包括EBNA3A、3B和3C，其中 EBNA3A與 3B細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)，EBNA3C可誘導(dǎo)CD21表達(dá)，可能參與EBV感染細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程；己發(fā)現(xiàn)LP能激發(fā)B細(xì)胞永生化，能與EBNA2協(xié)同誘導(dǎo)周期素D2和推動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程，通過與EBNA2酸性反式激活結(jié)構(gòu)域相互作用，LP可大大增加EBNA2反式激活LMP1表達(dá)的作用[11]。在鼻咽部癌前病變中也發(fā)現(xiàn)EBV單克隆游離體一起表達(dá)LMP1，表明這種病毒的作用是鼻咽癌早期發(fā)病機(jī)制的癌基因[12]。

2 EBV的血清學(xué)檢測(cè)

雖然導(dǎo)致鼻咽癌的病因?qū)W還不是很清楚，但是人們通過各種血清學(xué)試驗(yàn)早就認(rèn)識(shí)到EBV與鼻咽癌之間存在著密切的關(guān)系。血漿 EBV-DNA水平越高，可能TNM分期越傾向于晚期，而且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較廣泛。大量資料顯示，血漿EBV-DNA不僅可以作為鼻咽癌篩查及早期診斷指標(biāo)，而且血漿EBV-DNA檢測(cè)對(duì)于鼻咽癌患者的分期、預(yù)后判斷、監(jiān)測(cè)治療后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移都具有重要意義。文獻(xiàn)報(bào)道，聯(lián)合檢測(cè)EBV-VCA-IgA及EBV-EA-IgA抗體水平對(duì)鼻咽癌具有診斷意義[13]。EBV僅能在B淋巴細(xì)胞中增殖，以環(huán)狀DNA形式游離在胞漿中，并整合于染色體內(nèi)。隨著PCR技術(shù)的推廣，血漿中EBV-DNA水平檢測(cè)也廣泛運(yùn)用于鼻咽癌早期診斷、預(yù)后判斷、療效監(jiān)測(cè)和臨床分期等。

免疫熒光或免疫酶標(biāo)法檢測(cè)血清抗EBV抗體水平已在臨床上常規(guī)應(yīng)用于鼻咽癌的血清學(xué)診斷。近年來，這種方法已逐步被酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）所替代，因?yàn)楹笳吒陀^有效而快速[14]。Chan等[15]和Dardari等[16]認(rèn)為在血清學(xué)診斷鼻咽癌時(shí)，最好合并采用幾種ELISA。

為了提高血清學(xué)診斷鼻咽癌的特異度，建議同時(shí)采用Zta-IgG和EBNA1-IgG或Zta-IgG和EBNA1-IgA兩種ELISA。為了在體檢中早期發(fā)現(xiàn)鼻咽癌或在血清學(xué)方面排除可疑鼻咽癌，建議聯(lián)合應(yīng)用Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG或Zta-IgG/EBNA1-IgG/Zta-IgA 3項(xiàng)ELISA。

3 EBV的血清學(xué)檢測(cè)在鼻咽癌篩查及輔助診斷中的應(yīng)用

EBV已成為研究鼻咽癌病因和相關(guān)標(biāo)志物的重要方面，EBV標(biāo)志物已作為鼻咽癌輔助診斷的重要指標(biāo)。目前已用于臨床的有血清EBV殼抗原-免疫球蛋白A（EBVCA-IgA）、EBV早期細(xì)胞內(nèi)抗原-免疫球蛋白A（EA-IgA）、EBV核抗原-免疫球蛋白A（EBNA-IgA）和EBV DNA酶抗體等。同時(shí)，還有一些很有利用價(jià)值的標(biāo)志物正在研究和探索中，有望近期應(yīng)用于臨床。

3.1 抗EB病毒特異性胸腺嘧啶脫氧核苷激酶（TK）抗體 TK是一種催化胸苷磷酸生成胸苷酸的酶，在DNA的合成調(diào)控中起重要作用。Connoly等[17]用ELISA法檢測(cè)人體血清中針對(duì)EBV編碼TK的IgA抗體，證實(shí)此抗體是一個(gè)良好的鼻咽癌標(biāo)志物，與EBVCA-IgA和EA-IgA相比，具有更高的檢測(cè)靈敏度和相似或更高的特異性。近幾年的相關(guān)報(bào)道少見，能否將TK抗體應(yīng)用于臨床尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。

3.2 EBV潛伏膜蛋白 1（LMP1）基因LMP1基因具有癌基因功能，LMP1與細(xì)胞的轉(zhuǎn)化有關(guān)，可通過干擾細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。用PCR方法檢測(cè)鼻咽癌患者脫落細(xì)胞中的LMP1基因具有很高的靈敏度和特異度。有報(bào)道稱，聯(lián)合檢測(cè)EBV基因組LMP1和EBNA診斷鼻咽癌的靈敏度和特異度分別為91.4%和98.3%[18]，監(jiān)測(cè)鼻咽癌復(fù)發(fā)的靈敏度和特異度可至91.7%和98.6%[19]。隨著PCR技術(shù)的普及，LMP1基因有望作為一種鼻咽癌標(biāo)志物應(yīng)用于臨床。

3.3 抗EB病毒編碼z蛋白（Zebra）抗體和Rta蛋白抗體 任軍等[20]通過研究證實(shí)，抗Rta-IgG可以作為診斷鼻咽癌的標(biāo)志物，其若與Zebra抗體檢測(cè)聯(lián)合使用，可進(jìn)一步提高鼻咽癌篩選和診斷的靈敏度或特異度。

3.4 EBV的DNA分子 近年來，隨著實(shí)時(shí)PCR技術(shù)的推廣應(yīng)用，大量研究證實(shí)EBVDNA分子是一種良好的鼻咽癌標(biāo)志物，可以廣泛應(yīng)用于鼻咽癌的早期診斷、預(yù)后判斷、療效監(jiān)測(cè)及臨床分期等各個(gè)方面。有報(bào)道認(rèn)為血漿EBV DNA診斷鼻咽癌的靈敏度和特異度可至96%和93%，并可用于鼻咽癌分期、預(yù)測(cè)及監(jiān)測(cè)鼻咽癌患者的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[21]。近幾年，國(guó)內(nèi)外關(guān)于EBVDNA作為鼻咽癌標(biāo)志物的報(bào)道還有很多，基本上都持肯定的態(tài)度，隨著相關(guān)儀器的逐步普及，對(duì)EBV DNA的檢測(cè)必將得到進(jìn)一步推廣。

4 EBV的血清學(xué)檢測(cè)在鼻咽癌放療后隨訪中的應(yīng)用

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，放療前后EBV-VCAIgA、EBV-EA-IgA陽(yáng)性率變化無明顯差異，提示此兩項(xiàng)陽(yáng)性率指標(biāo)對(duì)療效觀察不敏感，可能是由于兩種抗體在人體內(nèi)的半衰期較長(zhǎng)，即使體內(nèi)EBV清除后，仍有較長(zhǎng)時(shí)間維持在較高濃度，因此發(fā)生質(zhì)變即轉(zhuǎn)陰仍不明顯。但其陽(yáng)性抗體滴度較治療前有較明顯下降，此與曾希等[22]的研究結(jié)果相似。這些可間接提示，隨著治療進(jìn)行與病灶的縮小，EBV-VcAIgA、EBV-EA-IgA抗體滴度逐漸下降，有著量變的過程，也間接提示 EBVVCA-IgA、EBV-EA-IgA與治療過程呈一定相關(guān)性。結(jié)果顯示EBVDNA治療前后陽(yáng)性率有明顯變化，提示該指標(biāo)對(duì)療效觀察敏感。臨床實(shí)驗(yàn)中，若經(jīng)過治療，EBV DNA迅速轉(zhuǎn)陰，提示隨著治療腫瘤縮小及清除，若EBV也隨之清除，體現(xiàn)在EBV DNA水平迅速下降轉(zhuǎn)陰，故可以判斷EBVDNA對(duì)監(jiān)測(cè)鼻咽癌放療后的療效存在價(jià)值。通過檢測(cè)治療前后EBV DNA水平可以發(fā)現(xiàn)，預(yù)后越差者其EBV DNA水平越高。因此，鼻咽癌患者血漿EBVDNA可以準(zhǔn)確反應(yīng)腫瘤負(fù)荷[23]，并隨著腫瘤的清除而迅速下降至檢測(cè)極限值以下[24]?？傊茄拾┓暖熀蠡颊哐獫{EBVDNA是監(jiān)測(cè)腫瘤進(jìn)展的有效方法，有利于早期診斷復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，并采取臨床干預(yù)措施。

5 EBV的血清學(xué)檢測(cè)在鼻咽癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移判定中的應(yīng)用

目前，多數(shù)研究結(jié)果認(rèn)為鼻咽癌患者血漿 EBV DNA定量檢測(cè)對(duì)監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移有重要的臨床意義。侯雪等[25]對(duì)69例初治鼻咽癌患者分別在治療前和治療結(jié)束時(shí)采用熒光定量 PCR方法檢測(cè)血漿EBV DNA濃度，結(jié)果顯示治療前、后 EBV DNA濃度是預(yù)測(cè)患者是否出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要分子生物學(xué)標(biāo)志，其中治療后血漿EBV DNA濃度能否降為0的預(yù)測(cè)意義更大。

LMP1為EBV編碼的重要瘤蛋白，通過激活相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)細(xì)胞異常生物學(xué)行為，與鼻咽癌形成密切相關(guān)[26]。LMP1的表達(dá)與鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)[27]。李剛等[28]應(yīng)用DNA載體介導(dǎo)RNA擾技術(shù)，抑制LMP1基因表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，LMP1基因可能通過貼壁生長(zhǎng)能力、基底膜穿透能力和細(xì)胞移動(dòng)能力等，影響鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

6 總結(jié)

大量研究表明，EBV與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，EBV的作用機(jī)制有很多種，需要進(jìn)一步研究和闡述。EBV血清學(xué)檢測(cè)對(duì)鼻咽癌早期篩查、輔助診斷、放療后隨訪及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的判定都具有重要意義。對(duì)EBV血清學(xué)檢測(cè)和鼻咽癌關(guān)系的深入研究將對(duì)今后鼻咽癌的早期診斷和治療起到積極的指導(dǎo)作用，對(duì)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、預(yù)后和生存率的判斷有一定的幫助。

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