李貴春 許延敏 龐啟亮 梁秀鳳 胡海冰 李宏濤 劉 柱 劉昕哲

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大興安嶺野生蜜環(huán)菌人工馴化種植初探

李貴春 許延敏 龐啟亮 梁秀鳳 胡海冰 李宏濤 劉 柱 劉昕哲

（大興安嶺地區(qū)農(nóng)業(yè)林業(yè)科學研究院，黑龍江 大興安嶺 165000）

采集黑龍江省大興安嶺加格達奇區(qū)蜜環(huán)菌菌株多個，利用PDA培養(yǎng)基分離、純化獲得優(yōu)良菌株Ar1603和Ar1604-2，制作三級菌袋，在大棚內(nèi)進行人工馴化種植，實現(xiàn)當年出菇，Ar1603平均產(chǎn)量為2.84 kg/m2，Ar1604-2平均產(chǎn)量為3.42 kg/m2。

大興安嶺；野生蜜環(huán)菌；分類；分布；人工馴化種植

蜜環(huán)菌（）是一種兼性寄生于多種木本、草本植物的食用菌，廣泛分布于亞洲、歐洲、北美洲等溫帶地區(qū)，中國的河北、山西、黑龍江、吉林、浙江、福建、廣西、陜西、四川、云南、貴州、西藏等省（自治區(qū)）也有分布[1]。大興安嶺地區(qū)在夏秋季節(jié)大量發(fā)生。蜜環(huán)菌隸屬于擔子菌綱、傘菌目、白蘑科（），又名榛蘑[2]，具有很高的食用價值。由于每年氣溫及降雨時期的不同，野生蜜環(huán)菌產(chǎn)量呈現(xiàn)周期性大幅度波動[3]。

1 蜜環(huán)菌分類

蜜環(huán)菌最先是1766年丹麥植物學家Martin Vahl以種名在《Flora Danica》上發(fā)表，當時僅有一個漂亮的圖和簡短的描述。1819年瑞典植物學家Elias Fries在屬中建立一個新族。從Fries到現(xiàn)在的200年間，基于形態(tài)學的蜜環(huán)菌屬的分類一直比較混亂，蜜環(huán)菌屬所包括的種類和數(shù)量，一直是爭論的焦點之一[4]。

自1973年，Hintikk發(fā)現(xiàn)蜜環(huán)菌的四極性性別系統(tǒng)，借助于交配測試的幫助，研究該屬的互交不育性成為可能。利用互交不育群即生物種（每一個互交不育群為一個生物種）的研究，對蜜環(huán)菌進行鑒定。交配測試表明，依據(jù)子實體形態(tài)鑒定為蜜環(huán)菌的菌株中存在著許多互交不育群（生物種）。說明蜜環(huán)菌是一個由多個生物種組成的復合種。我國對蜜環(huán)菌分類始于20世紀90年代，利用交配測試方法，經(jīng)秦國夫[4]、孫立夫[5]、賀偉[2]等的研究，先后發(fā)現(xiàn)14個蜜環(huán)菌生物種，其中東北地區(qū)常見有5個生物種，即芥黃蜜環(huán)菌（），高盧蜜環(huán)菌（），奧氏蜜環(huán)菌（），黃蓋蜜環(huán)菌（）和中國生物種F（CBS F）。是在黑龍江省境內(nèi)分布范圍最廣、出現(xiàn)頻率最高的一個生物種；其次是CBS F，在小興安嶺和黑龍江東部的完達山脈有分布；則局限于大興安嶺和小興安嶺地區(qū)，出現(xiàn)的頻率不高；而和則出現(xiàn)于小興安嶺的伊春林區(qū)[5, 6]。

2 蜜環(huán)菌在大興安嶺的分布

2.1 地域分布趨勢

蜜環(huán)菌是黑龍江省一種重要的食用真菌，在黑龍江省大興安嶺地區(qū)分布呈現(xiàn)地域差異，于本區(qū)東部和南部，即在加格達奇區(qū)、松嶺區(qū)、呼瑪縣等地分布較多，新林區(qū)、塔河縣兩地多分布于南部及東部，呼中區(qū)偶見分布，漠河縣未見分布。

2.2 時間分布趨勢

大興安嶺地區(qū)，因每年氣溫變化和降水的不同，蜜環(huán)菌出菇期大致分為兩個高峰，如加格達奇區(qū)第一個出菇高峰期在7月20日至8月10日，第二個高峰期在8月20日至9月25日。2016年至2017年在兩個不同區(qū)域（相距30 km）的同一地塊分別采樣，2016年采集到大量蜜環(huán)菌，而2017年則僅采集到零星幾個蜜環(huán)菌子實體。說明野生蜜環(huán)菌的發(fā)生不具連續(xù)性。

3 蜜環(huán)菌人工馴化種植

3.1 母種獲得

分別于2016年9月6日和9月10日在距加格達奇區(qū)市中心向北、向南各13公里區(qū)域采集到野生蜜環(huán)菌子實體，選擇個體較大、質(zhì)地飽滿肥厚、尚未開傘、無病蟲危害的幼菇，按照采集先后順序暫定名為Ar1601、Ar1602、Ar1603和Ar1604-1、Ar1604-2。

采用組織分離的方法獲得純菌種。將種菇帶回接種室后，在超凈工作臺內(nèi)用75%酒精棉擦凈子實體表面，然后用手術刀將子實體縱剖成兩半,在菌蓋與菌柄交界處切取0.3～0.5×0.3～0.5（cm）大小的組織，置于PDA培養(yǎng)基中，于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，所得到的菌株為F0代。

3.2 優(yōu)勢菌株選擇與純化

（1）培養(yǎng)基配方。采用PDA培養(yǎng)基，以馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、磷酸二氫鉀3 g、硫酸鎂1.5 g配制。

（2）優(yōu)勢菌株選擇與純化。對蜜環(huán)菌分離后的優(yōu)勢菌株選擇，主要視其分離后子實體組織萌發(fā)速度和菌索的發(fā)生勢進行優(yōu)勝劣汰。選擇其中分離組織生長勢強的進行轉管。轉管時切取長勢旺盛、幼嫩的菌索（長0.2～0.3 cm）轉接到培養(yǎng)基表面，獲得F1代菌種，并將其置于23～25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)。當長出新菌索后，再次選擇菌索生長健壯的試管種進行轉管，獲得的F2代菌種繼續(xù)培養(yǎng)至菌索長滿試管保存?zhèn)溆谩＝?jīng)過上述選擇與純化，獲得表現(xiàn)優(yōu)良的菌株Ar1603和Ar1604-2。

3.3 原種制作

于2016年12月26日制作原種，培養(yǎng)基配方為闊葉木屑77%、麩皮20%、蔗糖2%、石膏粉1%，含水量62%～65%，pH自然。

在無菌條件下，將母種F2代轉接于原種培養(yǎng)基中擴大繁殖，每支母種試管轉接5袋原種。然后置于25 ℃條件下避光培養(yǎng)，約30天長滿全袋。

3.4 栽培種制作

于2017年3月2日制作栽培種，培養(yǎng)基配方為闊葉木屑78%、麩皮20%、蔗糖1%、石膏粉1%，含水量63%～65%，pH自然。每袋原種轉接40～50袋栽培種，置于溫度20～25 ℃、濕度30%～40%培菌室內(nèi)培養(yǎng)，定期檢查菌袋生長情況并進行通風管理，防止培養(yǎng)室溫度過高過低、濕度過大或通風不良。

3.5 出菇栽培試驗

于2017年5月24日至8月20日，在大棚內(nèi)進行馴化種植。采用半脫袋立式劃口地栽模式。具體方法是做長2 m、寬1.2 m的畦床，床土為普通草甸土，厚15 cm；將栽培種菌袋接種口一側脫袋14 cm，埋于地下，地上部分為6～7 cm，劃4個V形口。袋間距為15 cm，每平方米擺16袋。床上和袋上覆3 cm厚干樹葉。

溫度管理：棚內(nèi)前期扣大棚膜，溫度保持在15～28 ℃，6月10日以后扣6針遮陽網(wǎng)，溫度控制在26 ℃以下。

濕度管理：從5月26日開始，每天向棚內(nèi)的栽培床澆水2～3次，每次30 min，使土壤含水量達95%以上。6月16日以后，棚內(nèi)每天早晚各澆水20 min，保證栽培床內(nèi)土壤濕度90%左右，夜間空氣濕度達85%以上。

光照管理：6月2日在畦床上覆蓋草簾遮陰、降溫。6月16日將草簾撤去，換成2層遮陽網(wǎng)。8月初，菇蕾形成期揭去畦上遮陽網(wǎng)，保留大棚上的遮陽網(wǎng)。

3.6 不同菌株的產(chǎn)量與子實體形態(tài)

自8月10日開始有原基形成，并很快出菇，8月15日子實體長至九分熟時采收。產(chǎn)量采用隨機調(diào)查方式，每個菌株調(diào)查3組，每組調(diào)查1 m2內(nèi)所采收的子實體鮮重，并觀察記錄子實體形態(tài)。結果為：Ar1603平均產(chǎn)量為每平方米2.84 kg，子實體較小，叢生，菌蓋直徑3～5 cm，有鱗片，褐色，有菌環(huán)；菌柄上部白色，根部褐色。Ar1604-2平均產(chǎn)量為每平方米3.42 kg，子實體菌蓋直徑4～6 cm，淡黃色，中部有鱗片狀小斑點；菌褶延生、稍密、不等長，菌環(huán)初期有膜質(zhì)，后期變??；菌柄細長圓柱形，褐色，根部色深。

4 結 論

利用當?shù)氐囊吧郗h(huán)菌資源，經(jīng)過一年的試驗研究，初步篩選出優(yōu)良蜜環(huán)菌菌株Ar1603和Ar1604-2，并通過采用春季大棚內(nèi)立式半脫袋床栽模式成功實現(xiàn)了當年種植、當年出菇，出菇較整齊。但其生物學效率不夠理想，有待進一步試驗研究。

[1] 王秋穎, 郭順星. 天麻人工栽培技術[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2001: 34-36.

[2] 賀偉, 秦國夫, 沈瑞祥. 大興安嶺和長白山地區(qū)蜜環(huán)菌生物種的研究[J]. 真菌學報, 1996, 15(1): 9-16.

[3] 劉琳, 林源曉, 陳智明, 等黃綠蜜環(huán)菌的研究進展[J]. 福建輕紡, 2013(8): 23-28

[4] 秦國夫. 中國蜜環(huán)菌的遺傳學與系統(tǒng)學研究 [D]. 北京: 中國林業(yè)科學研究院, 2002.

[5] 孫立夫. 黑龍江省蜜環(huán)菌生物種的研究[D]. 哈爾濱: 東北林業(yè)大學林學院, 2003.

[6] 李向前, 黃永青, 程東升. 中國北方地區(qū)蜜環(huán)菌生物種的初步研究[J]. 菌物系統(tǒng), 1998, 17(4): 307-311.

李貴春（1962—），男，漢族，黑龍江省望奎縣人，高級農(nóng)藝師，農(nóng)學學士學位，主要從事蔬菜和食藥用真菌栽培及推廣工作。E-mail ：xym200065@126.com。

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