謝倩　汪婷　李佳楠

摘 要 采集市場上幾種常見的有籽葡萄及無籽葡萄品種樣本，采用有機溶劑提取法進行原花青素的提取，利用鐵鹽催化比色法測定葡萄籽及葡萄皮中原花青素的含量。結(jié)果顯示在有籽葡萄中，黑加侖葡萄籽及葡萄皮原花青素含量是所有葡萄中最高的，分別為葡萄籽中232.1mg/g，葡萄皮中125.5mg/g；在無籽葡萄中，葡萄皮原花青素含量最高的品種為黑提，為51.9mg/g。本研究結(jié)果為原花青素食品和保健品的開發(fā)提供了實驗依據(jù)，同時也對幫助人們選擇食用高水平原花青素含量的葡萄具有指導意義。

關(guān)鍵詞 原花青素 鐵鹽催化法 葡萄籽 葡萄皮

中圖分類號：R151 文獻標識碼：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdks.2017.12.077

Determination of PCs Content In Grape Seeds and Skins

of Several Common Varieties

XIE Qian， WANG Ting， LI Jianan*

（Department of Biotechnology， School of Life Science， Jianghan University，

Wuhan， Hubei 430056）

Abstract Several common seeded and seedless grapes in market were collected as samples. The pronthocyanidins（PCs） were extracted by organic solvent methods， and then content of the PCs in all samples were analysed by the method of ferric ion catalysis-colorimetry. The statistical analysis reflected that the PCs content of black currant's seed and skin were the highest， it was up to 232.1mg/g in seed， and 125.5mg/g in skin among the seeded grapes. The PCs content of RedGloble skin reached as much as 51.9mg/g in seedless grapes. This research can supply the public guidance for choosing the high PCs content of grapes. The experimental basis was provided by the outcome for the development of foodstuff health care products containing PCs.

Keywords pronthocyanidin； ferric ion catalysis-colorimetry； grape seed； grape skin

原花青素（Proanthocyanidins，簡稱 PC）是自然界廣泛存在的多酚類化合物的總稱。這類化合物由不同數(shù)目的黃烷醇聚合而成，在無機酸存在和加熱處理下能產(chǎn)生紅色的花青素。原花青素具有多種藥理活性，如抗氧化、清除自由基、護肝解毒、抗菌及抗癌等功能。[1]目前，原花青素已廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域。[2]

原花青素一般存在于果皮及植物的木實部，多見于水果，如葡萄、山楂、番荔枝、野草莓、櫻桃、扁桃和椰子等。其中以葡萄籽中的含量最為豐富，本研究采集了市場上幾種常見品種的葡萄，通過測定葡萄籽和葡萄皮中原花青素的含量，為富含原花青素食品和保健品的開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

市場上常見的7個葡萄品種，分別為：有籽紅提、冰糖葡萄、巨峰、黑加侖、玫瑰香、無籽紅提、黑提，各品種葡萄的成熟度均勻一致。

1.2 試劑

甲醇，鹽酸，原花青素純品，硫酸鐵銨，正丁醇。

1.3 儀器與設(shè)備

分析天平，全波長酶標儀，干燥箱，60目篩，離心機，旋渦震蕩器。

1.4 實驗方法

1.4.1 葡萄樣品的處理

將葡萄籽及葡萄皮分別收集，洗凈葡萄籽及葡萄籽表面的果肉，將洗凈的葡萄籽及葡萄皮置于干燥箱中至完全干透，然后研磨過篩，將過篩后的樣品置于干燥處保存。

1.4.2 原花青素標準溶液的制備[3]

精密稱取原花青素標準品10mg，用甲醇溶解定容至10ml，制成1mg/ml原花青素標準溶液。

1.4.3 分析試劑的制備[4]

精密稱取硫酸鐵銨2.00g，加2mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至100ml，搖勻，即為2.0%硫酸鐵銨溶液。于100ml容量瓶中加入約2/3的正丁醇，精密加入2mol/L鹽酸5.0mL，用正丁醇定容至刻度，即為5%HCl/正丁醇溶液。

1.4.4 標準曲線的建立[5]

分別精密吸取原花青素標準溶液40ul、100ul、200ul、400ul、600ul，用甲醇稀釋至4000ul（濃度即為0.01mg/ml、0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.15mg/ml）。分別精密吸取上述溶液400ul，加入2.4ml的5%鹽酸/正丁醇溶液，80ul的2.0%硫酸鐵銨溶液于具塞試管中，將試管瓶口密塞，置沸水中水浴加熱40min，冰浴冷卻15min；用400ul甲醇，2.4ml的5%鹽酸/正丁醇溶液，80ul的2.0%硫酸鐵銨溶液做空白組。在波長400～800nm范圍內(nèi)掃描，分析最大吸收波長。endprint

將原花青素標準溶液每濃度設(shè)3個平行孔，并分別設(shè)置空白孔以調(diào)零。用酶標儀測定，以吸光度為縱坐標，原花青素濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.4.5 樣品中原花青素含量的測定

準確稱取樣品粉末0.2g，加入4ml甲醇，用旋渦震蕩器20min，3000r/min離心20min，取上清液1ml于10ml容量瓶中定容，方法同上，測定。[6]將數(shù)據(jù)代入標準曲線可計算得樣品中原花青素濃度。

2 結(jié)果

在全波長酶標儀400～800nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示原花青素標準液最大吸收波長。為550nm，見圖1。

以原花青素濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線如圖2所示，求得吸光度與標準品質(zhì)量濃度關(guān)系的線性回歸方程為：y = 1.8175x - 0.0009，相關(guān)系數(shù)為R2 = 0.9983，說明對照品在0.010～0.150 mg/mL范圍內(nèi)，y與濃度x呈良好線性關(guān)系，可按標準曲線法進行定量分析。

測定樣品原花青素吸光值后，代入標準曲線并根據(jù)以下公式計算樣品中原花青素含量如圖3所示。

公式：原花青素含量D（mg/g）：D=（V€讀€譶）/W

式中V為試劑定容體積（mL），C為試劑中原花青素濃度（mg/ml），n為稀釋倍數(shù)，W為試劑重量（g）。

從圖3中可以看出，在所有葡萄品種中黑加侖的葡萄籽原花青素含量最高，為232.1mg/g，其次是有籽紅提的籽，為161.4mg/g；在所有葡萄品種中黑加侖的葡萄皮原花青素含量也最高，為125.5mg/g，其次是黑提皮，為51.9mg/g。

3 討論與小結(jié)

花青素作為一種具有保健功效的天然色素越來越引起人們的關(guān)注，但目前國內(nèi)市場上還沒有花青素純品。[7]發(fā)掘高花青素水平的植物可為提取高純度的花青素以及對花色苷類色素的深入研究與開發(fā)提供實驗依據(jù)，并且有助于應(yīng)用和推廣。本研究實驗結(jié)果顯示葡萄籽和葡萄皮中的原花青素含量豐富，特別是黑加侖葡萄，其花青素含量顯著高于其他品種的葡萄，是值得推薦的健康食品，也為后續(xù)開發(fā)原花青素類的保健品提供了實驗依據(jù)。

*通訊作者：李佳楠

參考文獻

[1] 張星和，楊曉娜.原花青素提取方法進展[J].南方農(nóng)業(yè)，2014.8（30）：154-155.

[2] 侯銳，陳琦，王利，等.花青素及其生物活性的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2015.15（28）：5590-5593.

[3] 鐘益寧，柳歡，吳詩云，等.肉桂枝葉非揮發(fā)部分原花青素含量測定的比較研究[J].中國調(diào)味品，2016.41（8）：110-114.

[4] 陳安平，黃勇軍，汪勝峰.市售藍莓類產(chǎn)品的原花青素含量測定[J].食品研究與開發(fā)，2016.37（1）：170-173.

[5] 吳艷艷，侯冬巖，回瑞華.鐵觀音茶和茶莖原花青素含量的測定[J]鞍山師范學院學報，.2012.14（2）：30-33.

[6] 廖素鳳，陳劍雄，黃志偉，等.響應(yīng)曲面分析法優(yōu)化葡萄籽原花青素提取工藝的研究[J].熱帶作物學報，2011.32（3）：554-559.

[7] 趙美麗，屈文峰，邊風根.藍莓原花青素的提取與檢測方法[J].江西化學，2014：123-125.endprint