（如皋市家畜改良站，江蘇如皋 226500）

在規(guī)?；i場(chǎng)的養(yǎng)殖過(guò)程當(dāng)中，仔豬腹瀉是一種常見(jiàn)的疾病和狀況。仔豬腹瀉會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的后果，在很大程度上降低養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益，并且仔豬腹瀉的病原類型非常多，具有傳染性，所以必須防止疾病的蔓延，從而做出準(zhǔn)確的判斷。通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，仔豬腹瀉的病原主要分為大腸桿菌、胃腸炎病毒、豬輪狀病毒以及豬流行性腹瀉病毒。這四種不同的病原，分別對(duì)仔豬腹瀉產(chǎn)生不同的影響。

1 使用材料以及具體方法

想要確診規(guī)模化豬場(chǎng)仔豬腹瀉幾種不同病原的具體感染情況，就應(yīng)該進(jìn)行一定的實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)中，應(yīng)該選擇合理的材料，并且使用恰當(dāng)?shù)姆椒?。?duì)于材料的選擇，應(yīng)該對(duì)照大腸桿菌進(jìn)行選購(gòu)，并且準(zhǔn)備好在實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)中所使用的試劑盒以及相關(guān)的工具和材料。

首先，應(yīng)該對(duì)大腸桿菌進(jìn)行分離純化處理。應(yīng)該通過(guò)具體的調(diào)查，明確規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉的具體情況，并且選擇典型的豬場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查和研究?？梢圆捎檬占胸i腹瀉的糞便樣本，對(duì)這些樣本進(jìn)行處理，涂抹于培養(yǎng)基之上。并且保證這些樣本的所處的環(huán)境，應(yīng)該在37℃，進(jìn)行培養(yǎng)，具體的培養(yǎng)時(shí)間是24小時(shí)。與此同時(shí)，應(yīng)該選取紅色的典型菌落進(jìn)行培養(yǎng)，并且使用甘油進(jìn)行保存。

其次，進(jìn)行致病性大腸桿菌的鑒定工作。應(yīng)該準(zhǔn)備好反應(yīng)的模板，將大腸桿菌進(jìn)行分離處理，并且對(duì)照相應(yīng)的菌種進(jìn)行接種，平行放置。在37℃的環(huán)境之下，培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)，并且使用清水進(jìn)行洗滌。PCR檢測(cè)工作應(yīng)該針對(duì)大腸桿菌進(jìn)行，并且設(shè)計(jì)相應(yīng)的菌毛引物，使用相應(yīng)的擴(kuò)增方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中應(yīng)該明確反映的具體體積，并且進(jìn)行模板點(diǎn)樣。反應(yīng)程序具有一定的預(yù)變性，所以必須不斷地變化溫度和時(shí)間進(jìn)行保存。這樣才能夠在具體的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳。另外，PCR檢測(cè)仔豬水腫病大腸桿菌也是一項(xiàng)重要的工作內(nèi)容。這種仔豬的大腸桿菌與兩個(gè)毒力因子息息相關(guān)。這兩個(gè)毒力因子分別為菌毛以及水腫毒素。不斷地進(jìn)行循環(huán)處理，在處理過(guò)程當(dāng)中應(yīng)該延伸和保存。

最后，上文已經(jīng)提到規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉的幾種病原，其中分別為傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒、流行性腹瀉病毒等。對(duì)這幾種病毒的感染情況進(jìn)行調(diào)查和分析。就應(yīng)該做好病料的處理工作。在采集樣本之后，應(yīng)該使用溶液進(jìn)行稀釋處理，并且將處理之后的溶液反復(fù)的動(dòng)容，這樣才能夠做好離心處理工作。隨后應(yīng)該加入清液，再次離心，不斷地收集清液，進(jìn)行合理的保存。RNA的提取工作應(yīng)該值得關(guān)注，使用相應(yīng)的試劑盒進(jìn)行提取，上文提到的樣品應(yīng)該加入試劑盒之內(nèi)，在室溫的條件之下，應(yīng)該放置10min。隨后將這種混合溶液進(jìn)行轉(zhuǎn)移，再次放置2min。在2min之后進(jìn)行離心處理，離心處理的時(shí)間為1分鐘。經(jīng)過(guò)一系列的處理之后，應(yīng)該丟棄流出的溶液，并且將殘留RNA溶液進(jìn)行收集。從而放入專業(yè)的離心管當(dāng)中，放置2min之后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1 使用PCR鑒定致病性大腸桿菌

根據(jù)規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉的幾個(gè)不同的樣本，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和分析，并且分離出大腸桿菌，經(jīng)過(guò)PCR的鑒定，擴(kuò)增之后會(huì)形成凝膠電泳。結(jié)果顯示，幾個(gè)不同的規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉病人感染當(dāng)中，檢測(cè)為陰性，與此同時(shí)，檢測(cè)到的大腸桿菌以及只豬水腫病大腸桿菌，出現(xiàn)異常狀況。所有的豬場(chǎng)當(dāng)中，并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)并且明確大腸桿菌的條帶以及水腫毒素條帶。

2.2 使用RT-PCR鑒定豬輪狀病毒

對(duì)豬輪狀病毒進(jìn)行RT-PCR鑒定工作，首先應(yīng)該進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳處理，結(jié)果顯示豬場(chǎng)當(dāng)中檢測(cè)到的特有條帶，所以具有陽(yáng)性性質(zhì)。

2.3 使用RT-PCR鑒定傳染性胃腸炎病毒以及流行性病毒

對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒以及豬流行性腹瀉病毒進(jìn)行RT—PCR的鑒定工作，結(jié)果顯示，某個(gè)豬場(chǎng)當(dāng)中檢測(cè)到特有條帶。另外其他的豬場(chǎng)當(dāng)中經(jīng)過(guò)檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)有一種特有條帶。這就說(shuō)明這個(gè)豬場(chǎng)同時(shí)感染了兩種不同的病原。而其他的豬場(chǎng)當(dāng)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特有條帶，因此具有一定的陽(yáng)性率。

3 探討

上文在實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程當(dāng)中，充分應(yīng)用的PCR技術(shù)以及IRTPCR技術(shù)，這兩種方法受到一定的認(rèn)可。與傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室方法相比較，這兩種方法具有一定的特殊性，反應(yīng)靈敏迅速，并且能夠直接檢測(cè)到相關(guān)的樣品。因此在對(duì)規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉幾種病原感染情況的調(diào)查過(guò)程當(dāng)中，必須充分應(yīng)用這兩種專業(yè)檢測(cè)技術(shù)。規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉是一種常見(jiàn)的疾病，并且在寒冷季節(jié)容易發(fā)病。這病的原因大多數(shù)是病毒的感染。而引起規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉的幾種病原，也根據(jù)不同的地區(qū)，以及不同的時(shí)間存在較大的差異性。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，在豬場(chǎng)管理工作進(jìn)行過(guò)程當(dāng)中，不斷地提高養(yǎng)殖技術(shù)，并且改善養(yǎng)殖的環(huán)境和條件。因此能夠較好地控制相應(yīng)的病毒。這種情況之下，病原檢測(cè)工作一般不會(huì)檢測(cè)到陽(yáng)性。

豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒以及豬輪狀病毒是引起規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉的幾種常見(jiàn)的病原，因此必須對(duì)這幾種病毒進(jìn)行深入的研究和分析，這樣才能夠控制病毒的蔓延，有效解決規(guī)模化豬場(chǎng)仔豬腹瀉問(wèn)題。這幾種病毒通常呈現(xiàn)出單獨(dú)感染或者多重混合感染的狀態(tài)。通過(guò)對(duì)黑龍江某地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)養(yǎng)豬的樣品進(jìn)行病原檢測(cè)分析，結(jié)果顯示，在所選取的樣品當(dāng)中，有三分之一的樣品存在豬傳染性胃腸炎病毒，另外也有一部分檢測(cè)的豬輪狀病毒和胃腸炎病毒呈現(xiàn)出陽(yáng)性特點(diǎn)。這就說(shuō)明這個(gè)地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)養(yǎng)豬存在比較嚴(yán)重的仔豬腹瀉問(wèn)題。必須加強(qiáng)對(duì)這些感染病的控制和處理，提高管理力度。在我國(guó)很大一部分的范圍之內(nèi)，這幾種病毒呈現(xiàn)出點(diǎn)狀散發(fā)的狀態(tài)，因此具有一定的蔓延性，影響的后果也是非常嚴(yán)重的。所以必須投入經(jīng)濟(jì)成本以及相應(yīng)的管理力度，進(jìn)行疾病的控制工作。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)，在南方的一些地區(qū)當(dāng)中，規(guī)?；i場(chǎng)仔豬養(yǎng)殖都會(huì)出現(xiàn)不同程度的腹瀉問(wèn)題，并且在檢測(cè)病原的過(guò)程當(dāng)中存在多種類型。所以必須做出正確的診斷，找到病原所在，才能對(duì)癥下藥。弄清致病因子，保證明確病原感染的種類和類型，有效地降低經(jīng)濟(jì)損失。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，上文已經(jīng)對(duì)我國(guó)一些地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)仔豬腹瀉的病原感染情況進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究和分析，總結(jié)出導(dǎo)致規(guī)模化豬場(chǎng)紫竹腹瀉的幾種不同的病源類型。其中包括致病性大腸桿菌病毒、不輪狀病毒，以及傳染性胃腸炎病毒等。這幾種不同的病原是比較常見(jiàn)的，必須使用專業(yè)的技術(shù)手段進(jìn)行鑒定。這樣才能夠保證豬場(chǎng)以及相關(guān)養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)不會(huì)受到損失，有效解決病毒問(wèn)題。

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