陸榮生，劉曉星，韓美麗，王迎潔，梁志強(qiáng),藍(lán)彩霞

(1.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 微生物研究所,廣西 南寧 530007；2.國營高峰林場，廣西 南寧 530007；3.桂林百草園農(nóng)業(yè)科技有限公司，廣西 桂林 542000)

紫芝(Ganodermasinense)是《中國藥典(2010)》中有記載的靈芝重要品種之一[1]。紫芝具有較高的藥用與食用價值，對于多種慢性病，如慢性氣管炎、白細(xì)胞減少癥、冠心病等具有較好的療效，長期服用還可減輕神經(jīng)衰弱癥狀[2]。紫芝含有多種人體需要的藥理活性成分，例如它含有18種多糖、39種三萜類化合物、9種生物堿[3]。紫芝目前的栽培方法主要分段木栽培與袋料栽培[4-6]。包括紫芝在內(nèi)的食用菌段木栽培對林業(yè)資源保護(hù)有一定的影響，由于木腐菌對林木資源的高依賴性,會導(dǎo)致部分林業(yè)自然資源的損耗[7]。袋料栽培主要利用農(nóng)林加工業(yè)的副產(chǎn)品，如木屑、棉子殼、玉米芯等，通過廢物再利用，不僅提高了所屬行業(yè)的附加值，對于環(huán)境保護(hù)及林業(yè)資源可持續(xù)循環(huán)利用也有較大意義。

相思樹(AcaciaconfusaMerr.)屬金合歡屬具固氮能力的常綠速生喬木，近年來，我國廣西、廣東、福建等地大量人工種植，其材質(zhì)堅硬，用途廣泛，可用于造紙、農(nóng)具、家具及烤焦的提取[8]。在相思樹砍伐加工利用過程中，產(chǎn)生了許多廢葉與木屑，這些廢葉與木屑中含大量蛋白質(zhì)、木質(zhì)素、纖維素等食用菌可以利用的營養(yǎng)成分[9-10]，但一直未被有效利用。目前國內(nèi)尚無相思樹木屑栽培紫芝的報道。

本試驗在紫芝母種、原種、栽培種、出菇袋4個層次上添加不同含量馬占葉思樹干葉片與木屑，通過調(diào)查菌絲生產(chǎn)與生物轉(zhuǎn)化率，研究相思樹干葉片與木屑紫芝人工代料栽培,以期為紫芝代料栽培開拓新的原料來源。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用紫芝菌株WS-4采自廣西灌陽縣西山鄉(xiāng)，經(jīng)組織分離獲得。所用馬占相思樹(Acaciamangium)干葉片與鋸木屑來源于廣西國營高峰林場木材加工廠。

1.2 試驗方法

1.2.1 母種培養(yǎng)基添加馬占相思干葉片對菌絲生長的影響 在PDA母種培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，添加不同含量的馬占相思干葉片以觀察其對母種菌絲生長的影響。PDA基本培養(yǎng)基(CK1)配方:馬鈴薯200 g、蔗糖20 g、瓊脂粉7.0 g、水1000 mL。馬占相思干葉片加入量分別為0、10.0、50.0、100.0、150.0、200.0、250.0 g/L。另設(shè)培養(yǎng)基(CK2)配方：馬鈴薯200 g、蛋白胨5.0 g、蔗糖20 g、瓊脂粉7.0 g、水1000 mL。

1.2.2 馬占相思干葉片加入量對原種、栽培種菌絲生長的影響 在棉子殼基本培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，添加不同含量的馬占相思干葉片觀察其對原種、栽培種菌絲生長的影響。原種、栽培種基本培養(yǎng)基配方為:棉子殼980 g、過磷酸鈣10 g、石膏10 g。原種、栽培種各處理基本培養(yǎng)基基礎(chǔ)上馬占相思干葉片添加量分別為0、50.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0 g/kg。

1.2.3 相思樹木屑加入量對出菇袋菌絲生長與產(chǎn)量的影響 在出菇袋中，加入馬占相思木屑與棉子殼不同配比組成的培養(yǎng)料進(jìn)行培養(yǎng)，其中馬占相思樹木屑與棉子殼配比(w/w)處理分別為：0∶93、15∶78、30∶63、45∶48、60∶33、75∶18、93∶0，各處理培養(yǎng)料均添加米糠5%、石膏1%、過磷酸鈣1%。

1.2.4 相思樹干葉片添加對出菇袋菌絲生長與產(chǎn)量的影響 在馬占相思樹木屑與棉子殼配比為45∶48的處理的培養(yǎng)料中，添加不同量的馬占相思干葉片進(jìn)行出菇菌絲培養(yǎng)，添加濃度分別為：0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0 g/kg。

1.3 培養(yǎng)基配制方法

母種培養(yǎng)配制：按配方稱取馬占相思干葉片粉碎物與馬鈴薯，加適量的水煮至沸騰，維持沸騰10 min后過濾，取濾液并加入其他成分，定容至所需體積，pH 6.5左右。培養(yǎng)基在高壓121 ℃下滅菌20 min，分裝培養(yǎng)皿，冷卻后接種培養(yǎng)。

原種與栽培種配制：按配方稱取各種配料拌勻，加水至培養(yǎng)料含水量60%～65%，然后裝入500 mL菌種瓶,在高壓121 ℃下滅菌1.5 h,冷卻至室溫后接種培養(yǎng)。

出菇袋配制：按配方稱取各種配料拌勻，加水至培養(yǎng)料含水量60%～65%，然后裝入22 cm×45 cm規(guī)格菌袋,經(jīng)高壓121 ℃滅菌3 h,冷卻至室溫，接種培養(yǎng)。

菌絲培養(yǎng)溫度均為24～28 ℃，黑暗環(huán)境。

出芝管理：當(dāng)年3月將長滿菌絲的除去塑料袋后埋入抑郁度大于70%的林地,菌塊表面覆蓋厚度2～3 cm的土層,自然生長至采收。當(dāng)年7月與10月共采收2批。

菌種恢復(fù)生長所需時間指菌種接種至培養(yǎng)基上至開始聽吃料所需時間；母種菌絲生長速度于接種后第5天測定；原種及栽培種菌絲生長速度于接種后第10天測定；出菇袋菌絲生長速度于接種后第14天測定。

菌絲生長狀況：“+”—菌絲生長一般；“++”—菌絲生長較健壯；“+++”菌絲生長健壯；幼菇出形成時間：指菌袋覆土至幼菇出土所用時間。

生物轉(zhuǎn)化率=2次采收的子實體鮮重(g)/培養(yǎng)料干重(g)

2 結(jié)果與分析

2.1 馬占相思干葉片對母種菌絲生長的影響

將母種接入含不同量馬占相思干葉片的培養(yǎng)基中，1～3 d后可觀察到接種塊表面出現(xiàn)白色的菌絲，5 d左右各處理菌絲均在新的培養(yǎng)基上開始生長，至接種后7～10 d菌絲陸續(xù)長滿培養(yǎng)基表面。不同處理接種塊恢復(fù)生長所需時間與菌絲在培養(yǎng)基上的生長速度有較明顯的不同，結(jié)果見表1。

從表1可看出，添加一定量的馬占相思干葉片有助于接種塊恢復(fù)生長，并可提高菌絲生長速度。干葉片添加量100、150 g/L的處理的菌種接于培養(yǎng)基后，接種塊恢復(fù)生長所需時間分別為1.9、2.0 d，明顯低于對照和其他處理，其菌絲生長速度分別為79.0 mm/d和85.0 mm/d，明顯高于對照及其他處理。

綜上所述，母種PDA基本培養(yǎng)中添加馬占相思干葉片的量以100～150 g/L為宜，在該濃度范圍內(nèi)，干葉片的加入能提高菌絲生長速度，縮短接種塊恢復(fù)生長時間，同時效果好于PDA加富培養(yǎng)基(CK2)。

表1 菌絲在添加不同濃度馬占相思樹干葉片提取物的母種培養(yǎng)基上生長比較

注：每個處理18個平板，3次重復(fù)，表中數(shù)據(jù)為各處理平均值。數(shù)據(jù)后大、小寫字母分別表示在1%、5%水平上的差異顯著性。下同。

2.2 馬占相思干葉片加入量對原種、栽培種菌絲生長的影響

母種接種塊接入添加不同含量馬占相思干葉片的原種、栽培種培養(yǎng)基上一定時間后，觀察到接種塊表面出現(xiàn)白色的菌絲并開始在新培養(yǎng)基上生長。至接種后25～35 d菌絲陸續(xù)長滿培養(yǎng)瓶。不同處理接種菌塊恢復(fù)生長所需時間及菌絲生長速度有較明顯的不同，結(jié)果見表2、表3。

從表2可看出，添加一定量的馬占相思干葉片對原種培養(yǎng)基上菌絲生長有明顯促進(jìn)作用。添加干葉片量為150、200、250 g/kg的3個處理，母種接種塊在新培養(yǎng)基上恢復(fù)生長時間分別為5.2、5.0、4.8 d,較對照與其他處理明顯縮短，且菌絲粗壯,菌絲生長速度分別達(dá)到67.0、69.0、65.0 mm/d,明顯高于對照與其他處理，同時菌瓶長滿所用時間比對照縮短5 d左右。

表2 添加不同含量馬占相思干葉片的原種培養(yǎng)基菌絲生長比較

注：每處理30瓶，3次重復(fù)。

原種接入栽培種時，馬占相思干葉片的添加對菌絲生長同樣有較明顯促進(jìn)。從表3可知，添加干葉片的200、250 g/kg的2個處理，接種塊恢復(fù)生長時間分別為4.0、4.2 d，較對照縮短約3.5 d,菌絲生長速度分別達(dá)到98.0、94.0 mm/d，明顯高于對照及其他處理，同時菌瓶長滿所用時間也比對照縮短6 d左右。

表3 添加不同含量馬占相思干葉片的栽培種培養(yǎng)基菌絲生長比較

注：每處理30瓶，3次重復(fù)。

綜上所述，原種與栽培種培養(yǎng)基中添加馬占相思干葉片的量分別為150～250、200～300 g/kg為宜，在該濃度范圍內(nèi)的加入能提高菌絲生長速度，縮短接種塊恢復(fù)生長時間及滿瓶所用時間。

2.3 馬占相思木屑、干葉片添加對出菇袋菌絲生長與產(chǎn)量的影響

出菇袋培養(yǎng)料中添加不同含量的馬占相思樹木屑與干葉片對菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率有一定的影響，結(jié)果見表4、表5。

從表4可以看出,馬占相思木屑與棉籽殼配比為45∶48、60∶33、75∶18的3個處理菌絲長滿菌袋所需時間分別為50.4、52.3、53.1 d，較對照及其他處理有所縮短，三者之間無明顯差異，但75∶18的配比菌絲生長較弱。長滿菌絲的菌袋埋入土后發(fā)現(xiàn)，馬占相思木屑與棉籽殼配比為45∶48、60∶33處理幼菇出土?xí)r間分別為24.2、25.5 d，早于對照及其他處理；二次采收生物轉(zhuǎn)化率分別為65.8%、59.3%，顯著高于對照及其他處理

從表5可看出：在相思樹木屑與棉子殼配比為45∶48的基礎(chǔ)上，添加一定濃度的相思樹干葉片對菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率有一定的提升作用。干葉片添加量為150、200 g/kg的處理，菌絲生長健壯，菌絲長滿菌袋時間縮短為43.2、45.3 d，幼菇形成時間縮短到19.1、18.4 d，生物轉(zhuǎn)化率有所提高，分別達(dá)到73.5%、69.6%。

3 小結(jié)與討論

目前已有一些采用固氮樹種的段木、木屑、樹皮、葉片栽培食用菌的報道[10-11]。馬占相思作為一種用途廣泛的短周期速生樹種，在華南地區(qū)廣泛栽培。據(jù)報道，馬占相思砍伐加工時產(chǎn)生的干葉片與木屑營養(yǎng)成分含量較高，其葉片中粗蛋白含量達(dá)17%左右[12-13]。因此，馬占相思葉片作為良好的天然有機(jī)氮源，它的加入對菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率的提高將會有一定的促進(jìn)作用。本試驗中。紫芝母種、原種、栽培種培養(yǎng)基中加入一定量的馬占相思干葉片后，不僅菌絲生長速度加快，而且菌絲粗壯，菌種在新培養(yǎng)基上恢復(fù)生長時間也得以縮短。馬占相思樹葉片在母種、原種、栽培種中的加入量分別以100～150 g/L、150～250 g/kg、200～300 g/kg為宜。

表4 相思樹木屑與棉子殼不同配比對出菇袋菌絲生長與產(chǎn)量的影響比較

注：每處理50個菌袋，3次重復(fù)。

表5 相思樹干葉片與木屑結(jié)合對出菇袋菌絲生長與產(chǎn)量的影響比較

注：每處理50個菌袋，3次重復(fù)。

馬占相思木屑與棉籽殼的合理配比上添加一定量干葉片對紫芝出菇袋生長與產(chǎn)量提高具有一定的促進(jìn)作用。碳源是食用菌重要的營養(yǎng)元素，食用菌所需的碳源主要有：木質(zhì)素、纖維素、半纖維素等。由于紫芝是木腐真菌，它降解粗纖維的能力較強(qiáng)，馬占相思木屑中豐富的粗纖維及木質(zhì)素[14]，加上其含氮量高于較高，因此適于紫芝生長。在本試驗中，相思樹木屑與棉籽殼的最適配比為45∶48(w/w)，同時在此基礎(chǔ)上添加相思干葉片200～250 g/kg，可以使生物轉(zhuǎn)化率達(dá)到69%～73%。

目前包括靈芝在內(nèi)的許多食用菌種植都采用段木栽培，這與國家的森林保護(hù)與可持續(xù)發(fā)展形成矛盾。相思樹是一類人工種植的短周期速生林木，通過有效地利用相思樹砍伐、加工中產(chǎn)生的木屑及葉片進(jìn)行紫芝種植，對于林業(yè)側(cè)供給改革及林菌可持續(xù)循環(huán)產(chǎn)業(yè)形成發(fā)展具有重要意義。

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