王艷麗，許惠芳，郭瑜，王曉聞

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西太谷030801）

酸漿 [Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast）Makino）]為一種茄科酸漿屬，野生性強(qiáng)且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較豐富的水果蔬菜[1]。其中含有豐富的生物活性成分，有研究證明酸漿具有降血糖[2]、降血脂[3]、抗氧化[4]、抗癌[5]、抗炎[6]、抑菌[7]等生物活性，具有藥食兩用的價(jià)值。

酚類(lèi)物質(zhì)是植物的主要次生代謝產(chǎn)物之一，已被研究證實(shí)多酚類(lèi)化合物具有抗氧化、抗腫瘤[8]、抗炎[9]、抗病毒、抗血栓形成和抗動(dòng)脈硬化[10]等重要作用。

目前對(duì)酸漿的研究主要集中在苦素類(lèi)[11]、多糖類(lèi)[12-13]、皂苷類(lèi)[6-7]、黃酮類(lèi)[1]、生物堿類(lèi)[14]等生物活性的分析。從現(xiàn)已發(fā)表的文章資料來(lái)看，國(guó)內(nèi)外對(duì)酸漿果實(shí)中酚類(lèi)化合物的研究較少，以及其在體外的抗氧化活性和酶抑制活性尚未見(jiàn)報(bào)道。

因此本實(shí)驗(yàn)以乙醇為溶劑提取酸漿果實(shí)多酚，針對(duì)酸漿果實(shí)多酚的性質(zhì)特點(diǎn)選擇合適的大孔樹(shù)脂進(jìn)行初步純化，來(lái)探討酸漿果實(shí)多酚在體外的抗氧化活性以及對(duì)酶活性的抑制作用，為進(jìn)一步研究酸漿果實(shí)多酚在體內(nèi)對(duì)糖、脂代謝的影響提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

酸漿：原料采自山西省大同市陽(yáng)高縣。

樹(shù)脂：ADS-17、AB-8、D101、NKA、NKA-9、NKAII、HP-20、XAD-16和HPD-826均購(gòu)自滄州寶恩吸附材料科技有限公司，各樹(shù)脂的物理特性見(jiàn)表1。

表1 9種大孔吸附樹(shù)脂的物理特性Table 1 Physical characteristics of nine macroporous resins

1.1.2 試劑

Folin-Ciocalteu、沒(méi)食子酸（索萊寶試劑有限公司）、DPPH、Trolox、2，4，6-三吡啶基三嗪（2，4，6-Tris（2-pyridyl）-s-triazine，TPTZ）、Tris-HCI緩沖液、二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）、4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（4-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside，PNPG）、4-硝基苯基棕櫚酸酯（4-Nitrophenyl palmitate，PNPP）、胰脂肪酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶均購(gòu)自sigma公司。

1.1.3 儀器

JYZ-D51榨汁機(jī)：九陽(yáng)股份有限公司；ST3100 pH計(jì)：奧豪斯儀器有限公司；ELx800酶標(biāo)儀：美國(guó)寶特BIo-TeK公司；UV-1200紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海美譜達(dá)儀器有限公司；LD5-10低速離心機(jī)：北京雷勃爾離心機(jī)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的制備

將酸漿果實(shí)洗凈，去梗，用榨汁機(jī)破碎，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期的研究，按照一定條件對(duì)酸漿果實(shí)多酚進(jìn)行提取。

1.2.2 總多酚含量的測(cè)定

采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定[15]。得到吸光度值Y與沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度X（μg/mL）之間的回歸方程為：Y=0.045 8X＋0.012 1；R2=0.992 9。

1.2.3 大孔樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的初步純化

參考王若蘭[16]、馮進(jìn)[17]和甘芝霖等[18]的方法。

1.2.3.1 大孔吸附樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的靜態(tài)吸附、解析實(shí)驗(yàn)

稱(chēng)取已處理好的各樹(shù)脂2.0 g于三角瓶中，加入30 mL一定濃度的酸漿果實(shí)多酚提取液，于恒溫振蕩器中（室溫，180 r/min）靜態(tài)吸附24 h，每間隔一定時(shí)間檢測(cè)上清液多酚含量，由公式（1）、（2）計(jì)算吸附量和吸附率。將靜態(tài)吸附24 h后的各樹(shù)脂進(jìn)行過(guò)濾，用一定量的蒸餾水清洗樹(shù)脂，再過(guò)濾，將其轉(zhuǎn)入三角瓶中，加入40 mL 70%的乙醇溶液，于恒溫振蕩器中（室溫，180 r/min）靜態(tài)解析24 h，每間隔一定時(shí)間檢測(cè)上清液多酚含量，由公式（3）計(jì)算解析率。

式中：Q1為吸附量，mg/g；Q2為吸附率，%；P 為解析率，%；C0為吸附前酸漿果實(shí)多酚起始質(zhì)量濃度，mg/mL；Cr為平衡質(zhì)量濃度，mg/mL；V1為吸附溶液體積，mL；m為樹(shù)脂質(zhì)量，g；C為解析后溶液中總酸漿果實(shí)多酚質(zhì)量濃度，mg/mL；V2為解析液體積，mL。

酸漿果實(shí)多酚提取液濃度對(duì)吸附率的影響：選用處理好的理想型樹(shù)脂對(duì)不同濃度的樣液于恒溫振蕩器中（室溫，180 r/min）靜態(tài)吸附，24 h后檢測(cè)上清液多酚含量，由公式（2）計(jì)算吸附率。

酸漿果實(shí)多酚提取液pH值對(duì)吸附率的影響：選用處理好的理想型樹(shù)脂對(duì)不同pH值的樣液于恒溫振蕩器中（室溫，180 r/min）靜態(tài)吸附，24 h后檢測(cè)上清液多酚含量，由公式（2）計(jì)算吸附率 。

不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)解析率的影響：將靜態(tài)吸附24 h后的樹(shù)脂進(jìn)行過(guò)濾，用一定量的蒸餾水清洗樹(shù)脂至無(wú)提取液殘留，將其轉(zhuǎn)入三角瓶中，加入70%乙醇溶液40 mL，置于恒溫振蕩器中（室溫，180 r/min）靜態(tài)解析，24 h后檢測(cè)上清液多酚含量，由公式（3）計(jì)算解析率。

1.2.3.2 大孔吸附樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的動(dòng)態(tài)吸附、解析實(shí)驗(yàn)

將用預(yù)處理好的理想型大孔樹(shù)脂濕法裝柱，用去離子水平衡2 h，將適當(dāng)濃度的酸漿果實(shí)多酚提取物用不同的流速上柱，每10 mL收集一管，檢測(cè)每管流出液的多酚濃度，當(dāng)流出液的吸光值達(dá)到上樣液吸光值的1/10時(shí)，吸附達(dá)到飽和，停止上樣，用2 BV去離子水洗去雜質(zhì)，再用80%的乙醇溶液以一定流速洗脫，以每10 mL收集一管，檢測(cè)每管流出液的多酚濃度。

1.2.4 酸漿果實(shí)多酚的抗氧化活性測(cè)定

1.2.4.1 酸漿果實(shí)多酚對(duì)DPPH·清除能力的測(cè)定

參考張瑞妮等[19]的方法稍作改進(jìn)。各組溶液反應(yīng)如下：

實(shí)驗(yàn)組：40 μL 不同濃度的樣品液+160 μL 0.1 mmol/L DPPH 工作液（A1）；空白組：40 μL 80%甲醇溶液+160 μL 0.1 mmol/L DPPH 工作液（A0）；對(duì)照組：40 μL 不同濃度的樣品液+160 μL 80%甲醇溶液（A2）。

將以上3組溶液使用96孔板置于暗處反應(yīng)30 min，于517 nm下測(cè)其吸光值，根據(jù)公式（4）計(jì)算出各待測(cè)樣品的清除率：

1.2.4.2 酸漿果實(shí)多酚對(duì)·OH基清除能力的測(cè)定

參考邢佳等[20]的方法稍作改進(jìn)。各組溶液反應(yīng)如下：

實(shí)驗(yàn)組：50 μL不同濃度的樣品液+50 μL 6 mmol/L FeSO4溶液+50 μL 6 mmol/L H2O2溶液+50 μL 6 mmol/L水楊酸溶液（A1）；空白組：50 μL 6 mmol/L FeSO4溶液+50 μL 6 mmol/L H2O2溶液+50 μL 6 mmol/L 水楊酸溶液+50 μL 80%甲醇溶液（A0）；對(duì)照組：50 μL 不同濃度的樣品液+50 μL 6 mmol/L FeSO4溶液+50 μL 6 mmol/L水楊酸溶液+50 μL 80%甲醇溶液（A2）。

將以上3組溶液置于96孔板中，37℃水浴加熱30 min，于510 nm下測(cè)其吸光值，根據(jù)公式（5）計(jì)算出各待測(cè)樣品的清除率：

1.2.4.3 酸漿果實(shí)多酚對(duì)Fe2+還原能力的測(cè)定

參考王畢妮等[21]的方法稍作修改。

溶液配制：FRAP試劑為0.3 mol/L醋酸緩沖溶液（pH=3.6）∶10mol/LTPTZ（溶于 40mmol/L 鹽酸）∶20mmol/L三氯化鐵=10∶1∶1（體積比），現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)樣配制：用80%甲醇將1mmol/LTrolox標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋?zhuān)瑵舛葹?0.025、0.100、0.150、0.200、0.500、1 mmol/L，得到以吸光值與Trolox質(zhì)量濃度之間的回歸方程為：Y=0.000 6X-0.012 3；R2=0.996 4。

實(shí)驗(yàn)組：50 μL 不同濃度的樣品液+245 μLFRAP工作液。

對(duì)照組：50 μL不同濃度的各樣品液+245 μL80%甲醇溶液。

將以上兩組溶液置于96孔板中，37℃反應(yīng)10min，于593 nm下測(cè)其吸光值。樣品對(duì)Fe2+還原能力以達(dá)到同樣吸光度所需的Trolox的量表示。

1.2.5 酸漿果實(shí)多酚的酶抑制活性測(cè)定

1.2.5.1 酸漿果實(shí)多酚對(duì)胰脂肪酶活性抑制率的測(cè)定

參考張麗娜[22]和Paulina Worsztynowicz等[23]的方法稍作改進(jìn)。各組溶液反應(yīng)如下：

實(shí)驗(yàn)組：100μL不同濃度的樣品液+50μL1.2mg/mL PPL+50 μL PNPP（A1）；空白組：50 μL 1.2 mg/mL PPL+50 μL PNPP+100 μL 50 mmol/L 緩沖液（A0）；對(duì)照組：100μL不同濃度的樣品液+50μLPNPP+50μL50mmol/L緩沖液（A2）。

將溶液置于96孔板中，混勻后37℃反應(yīng)5 min，于405 nm處測(cè)定其吸光值。根據(jù)公式（6）計(jì)算出各待測(cè)樣品的抑制率：

1.2.5.2 酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-淀粉酶活性抑制率的測(cè)定

參考袁娟等[24]的方法稍作改進(jìn)。各組溶液反應(yīng)如下：

實(shí)驗(yàn)組：50 μL 不同濃度的樣品液+25 μL 5 mg/mL α-淀粉酶溶液+50 μL 1% 底物+100 μLDNS 溶液（A1）。

空白組：25 μL 5 mg/mL α-淀粉酶溶液+50 μL 1%底物+100 μLDNS 溶液+50 μL 0.02 mol/L 緩沖液（A0）。

對(duì)照組：50 μL不同濃度的各樣品液+50 μL1%底物+100 μLDNS 溶液+50 μL 0.02 mol/L 緩沖液（A2）。

將不同濃度的各樣品液與α-淀粉酶溶液置于96孔板中，混勻后37℃反應(yīng)20 min，隨后加入淀粉溶液，37℃再反應(yīng)8 min，最后將DNS溶液加入其中，且立即沸水浴5 min以終止反應(yīng)試驗(yàn)。于540 nm處測(cè)定其吸光值。根據(jù)公式（7）計(jì)算出各待測(cè)樣品的抑制率：

1.2.5.3 酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制率的測(cè)定

參考李波等[25]的方法稍作改進(jìn)。各組溶液反應(yīng)如下：

實(shí)驗(yàn)組：30μL不同濃度的樣品液+50μL0.1mg/mL α-葡萄糖苷酶溶液+50 μL 3 mmol/L PNPG 溶液+100 μL 0.1 mol/L Na2CO3溶液（A1）；空白組：30 μL 0.1 mol/L 緩沖液+50 μL 0.1 mg/mL α-葡萄糖苷酶溶液+50 μL 3 mmol/L PNPG 溶液+100 μL 0.1 mol/L Na2CO3溶液（A0）；對(duì)照組：30 μL 不同濃度的樣品液+50 μL 0.1 mol/L緩沖液+50 μL 3 mmol/L PNPG 溶液+100 μL 0.1 mol/L Na2CO3溶液（A2）。

將以上3組溶液的前3種試劑置于96孔板中，37℃水浴加熱10 min，最后加入Na2CO3溶液，于540 nm下測(cè)其吸光值，根據(jù)公式（8）計(jì)算出各待測(cè)樣品的抑制率：

2 結(jié)果與討論

2.1 大孔樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的初步純化

2.1.1 不同大孔樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的靜態(tài)吸附、解析性能

9種大孔樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的靜態(tài)吸附、解析結(jié)果見(jiàn)表2、圖1。

表2 9種大孔樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的靜態(tài)吸附與解析結(jié)果Table 2 Results of static adsorption and desorption rates of nine macroporous resins on Physalis fruit polyphenols

圖1 各樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的靜態(tài)吸附曲線(xiàn)Fig.1 Static adsorptive dynamics curves of different types of resins on Physalis fruit polyphenols

從表2可以看出，不同型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的吸附和解析效果不同。9種樹(shù)脂中NKA-9、HPD-826、NKA、AB-8 和 HP-20 的吸附量較大，吸附量可達(dá)0.130 0 mg/mL以上，D101樹(shù)脂和XAD-16樹(shù)脂的吸附量次之，ADS-17樹(shù)脂和NKA-II樹(shù)脂的吸附量最??；吸附率最高的是HP-20樹(shù)脂，AB-8樹(shù)脂次之，二者都達(dá)到了75%以上，但是AB-8樹(shù)脂的解析率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于HP-20樹(shù)脂。

從圖1的靜態(tài)吸附曲線(xiàn)中可以看出，9種樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的吸附呈先快速上升后平穩(wěn)型，隨著時(shí)間的增加各樹(shù)脂的吸附速率降低，各樹(shù)脂漸漸達(dá)到飽和。

綜上考慮，AB-8樹(shù)脂的吸附量、吸附率和解析率都較高，所以選用AB-8樹(shù)脂作為純化酸漿果實(shí)多酚的最優(yōu)樹(shù)脂。

2.1.1.1 酸漿果實(shí)多酚提取液濃度、pH值對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附率的影響

AB-8樹(shù)脂對(duì)不同濃度、pH值酸漿果實(shí)多酚提取液的吸附性能結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3。

圖2 酸漿果實(shí)多酚濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附率的影響Fig.2 Effects of Physalis fruit polyphenols concentration on adsorption capacity of AB-8 resin

圖3 樣品液pH值對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附率的影響Fig.3 Effects of pH value on adsorption capacity of AB-8 resin

從圖2可以看出，隨著樣品液質(zhì)量濃度的增大，AB-8樹(shù)脂對(duì)樣品液的吸附率呈先上升后下降趨勢(shì)，當(dāng)樣品液的濃度為0.3 mg/mL時(shí)，AB-8樹(shù)脂的吸附率達(dá)到最大，吸附飽和，而樣品液濃度在0.3 mg/mL～0.4 mg/mL范圍時(shí)，AB-8樹(shù)脂的吸附率逐漸下降，因?yàn)殡S著樣品液質(zhì)量濃度的增大，樣品液中雜質(zhì)的量也增加，使得樹(shù)脂與樣品液中多酚物質(zhì)的有效接觸面積下降，因此，選用樣品液質(zhì)量濃度在0.3 mg/mL左右時(shí)較為適合。

AB-8樹(shù)脂對(duì)相同濃度不同pH值的樣品液進(jìn)行吸附，從圖3中看出，不同樣品液pH值對(duì)AB-8樹(shù)脂的吸附率不同。當(dāng)樣品液的pH值為4時(shí)，AB-8樹(shù)脂的吸附率達(dá)到最大，而pH值為3和7時(shí)，AB-8樹(shù)脂的吸附效果都較差。因此得出，酸漿果實(shí)多酚在中性和強(qiáng)酸性條件下不易被吸附，可能原因是在強(qiáng)酸和中性條件下酸漿果實(shí)多酚的性質(zhì)發(fā)生了改變，從而導(dǎo)致樣液的吸附率下降。經(jīng)試驗(yàn)測(cè)得，原樣品液的pH值約為4.7，所以在進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選用樣品原液本身的pH值即可。

2.1.1.2 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)AB-8樹(shù)脂解吸率的影響

將濃度大約為0.3 mg/mL的樣品液加入AB-8樹(shù)脂中進(jìn)行吸附，待樹(shù)脂吸附飽和后，用適量的蒸餾水洗去未吸附的樣液和雜質(zhì)，抽濾后向吸附飽和的AB-8樹(shù)脂中加入相同體積不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液進(jìn)行解析，解析效果見(jiàn)圖4。

圖4 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)AB-8樹(shù)脂解析率的影響Fig.4 Influence of ethanol concentration on static desorption percentage of AB-8 resin

從圖4可以看出，不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)AB-8樹(shù)脂的解析率不同。乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%時(shí)，解析率最大，可達(dá)70%以上。乙醇體積分?jǐn)?shù)在60%～80%之間時(shí)，解析率的增幅較快，乙醇體積分?jǐn)?shù)在80%以上時(shí)，解析率逐漸減小?？赡苁撬釢{果實(shí)中的多酚有一小部分為水溶性物質(zhì)，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)過(guò)高時(shí)，水溶性的酸漿果實(shí)多酚較難溶出；乙醇體積分?jǐn)?shù)過(guò)低時(shí)，有機(jī)溶劑的含量較少，溶于有機(jī)溶劑中的酸漿果實(shí)多酚較難溶出，二者都會(huì)影響解析效果。所以選用80%乙醇作為最佳的解析溶劑。

2.1.2 AB-8樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚類(lèi)物質(zhì)的動(dòng)態(tài)吸附

2.1.2.1 動(dòng)態(tài)吸附性能曲線(xiàn)

以1mg/mL上樣速度為例，將濃度大約在0.3mg/mL的樣品液加入裝有AB-8樹(shù)脂的層析柱中，直到流出液的吸光值是原上樣液吸光值的1/10時(shí)，則停止上樣，檢測(cè)樹(shù)脂的動(dòng)態(tài)吸附性能，其結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 AB-8型樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的動(dòng)態(tài)吸附曲線(xiàn)Fig.5 Dynamic adsorption curve of AB-8 resin on Physalis fruit polyphenols

從圖5可以看出，隨著樣品液的不斷加入，流出液的酸漿果實(shí)多酚含量逐漸增大，動(dòng)態(tài)吸附曲線(xiàn)接近理想的S形，并且當(dāng)上樣體積達(dá)200 mL時(shí)，流出液的質(zhì)量濃度接近原上樣液的質(zhì)量濃度的1/10，此時(shí)AB-8樹(shù)脂已吸附飽和。

2.1.2.2 上柱流速對(duì)吸附效果的影響

將pH值約為4.7、濃度約為0.3 mg/mL的樣品液以上柱流速分別為1、2、3、4 mL/min通過(guò)AB-8層析柱，流出液每10 mL為單位收集一管，檢測(cè)上柱流速對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附酸漿果實(shí)多酚的影響，結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 上樣流速對(duì)動(dòng)態(tài)吸附的影響Fig.6 Effect of loading flow rate on dynamic adsorption

從圖6可以看出，上樣流速為1、2、3、4 mL/min時(shí)，隨著上樣量的增加，AB-8樹(shù)脂對(duì)其吸附的動(dòng)態(tài)效果呈平穩(wěn)增長(zhǎng)型，收集液體積分別在190、170、140 mL和130 mL左右時(shí)出現(xiàn)了泄漏點(diǎn)，出現(xiàn)泄漏點(diǎn)最晚的是1 mL/min的上樣流速，因?yàn)樯蠘恿魉佥^慢時(shí)，AB-8樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚的吸附時(shí)間較為充分，能夠發(fā)揮樹(shù)脂的最大吸附效果，所以選用流速為1 mL/min的上樣速度較為合適。

2.1.2.3 洗脫劑流速對(duì)洗脫效果的影響

以 80%的乙醇作為洗脫劑，選用 1、2、3、4 mL/min的洗脫速度分別對(duì)吸附飽和的AB-8樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，其洗脫效果見(jiàn)圖7。

圖7 洗脫劑流速對(duì)洗脫效果的影響Fig.7 Desorption curve of Physalis fruit polyphenols from AB-8

從圖7可以看出，洗脫速度為3mL/min和4mL/min時(shí)，峰形較寬，有明顯的拖尾現(xiàn)象，因?yàn)橄疵撍俣冗^(guò)快，洗脫性能不充分，會(huì)有拖尾現(xiàn)象；洗脫速度為1 mL/min和2 mL/min時(shí)，峰形集中，無(wú)拖尾現(xiàn)象，但是二者相比之下，洗脫速度為1 mL/min時(shí)，洗脫效果更好。因此，洗脫流速選擇1 mL/min較為合適。

2.2 酸漿果實(shí)多酚的抗氧化活性測(cè)定

2.2.1 酸漿果實(shí)多酚對(duì)DPPH·清除能力的測(cè)定

不同濃度酸漿果實(shí)多酚溶液及其對(duì)應(yīng)的DPPH·的清除率，結(jié)果見(jiàn)圖8。

圖8 酸漿果實(shí)多酚對(duì)DPPH自由基的清除作用Fig.8 Scavenging effects of Physalis fruit polyphenols on DPPH radical

從圖8可以看出，隨著酸漿果實(shí)多酚溶液濃度的增加，對(duì)DPPH自由基的清除能力也增強(qiáng)。當(dāng)酸漿果實(shí)多酚溶液濃度在 0.25 mg/mL～4 mg/mL范圍時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除能力呈上升趨勢(shì)，在4 mg/mL時(shí)，酸漿果實(shí)多酚對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到了60%以上；當(dāng)清除率達(dá)到50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的酸漿果實(shí)多酚濃度為2.262 mg/mL。表明酸漿果實(shí)多酚對(duì)DPPH自由基有一定的清除作用。

2.2.2 酸漿果實(shí)多酚對(duì)羥自由基清除能力的測(cè)定

不同濃度酸漿果實(shí)多酚溶液及其對(duì)應(yīng)的羥自由基清除率，結(jié)果見(jiàn)圖9。

圖9 酸漿果實(shí)多酚對(duì)羥自由基的清除作用Fig.9 Scavenging effects of Physalis fruit polyphenols on hydroxyl radical

從圖9可以看出，隨著酸漿果實(shí)多酚溶液濃度的增加，對(duì)羥自由基的清除能力也增加。當(dāng)酸漿果實(shí)多酚溶液濃度在0.25 mg/mL～2 mg/mL范圍時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除能力呈直線(xiàn)上升趨勢(shì)；在8 mg/mL時(shí)，酸漿果實(shí)多酚對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到了80%以上；當(dāng)清除率達(dá)到50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的酸漿果實(shí)多酚濃度為0.604 4 mg/mL。表明酸漿果實(shí)多酚對(duì)羥自由基有一定的清除作用。

2.2.3 酸漿果實(shí)多酚對(duì)Fe2+還原能力的測(cè)定

測(cè)定不同濃度的酸漿果實(shí)多酚溶液對(duì)Fe2+的還原能力，結(jié)果見(jiàn)圖10。

圖10 酸漿果實(shí)多酚對(duì)Fe2+的還原能力Fig.10 The reduction ability of Physalis fruit polyphenols on Fe2+

酸漿果實(shí)多酚的還原能力通過(guò)Trolox來(lái)表示。從圖10可以看出，酸漿果實(shí)多酚濃度與其還原亞鐵離子的能力呈良好的依賴(lài)關(guān)系。隨著酸漿果實(shí)多酚濃度的增加，還原能力也在不斷增強(qiáng)。在試驗(yàn)范圍內(nèi)，其還原力在最高濃度時(shí)相當(dāng)于Trolox的量為544.39 μmol/L。表明酸漿果實(shí)多酚有一定的還原能力。

2.3 酸漿果實(shí)多酚的酶抑制活性測(cè)定

2.3.1 酸漿果實(shí)多酚對(duì)胰脂肪酶活性抑制率的測(cè)定

不同濃度酸漿果實(shí)多酚溶液及其對(duì)應(yīng)的胰脂肪酶的抑制率，結(jié)果見(jiàn)圖11。

圖11 酸漿果實(shí)多酚對(duì)胰脂肪酶的抑制作用Fig.11 Inhibitory effect of Physalis fruit polyphenols on pancreatic lipase

在體內(nèi)脂肪水解過(guò)程中胰脂肪酶起到了關(guān)鍵作用，若抑制胰脂肪酶的活性，即可抑制機(jī)體對(duì)脂肪的水解和消化吸收，減少肥胖的發(fā)生[26]。從圖11可以看出，隨著酸漿果實(shí)多酚溶液濃度的增加，對(duì)胰脂肪酶的抑制作用也在增強(qiáng)。在試驗(yàn)范圍內(nèi)，對(duì)胰脂肪酶的抑制率在最大濃度時(shí)為90%，對(duì)胰脂肪酶的半數(shù)抑制濃度為0.826 2 mg/mL。表明酸漿果實(shí)多酚對(duì)胰脂肪酶有一定的抑制效果。

2.3.2 酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制率的測(cè)定

不同濃度酸漿果實(shí)多酚溶液及其對(duì)應(yīng)的α-葡萄糖苷酶的抑制率，結(jié)果見(jiàn)圖12。

圖12 酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用Fig.12 Inhibitory effect of Physalis fruit polyphenols on αglucosidase

α-葡萄糖苷酶是引起餐后血糖水平提高的關(guān)鍵酶，也是引起Ⅱ型糖尿病發(fā)生的關(guān)鍵酶[27]。從圖12可以看出，隨著酸漿果實(shí)多酚溶液濃度的成倍增加，對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用也在逐漸增強(qiáng)。在試驗(yàn)范圍內(nèi)，對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率在最大濃度時(shí)為80%，對(duì)α-葡萄糖苷酶的半數(shù)抑制濃度為1.011 mg/mL。表明酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-葡萄糖苷酶有一定的抑制效果。

2.3.3 酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-淀粉酶活性抑制率的測(cè)定

不同濃度酸漿果實(shí)多酚溶液及其對(duì)應(yīng)的α-淀粉酶的抑制率，結(jié)果見(jiàn)圖13。

圖13 酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-淀粉酶的抑制作用Fig.13 Inhibitory effect of Physalis fruit polyphenols on αamylase

α-淀粉酶也是引起餐后血糖水平提高的關(guān)鍵酶，同時(shí)也是引起Ⅱ型糖尿病發(fā)生的關(guān)鍵酶[26]。從圖13可以看出，隨著酸漿果實(shí)多酚溶液濃度的成倍增加，對(duì)α-淀粉酶的抑制作用也在逐漸增強(qiáng)。當(dāng)酸漿果實(shí)多酚溶液濃度在0.25 mg/mL～4 mg/mL范圍時(shí)，對(duì)α-淀粉酶的抑制作用呈直線(xiàn)上升趨勢(shì)，在4 mg/mL時(shí)，酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-淀粉酶的抑制作用達(dá)到了90%以上，其對(duì)α-淀粉酶抑制率達(dá)到一半時(shí)的濃度為0.817 8 mg/mL。表明酸漿果實(shí)多酚對(duì)α-淀粉酶有很好的抑制效果。

3 結(jié)論

通過(guò)靜態(tài)、動(dòng)態(tài)的吸附和解析試驗(yàn)，從9種大孔樹(shù)脂中篩選出的純化酸漿果實(shí)多酚的最適大孔吸附樹(shù)脂為AB-8樹(shù)脂，該樹(shù)脂對(duì)酸漿果實(shí)多酚有較好的吸附和解析性能，并且進(jìn)一步研究了AB-8樹(shù)脂吸附和解析酸漿果實(shí)多酚的最佳條件：以樣液濃度為0.3 mg/mL、pH為樣品本身的pH值、流速為1mL/min上樣200mL；用300 mL體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇，以1 mL/min的流速進(jìn)行洗脫。

在此條件下，研究酸漿果實(shí)多酚的抗氧化作用和酶活性抑制作用。得出酸漿果實(shí)多酚具有一定還原能力，對(duì)羥自由基和DPPH自由基有清除作用，其IC50值分別為0.604 4 mg/mL和2.262 mg/mL，并對(duì)胰脂肪酶、α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制作用，半抑制濃度（IC50）分別為0.826 2、0.8178 mg/mL 和 1.011 mg/mL。因此，酸漿果實(shí)多酚具有抗氧化作用，對(duì)胰脂肪酶、α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性有抑制作用，這為進(jìn)一步研究酸漿果實(shí)多酚在體內(nèi)對(duì)糖、脂代謝的影響提供了科學(xué)依據(jù)。

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