劉愛民 ，李偉玲 ，吳盤紅 ，趙巍 ，，李靜文 ，徐茗圓

（1.河南省中醫(yī)院，河南 鄭州450000；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450000）

銀屑病是臨床常見的以紅斑，鱗屑為主要表現(xiàn)的慢性復(fù)發(fā)性疾病，組織病理學(xué)上，角質(zhì)形成細胞過度增殖、炎癥細胞浸潤及新生血管生成為其3大主要的病理特征[1]。銀屑病罕見于任何非人類動物，且自然出現(xiàn)的比例極少見[2]，其發(fā)病機制復(fù)雜，易于反復(fù)而目前尚無確切的治愈方法，因此建立合適的動物模型顯得尤為重要。自20世紀(jì)90年代初以來，已經(jīng)開始使用銀屑病皮膚炎癥的小鼠模型，以闡明構(gòu)成人類疾病的機制[3]。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展以及銀屑病的研究的不斷深入，對動物模型的建構(gòu)有了更深一步的認(rèn)識。理想的銀屑病動物模型應(yīng)當(dāng)包括表皮的過度增生，T細胞的浸潤、改變的血管狀態(tài)和對目前的抗銀屑病療法的反應(yīng)性。眾多建模方式中，局部誘導(dǎo)運用廣泛，咪喹莫特為其中的代表藥物，本文就其運用現(xiàn)狀及優(yōu)勢和不足之處進行歸納。

1 咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠銀屑病模型的機制

咪喹莫特屬于Toll樣受體（TLR）7、8激動劑，TLR是參與非特異性免疫的一類重要蛋白質(zhì)分子，也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁，對獲得性免疫具有識別和調(diào)節(jié)作用。臨床用于局部治療由人乳頭狀瘤病毒、光化性角化病和淺表性基底細胞癌引發(fā)的皮損，同時也可誘發(fā)棘皮癥、角化不全和混合性炎性浸潤等樣皮膚炎癥[4]。在對其誘導(dǎo)機制的研究中[5-6]，認(rèn)為TLR是跨膜受體，其識別與病原體相關(guān)的分子模式并調(diào)節(jié)針對病原體的先天免疫防御，TLR7和9在漿細胞樣DC（pDC）和B細胞中表達，而TLR8在骨髓DCs上表達，與內(nèi)源性分子形成的免疫復(fù)合物和白細胞介素（IL）-37（一種在銀屑病病變中過表達的抗微生物肽）激活pDCs和骨髓DCs，免疫復(fù)合物和TLR之間的相互作用誘導(dǎo)Ⅰ型IFN-α的產(chǎn)生，支持自身反應(yīng)性T細胞活化，并在自身反饋環(huán)路中導(dǎo)致銀屑病樣皮膚損傷。Swindell等[7]認(rèn)為咪喹莫特在誘導(dǎo)銀屑病皮損途徑中側(cè)重于通過IL免疫介導(dǎo)IL-23/Th17軸細胞因子（例如IL-17A，IL-17F，IL-22 和 IL-23），IL-22 和腫瘤壞死因子（TNF）-α，類似于銀屑病發(fā)病機制中涉及細胞因子網(wǎng)絡(luò)相互作用。Uribe-Herranz等[8]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)感測TLR配體時，人角質(zhì)形成細胞產(chǎn)生嗜中性粒細胞趨化因子（CXCL）1，CXCL2 和 IL-8，而在一定范圍內(nèi)咪喹莫特以濃度依賴性方式誘導(dǎo)CXCL1，CXCL2和IL-8 mRNA的表達。局部運用于小鼠皮膚后，在表型上，產(chǎn)生紅斑、鱗屑；組織學(xué)上，導(dǎo)致角質(zhì)形成細胞過度增殖，新血管生成，免疫細胞浸潤，具有類似于人銀屑病的表型及病理特征。

2 咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠銀屑病模型的常用方法

咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠銀屑病模型被廣泛應(yīng)用于藥物的臨床前研究或研究細胞因子對銀屑病發(fā)病的影響等。該模型可迅速構(gòu)建銀屑病的急性炎癥反應(yīng)，通常于第2～3天即出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，第6～7天達到高峰，第8天炎癥開始減弱。操作時，采用經(jīng)麻醉的成年小鼠（通常是BALB/c或C57BL/6背景）分組后實驗組背部或耳部皮膚局部脫毛，然后每天將可商購的咪喹莫特（5%）軟膏62.5 mg局部施用于小鼠，對照小鼠局部施用對照載體霜（凡士林）[7]。Wang等[9]在期間按需求使用所要研究的藥物，進行藥效評價的研究?；虿捎没蚯贸∈骩10-12]用于研究某些因子對銀屑病發(fā)病的影響。為了評估皮損嚴(yán)重程度，采用改良的銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評分，包括紅斑，增厚和皮膚厚度，每個因素都以0～4分記錄，三者累積分?jǐn)?shù)范圍為0～12，并進行組織病理學(xué)等方面的檢測。

Wang等[13]將咪喹莫特局部應(yīng)用于K14-VEGF轉(zhuǎn)基因小鼠的皮膚，發(fā)現(xiàn)與咪喹莫特誘導(dǎo)的普通型小鼠模型相比，K14-VEGF小鼠分別在第8、10、13天皮膚炎癥依然保持較好的穩(wěn)定性，并且能夠在第14天仍具有比較嚴(yán)重的皮膚炎癥反應(yīng)，除了與銀屑病病變相似的表型外，組織學(xué)上顯示出真皮血管增生和角化異常，導(dǎo)致皮膚增厚和大量浸潤炎癥細胞等。Jin等[14]研究發(fā)現(xiàn)IL-10缺乏狀態(tài)增強了咪喹莫特誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，其在第15天皮損和組織學(xué)保持更嚴(yán)重和持續(xù)的銀屑病特征。研究者認(rèn)為這種改進的小鼠模型，能夠保持更加穩(wěn)定和持久的炎癥，可能成為更實用的模型，適用于長期研究。

Luo等[15]研究發(fā)現(xiàn)不同品牌的咪喹莫特乳膏誘導(dǎo)誘導(dǎo)小鼠模型時可能具有效果差異。結(jié)果還表明，與Likejie?相比，Adala?是一種更有效的誘導(dǎo)劑，Aldara?組具有較高的PASI評分，并且顯示更多的特征性病變和組織病理學(xué)特征。

3 優(yōu)勢與不足

咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型，相對轉(zhuǎn)基因小鼠模型以及異種移植實驗所需的技術(shù)專長以及大量材料和時間，其成本較低，相對簡單，并且像其他被推薦的銀屑病小鼠模型一樣，也具有在皮膚表型、病理特征和體外或單一培養(yǎng)模型中缺乏的組織間復(fù)雜的相互作用方面的顯著優(yōu)點，且操作所需時間短。另一個優(yōu)勢是其方便與新型的基因修飾小鼠品系組合以使炎癥維持到第15天或更長。這就相對改善了單用藥物造模形成炎癥維持時間太短以致于很多藥物干預(yù)實驗無法長期觀察的弊端，這對銀屑病發(fā)病機制的研究具有實際意義。總之，此模型的設(shè)置需要最少的實驗室專業(yè)知識和材料，且操作簡便易行，便于運用。

雖然目前已經(jīng)提出了許多銀屑病小鼠模型，從表型及病理特征方面模擬人類銀屑病，但仍沒有標(biāo)準(zhǔn)化模型能概括出人類銀屑病的所有特征[16]。在咪喹莫特小鼠模型被廣泛應(yīng)用的同時，仍有以下問題值得探究。①Hawkes等[17]認(rèn)為該模型中觀察到的全身炎癥例如脾腫大和淋巴結(jié)病的原因在很大程度上是未知的，因此，雖然咪喹莫特在皮膚中的促炎性質(zhì)在患者中得到了充分的證實，然而，其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答不僅僅限于皮膚；②其誘導(dǎo)機制尚未完全可知，且大多數(shù)實驗數(shù)據(jù)基于小鼠，從而限制了該信息在人體的普遍性；③由于其單獨運用產(chǎn)生的炎癥只能維持1周，而后即逐漸減輕，不能支持長期的研究，這與人類疾病的慢性病程不符合；④在這種小鼠模型中，未見類似于人銀屑病的并發(fā)癥狀，且不能長期維持慢性皮膚炎癥，這些阻礙了對銀屑病合并癥的研究。

筆者對人類銀屑病的了解仍存在較大的研究空白，盡管人類和小鼠的細胞功能和皮膚的免疫反應(yīng)存在根本差異，但建立銀屑病模型的益處是不可否認(rèn)的。臨床研究對能準(zhǔn)確概括這種慢性炎癥性皮膚病的復(fù)雜性的小鼠模型仍有極大的需求。咪喹莫特能否準(zhǔn)確地概括人銀屑病以及如何改善以使其適用于長期觀察仍待繼續(xù)探究。研究中應(yīng)注意適當(dāng)?shù)亟忉層墒筱y屑病模型產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)，并展現(xiàn)出其有臨床意義的發(fā)現(xiàn)將有助于推進銀屑病研究進展。