陳敏

摘 要：本文采用高效液相色譜，質(zhì)譜聯(lián)用技術法提取、凈化樣品，在采取0.1mol/L緩沖液以及乙腈混合溶液作為提取溶劑時，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類、磺胺類以及金剛烷胺等獸藥的回收效果均較好，回收率均能達到要求，解決了四環(huán)素類獸藥與喹諾酮類以及磺胺類獸藥難以在同時進行提取的問題。

關鍵詞：高效液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術 獸藥殘留量

中圖分類號：R917 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2017）11（a）-0088-02

隨著現(xiàn)代人們對于健康生活的重視，食品安全問題已經(jīng)得到更多人群的關注，這對于食品檢測工作機構來說，無疑是提出了更大的工作挑戰(zhàn)，其將會面臨著更大的檢測工作量。因此，如何建立一套快速的獸藥殘留藥物檢測方式顯得尤為重要。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

準備的儀器有超高效液相色譜儀、高速離心機、旋渦混合器、超純水儀以及旋轉蒸發(fā)儀，準備的試劑有29種獸藥，甲酸、乙腈為色譜純、水為超純水、吸附劑C18、NH2。

對于以上試劑分別取合適的量進行研究，對于四環(huán)素類的獸藥溶解以及定容時采用甲醇，對于磺胺類的獸藥溶解以及定容時采用乙腈，保存的條件在4℃以下。分別吸取以上的標準儲備液0.25mL于25mL容量瓶，用乙腈來進行稀釋并定容，配制成質(zhì)量濃度為1.0mg/L的混合標準工作液I；分別吸取四環(huán)素類獸藥標準儲備液各0.5mL，吸取金剛烷胺標準儲備液0.1mL，分別吸取喹諾酮類以及磺胺類獸藥標準儲備液各1mL于100mL容量瓶，同樣也是用乙腈來進行稀釋并定容，配制混合標準工作液II，其中四環(huán)素類獸藥質(zhì)量濃度為0.5mg/L，金剛烷胺質(zhì)量濃度為0.1mg/L，其他獸藥質(zhì)量濃度為1.0mg/L。

1.2 樣品前處理方法

在50mL離心管中加入2g的標準樣品，加入3mL乙腈、2mL 0.1mol/L緩沖溶液，并進行2min旋渦、5min離心，將上清液收集起來放入其他的離心管中。再加5mL乙腈在剩余溶液部分，重復上述動作進行旋渦、離心，將上清液收集放入上述離心管中。在收集的上清液當中放入乙酸200μL，氯化鈉1g，再一次進行1min旋渦、5min離心，將上層的2mL乙腈放在離心管中，加入100mg C18、100mgNH2，再進行1min旋渦、5min離心，吹干上清液當中的氮氣，在剩下的溶液當中加入甲醇1mL、甲酸水0.1%，進行定容，然后進行過濾。

1.3 色譜條件

色譜柱：AcquityTMBEHRP18柱；流動相：A相，甲酸甲醇0.1%；B相：甲酸水0.1%；進樣量：10μL；柱溫：30℃。

1.4 質(zhì)譜條件

電離模式：電噴霧正離子ESI（+）；毛細管電壓：3.0kV；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：380℃；脫溶劑氣流量：550L/h；錐孔反吹氣流量：50L/h；多反應監(jiān)測掃描模式。

2 結果與討論

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜條件

在處于電噴霧正離子這一模式當中時，掃描標準的溶液就可以將每種類型的獸藥所含離子獲取，將得到的離子進行掃描就可以獲取最佳的碰撞能量值。

2.1.2 梯度洗脫條件的優(yōu)化

本文的研究中所選取的流動相有兩種，第一種為甲醇-0.1%甲酸水，第二種為乙腈-0.1%甲酸水，將這兩者進行效果比較，研究顯示第一種選擇的分離效果要好于第二種。

梯度洗脫條件的優(yōu)化：在多次研究之后，最好的梯度洗脫條件得以確定，獲得了最好的藥物分離效果，其藥物總離子流色譜圖如圖1所示。

2.2 定容溶液的選擇

在本次研究中，分別對比5種類型的定溶液，通過對比的結果顯示，比例為10∶90時效果最好，比例為50∶50時效果最差。通過試驗后選擇0.1%甲醇-甲酸水為定容溶液。

2.3 樣品前處理條件的優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇

對于本次研究來說，選擇提取的溶劑是一大難點，對于四環(huán)素類獸藥與喹諾酮類以及磺胺類獸藥來說，難以在同時進行提取工作，依據(jù)前人研究的基礎之上，采取乙腈作為提取溶劑時，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類以及金剛烷胺等獸藥的回收率不高；采取5%醋酸乙腈作為提取溶劑時，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類獸藥的回收率也只在20%～30%；采取0.1mol/L緩沖液作為提取溶劑時，喹諾酮類以及四環(huán)素類獸藥的回收效果較好，相對磺胺類獸藥的回收率較低，為50%左右。本文最終選擇0.1mol/L緩沖液-乙腈作為提取液。

2.3.2 凈化方法的確定

本研究采用0.1mol/L緩沖溶液-乙腈進行提取，取2mL乙腈相，C18、NH2分散雜質(zhì)，吹干上清液中的氮氣，選取1mL甲醇-0.1%甲酸進行定容。

結果表明：凈化效果好，吸附劑的用量在50mg時，凈化效果較差，用量在100mg時，幾乎沒有獸藥吸附，當用量在150mg時，有少量獸藥被吸附，以上數(shù)據(jù)表明用量在100mg，所達到的效果最好。因此，本文選取用量為100mg 的C18、100mg的NH2。

2.4 效果檢測

通過試驗表明，29種獸藥在合適的質(zhì)量濃度區(qū)間，有著較好的線性關系，在29種獸藥的LOQ水平、20μg/kg以及50μg/kg等3個水平做加標回收率試驗，每一水平做5個平行樣品。稱取兩樣品，加入合適溶液，進行1min渦旋，按照前文的方法來提取、凈化、測定。經(jīng)檢測29種獸藥在豬肉、雞肉、豬肝以及雞肝等當中的回收率平均達到了71.5%～93.2%，符合多殘留分析的要求。

3 結語

通過本文的研究，在采取0.1mol/L緩沖液以及乙腈混合溶液作為提取溶劑時，四環(huán)素獸藥、喹諾酮類、磺胺類以及金剛烷胺等獸藥的回收效果均較好，回收率均能達到要求，解決了四環(huán)素類獸藥與喹諾酮類以及磺胺類獸藥難以在同時進行提取的問題，建立了29種獸藥快速檢測的方法，經(jīng)檢測29種獸藥在豬肉、雞肉、豬肝以及雞肝等當中的回收率平均達到了71.5%～93.2%，符合多殘留分析的要求。并對提取方式、凈化方法等有了一個新的優(yōu)化處理，為食品檢測機構提供了更為便捷的檢測方式，利于對大量的動物樣品獸藥的殘留情況進行監(jiān)控。

參考文獻

[1] 譚陽陽，牛墨，田紅.QuEChERS——超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法在動物源食品中禁限用獸藥殘留檢測中的應用[J].食品安全導刊，2017（9）：112-113.

[2] 韓曄華，張艷芬，劉虎威.色譜質(zhì)譜技術在食品安全分析檢測中的應用[J].食品安全質(zhì)量檢測學報，2016，7（4）： 1578-1586.