杜光迅, 曲凌云, 2, 尚 琨, 3, 王 琛, 高 萍

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一株海洋細(xì)菌YCSC6的鑒定及其體外殺盾纖毛蟲(chóng)的能力

杜光迅1, 曲凌云1, 2, 尚 琨1, 3, 王 琛1, 高 萍1

(1. 國(guó)家海洋局 第一海洋研究所, 山東 青島 266061; 2. 海洋科學(xué)與技術(shù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室 海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過(guò)程功能實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266235; 3. 大連海洋大學(xué), 遼寧 大連116023)

為開(kāi)發(fā)安全、高效的防治大菱鲆()盾纖毛蟲(chóng)(scuticociliate)病新型藥物, 本研究從近海微生物菌種資源庫(kù)中篩選獲得了一株有殺盾纖毛蟲(chóng)效果的細(xì)菌, 利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定該菌為肋生鹽弧菌(), 通過(guò)共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行YCSC6殺滅大菱鲆病原性盾纖毛蟲(chóng)的藥效活性實(shí)驗(yàn), 同時(shí)利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察記錄YCSC6的殺蟲(chóng)特征。結(jié)果發(fā)現(xiàn)海洋細(xì)菌YCSC6發(fā)酵上清液可導(dǎo)致盾纖毛蟲(chóng)膜出現(xiàn)穿孔, 膜完整性喪失從而裂解, 在一定時(shí)間內(nèi), 發(fā)酵液發(fā)酵時(shí)間越長(zhǎng), 裂解能力越強(qiáng)。本研究從安全、高效的角度出發(fā), 篩得一株可裂解盾纖毛蟲(chóng)的海洋細(xì)菌YCSC6, 并初步探究了其殺蟲(chóng)特征及能力, 為養(yǎng)殖漁業(yè)微生物殺蟲(chóng)劑的開(kāi)發(fā)提供了安全有效的來(lái)源。

大菱鲆(); 盾纖毛蟲(chóng)(scuticociliate); YCSC6; 裂解; 微生物殺蟲(chóng)劑

大菱鲆()養(yǎng)殖是中國(guó)一項(xiàng)特色產(chǎn)業(yè), 然而病害的困擾使該產(chǎn)業(yè)每年都面臨巨大經(jīng)濟(jì)損失[1-4]。在各種養(yǎng)殖疾病中, 寄生蟲(chóng)疾病是一種常見(jiàn)病, 而其中危害最大的是盾纖毛蟲(chóng)(scuticociliate)病[5]。盾纖毛蟲(chóng)屬兼性寄生蟲(chóng), 寄生在魚(yú)類的組織中, 通過(guò)吞噬魚(yú)細(xì)胞及組織進(jìn)行生長(zhǎng)、繁殖[6]。感染初期, 魚(yú)體出現(xiàn)白斑且黏液增多, 隨后病灶處出現(xiàn)紅腫, 甚至潰爛出血。該病在育苗期、養(yǎng)成期均可發(fā)生, 且傳染快、發(fā)病率高, 往往引起養(yǎng)殖魚(yú)的大規(guī)模死亡, 造成無(wú)法挽回的損失[5-7]。近年來(lái), 在各種海水經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的養(yǎng)殖中(魚(yú)類、甲殼類和海參等), 由纖毛蟲(chóng)所導(dǎo)致的病害發(fā)生范圍及危害程度均呈遞增趨勢(shì)[8-10]。針對(duì)纖毛蟲(chóng)病危害的頻發(fā), 國(guó)內(nèi)主要采用甲醛、硫酸銅等來(lái)防治該病的發(fā)生[11]。但長(zhǎng)期使用農(nóng)藥及化學(xué)藥物, 會(huì)帶來(lái)環(huán)境污染、藥物殘留等問(wèn)題, 也成為當(dāng)前食品安全和水產(chǎn)品出口的綠色貿(mào)易壁壘問(wèn)題, 因此尋找新型的殺蟲(chóng)藥物成為當(dāng)務(wù)之急, 國(guó)內(nèi)許多研究組開(kāi)展了中草藥制劑的研制工作, 但鮮有通過(guò)微生物進(jìn)行生物防治盾纖毛蟲(chóng)的報(bào)道及研究[12-13]。

微生物殺蟲(chóng)劑是21世紀(jì)農(nóng)藥工業(yè)的新產(chǎn)業(yè), 指應(yīng)用微生物本身及其代謝產(chǎn)物防治害蟲(chóng)的一種制劑, 具有藥效穩(wěn)定、施用方便、環(huán)保等優(yōu)勢(shì)[14]。海洋微生物數(shù)量龐大且生境特殊, 其可產(chǎn)生不同于陸地來(lái)源的代謝產(chǎn)物, 這些代謝產(chǎn)物往往具有結(jié)構(gòu)新穎獨(dú)特、生物活性多樣顯著的特點(diǎn)[15], 研究者不斷獲得來(lái)自于海洋微生物的抗菌殺蟲(chóng)活性物質(zhì)。例如Marques等[16]研究的海洋細(xì)菌sp.胞外分泌物具有抗菌及清除DPPH自由基的能力; 譚洪升等[17]從兩株海洋放線菌(sp.)的次級(jí)代謝物中發(fā)現(xiàn)13種對(duì)HeLa細(xì)胞系有極強(qiáng)毒性的抗霉素類化合物; 李子等[18]研究的真菌H-21可產(chǎn)生一種fusarentin類殺蟲(chóng)藥物; 徐樹(shù)蘭[19]發(fā)現(xiàn)海洋真菌(代號(hào)為1893)發(fā)酵液的乙酸乙酯萃取物對(duì)白蚊伊蚊()和桃蚜()具有一定的毒殺作用; 吳珊等[20]發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌()UST050418-715的代謝產(chǎn)物中存有大量可防御硅藻附著海綿的二肽類化合物; 方衛(wèi)東等[21]發(fā)現(xiàn)蠟狀芽孢桿菌()K2-1發(fā)酵上清液對(duì)大菱鲆常見(jiàn)致病菌有較強(qiáng)拮抗作用。

本研究針對(duì)大菱鲆病原性盾纖毛蟲(chóng), 從近海微生物菌種資源庫(kù)中篩選獲得了一株有殺盾纖毛蟲(chóng)效果的細(xì)菌, 對(duì)該菌株開(kāi)展了細(xì)菌鑒定和殺蟲(chóng)機(jī)制的初步研究, 旨在為防治大菱鲆盾纖毛蟲(chóng)病開(kāi)發(fā)安全、高效的新型藥物。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株及盾纖毛蟲(chóng)

海洋菌株YCSC6來(lái)自黃海海域, 保藏于國(guó)家海洋局第一海洋研究所菌種庫(kù)(–80℃); 盾纖毛蟲(chóng)分離自大菱鲆病變腦組織, 并由中國(guó)海洋大學(xué)原生動(dòng)物學(xué)研究室鑒定(另文報(bào)道)。

1.1.2 纖毛蟲(chóng)培養(yǎng)液

20 mL海水高壓滅菌, 待冷卻至室溫加入10粒大米, 接種1 mL纖毛蟲(chóng)原液, 放置于17℃培養(yǎng)室培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌株形態(tài)特征觀察及生長(zhǎng)特性

平板法觀察YCSC6的菌落特征, 用透射電鏡來(lái)觀察細(xì)菌形態(tài)特征。生長(zhǎng)曲線的測(cè)定: 將YCSC6菌株按照1%()接種于2216E液體培養(yǎng)基中, 30℃、120 r/min振蕩培養(yǎng), 每隔1 h取樣1次, 測(cè)其OD600值。鹽度耐受實(shí)驗(yàn)中鹽度梯度為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30, 溫度耐受實(shí)驗(yàn)中溫度梯度為4、10、15、20、25、30、35、37、40、42、45、55及65℃, pH耐受實(shí)驗(yàn)中pH值梯度為4、5、6、7、8、9、10、11, 12 h后測(cè)定各菌液的OD600值。

1.2.2 細(xì)菌生理生化特性實(shí)驗(yàn)

采用API 20NE、API ZYM、API 50CH試紙條及 Biolog GN2微孔板對(duì)菌株的生理特性進(jìn)行測(cè)定。選用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行YCSC6抗生素藥敏試驗(yàn), 根據(jù)抑菌圈直徑的大小, 判定該菌株對(duì)抗生素的敏感性。

1.2.3 16S rRNA基因的擴(kuò)增與序列分析

采用水煮法獲得YCSC6基因組DNA作為模板, 以27F和1492R[22]為引物, 配制PCR反應(yīng)體系60 μL, 按PCR反應(yīng)條件擴(kuò)增16SrRNA基因。將PCR產(chǎn)物送至青島擎科生物醫(yī)藥科技有限公司測(cè)序。

1.2.4 系統(tǒng)發(fā)育分析

將所得的16S rRNA基因序列提交到NCBI, 同時(shí)將測(cè)定的16S rRNA序列在Ez-Taxon數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性比對(duì)[23], 選取與該菌株相似性最高的模式菌16S rRNA基因序列, 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.2.5 細(xì)菌發(fā)酵液的獲取及處理方法

按1%接種量接種細(xì)菌母液于20 mL滅菌液體培養(yǎng)基中, 并在30℃、120 r/min條件下振蕩培養(yǎng)24 h; 培養(yǎng)結(jié)束后, 將發(fā)酵液以5 000 r/min的速度離心20 min, 收集上清液于滅菌錐形瓶中以備后續(xù)試驗(yàn)使用。

1.2.6 盾纖毛蟲(chóng)的培養(yǎng)

將盾纖毛蟲(chóng)接入纖毛蟲(chóng)培養(yǎng)液中, 于17℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)。培養(yǎng)大約10 d后, 盾纖毛蟲(chóng)種群密度可達(dá)到8 000個(gè)/mL, 此時(shí)的密度適合后續(xù)試驗(yàn)的進(jìn)行。

1.2.7 細(xì)菌發(fā)酵液與盾纖毛蟲(chóng)的共培養(yǎng)

取10 mL雜質(zhì)少的盾纖毛蟲(chóng)培養(yǎng)液于滅菌錐形瓶中, 然后加入等量經(jīng)離心處理的細(xì)菌發(fā)酵液, 輕輕震蕩混勻, 于20℃培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)。

1.2.8 盾纖毛蟲(chóng)的顯微及掃描電鏡觀察

顯微觀察: (1)取剛剛混勻后的共培養(yǎng)液500 μL于浮游生物計(jì)數(shù)框中, 在顯微鏡下觀察并記錄盾纖毛蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)情況; (2)分別在0、3、6、9、12、24 h后, 取1 mL共培養(yǎng)液于1.5 mL Ep管中, 并立即加入100 μL 2%戊二醛進(jìn)行固定[12], 然后取200 μL液體于載玻片上, 在顯微鏡下觀察纖毛蟲(chóng)的裂解情況, 并拍照記錄。掃描電鏡觀察: 分別取適量纖毛蟲(chóng)原液及共培養(yǎng)6 h后的纖毛蟲(chóng)于胚胎皿中, 在解剖鏡下按照胡鏑[24]的方法進(jìn)行固定、清洗、脫水、置換, 采用真空冷凍干燥進(jìn)行最終干燥后, 使用掃描電鏡觀察拍照。

1.2.9 YCSC6發(fā)酵液裂解能力的初步測(cè)定

準(zhǔn)備12個(gè)相同規(guī)格的50 mL錐形瓶, 分別準(zhǔn)確量取20 mL液體培養(yǎng)基并高壓滅菌。其中11瓶按1%的接種量接種等量細(xì)菌母液, 剩余1瓶加等量無(wú)菌海水作為對(duì)照組。將接種后的錐形瓶于30℃搖床培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)12、18、24、30、36、42、48、54、60、66及72 h后, 按照1.2.5的方法收集發(fā)酵液。將發(fā)酵時(shí)間不同的發(fā)酵液與等體積纖毛蟲(chóng)共培養(yǎng), 培養(yǎng)時(shí)間分別為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11及12 h, 設(shè)置3組平行實(shí)驗(yàn), 然后各取1 mL共培養(yǎng)液, 經(jīng)戊二醛固定后用浮游生物計(jì)數(shù)框在顯微鏡下計(jì)數(shù)完整盾纖毛蟲(chóng)個(gè)體數(shù)量, 并記錄。

2 結(jié)果

2.1 菌株形態(tài)特征及生長(zhǎng)特性

YCSC6為革蘭氏陰性菌, 菌落表面較濕潤(rùn)、平滑, 邊緣平整, 正反面、中央與邊緣顏色一致, 均呈淡黃色、半透明, 菌落小而隆起, 致密。透射電鏡下觀察: 菌體彎曲成弧形尾部有一長(zhǎng)鞭毛、大小為(1.40~ 2.85)μm×(0.57~0.71)μm(長(zhǎng)×寬, 圖1)。

圖1 YCSC6的透射電鏡照片(標(biāo)尺為500 nm)

該菌株的生長(zhǎng)鹽度范圍為1%~15%, 最適生長(zhǎng)鹽度為3%; 生長(zhǎng)溫度范圍10~45 ℃, 最適生長(zhǎng)溫度為37℃, 生長(zhǎng)pH范圍6~9, 最適生長(zhǎng)pH為6~7。生長(zhǎng)曲線顯示YCSC6在液體培養(yǎng)11 ~12 h后達(dá)生長(zhǎng)穩(wěn)定期(圖2)。

2.2 YCSC6生理生化特性

采用API 20NE、API ZYM、API 50CH試紙條對(duì)菌株YCSC6的生理特性進(jìn)行測(cè)定, 結(jié)果如表1所示。

表1 細(xì)菌YCSC6的API測(cè)試結(jié)果

圖2 菌株YCSC6的生長(zhǎng)曲線

Biolog測(cè)試結(jié)果顯示下列物質(zhì)可以被YCSC6用作單一碳源: 糊精、吐溫-40、吐溫-80、N-乙酰基-D-半乳糖胺、N-乙酰基-D-葡萄糖胺、D-果糖、α-D葡萄糖、麥芽糖、D-阿洛酮糖、D-山梨醇、D-海藻糖、甲基丙酮酸、D-葡萄糖酸、D, L-乳酸、琥珀酸、肌苷、胸腺嘧啶核苷、丙三醇。主要碳源: 吐溫-40、N-乙酰基-D-半乳糖胺、α-D葡萄糖、D-海藻糖、甲基丙酮酸。

通過(guò)對(duì)YCSC6的17種常見(jiàn)抗生素藥物的藥敏測(cè)試, 發(fā)現(xiàn)該菌對(duì)慶大霉素、新霉素、青霉素(G)、林可霉素、萬(wàn)古霉素、頭孢氨芐、頭孢拉定、丁胺卡那有抗性, 能夠被硫酸粘菌素、多西環(huán)素多粘菌素B、恩諾沙星、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明、諾氟沙星、氯霉素抑制。

2.3 YCSC6的16S rRNA基因的同源性比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析

菌株YCSC6的16S rDNA的Genbank注冊(cè)號(hào)為KU984713.1, 序列長(zhǎng)度為1 409 bp。將該菌株的16S rDNA序列在Genbank中進(jìn)行同源性比較, 可知菌株YCSC6與死谷肋生鹽弧菌亞種(subsp)DSM8285T[25]親緣關(guān)系最近(圖3)。

圖3 依據(jù)16S rDNA基因序列構(gòu)建的菌株YCSC6與其他相關(guān)細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2.4 共培養(yǎng)下纖毛蟲(chóng)體的變化

將發(fā)酵液與等量纖毛蟲(chóng)混合后, 立即取0.5 mL于計(jì)數(shù)框中, 在顯微鏡下可逐漸觀察到纖毛蟲(chóng)運(yùn)動(dòng)明顯變緩慢, 且出現(xiàn)纖毛蟲(chóng)原地打轉(zhuǎn)的現(xiàn)象。當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間3、6、9、12、24 h后, 纖毛蟲(chóng)逐漸表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)停止、纖毛停止擺動(dòng)、裂解的現(xiàn)象。且共培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng), 纖毛蟲(chóng)裂解數(shù)量越多, 裂解程度越大, 直至最后蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)完全裂解, 胞質(zhì)流出。共培養(yǎng)過(guò)程中纖毛蟲(chóng)裂解如下圖(圖4)所示。

掃描電鏡下, 未經(jīng)共培養(yǎng)的完整蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)如圖5所示, 蟲(chóng)體表膜結(jié)構(gòu)完整, 表膜無(wú)裂解。經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)的纖毛蟲(chóng)結(jié)構(gòu)如圖6所示, 纖毛蟲(chóng)表膜開(kāi)始出現(xiàn)裂解現(xiàn)象, 在纖毛蟲(chóng)的尾端出現(xiàn)穿孔, 纖毛蟲(chóng)表膜完整性喪失。

圖4 盾纖毛蟲(chóng)裂解過(guò)程圖

2.5 共培養(yǎng)下盾纖毛蟲(chóng)裂解率

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示, 當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為12 h時(shí), 共培養(yǎng)12 h后, 完整蟲(chóng)體剩余量為40.4%; 隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng), 共培養(yǎng)12 h后, 完整蟲(chóng)體剩余量逐漸減少。最終當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為60 h時(shí), 共培養(yǎng)12 h后, 盾纖毛蟲(chóng)的剩余量為0; 而當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為66 h時(shí), 共培養(yǎng)10 h, 完整蟲(chóng)體的剩余量就降為0; 當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為72 h時(shí), 共培養(yǎng)9 h后, 完整蟲(chóng)體的剩余量就降為0 (圖7)。

圖5 完整盾纖毛蟲(chóng)掃描電鏡圖

圖6 裂解盾纖毛蟲(chóng)掃描電鏡圖(箭頭指示裂解處)

圖7 YCSC6的殺蟲(chóng)活性

上述統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明, 在一定時(shí)間范圍內(nèi), 隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng), 發(fā)酵液的裂解能力也隨之增強(qiáng), 且發(fā)酵66 h和72 h的發(fā)酵液, 其裂解活性相當(dāng)。由表2可見(jiàn): 發(fā)酵液的不同發(fā)酵時(shí)間與共培養(yǎng)液蟲(chóng)體剩余量呈負(fù)相關(guān), 且回歸方程相關(guān)系數(shù)的絕對(duì)值均大于0.8, 說(shuō)明共培養(yǎng)時(shí)間與完整盾纖毛蟲(chóng)剩余量之間密切相關(guān)。

3 討論

微生物代謝產(chǎn)物具有結(jié)構(gòu)新穎性和多樣性的特點(diǎn), 其在抗菌、殺蟲(chóng)、抗真菌等各領(lǐng)域得到廣泛的認(rèn)可并展現(xiàn)出巨大的潛力[26]。然而, 目前在水產(chǎn)動(dòng)物殺蟲(chóng)藥物研究開(kāi)發(fā)領(lǐng)域還極少, 本研究從近海微生物菌種資源庫(kù)中篩得一株有殺盾纖毛蟲(chóng)效果的細(xì)菌YCSC6, 對(duì)該菌株開(kāi)展了細(xì)菌鑒定和殺蟲(chóng)能力的初步研究, 旨在為防治大菱鲆盾纖毛蟲(chóng)病開(kāi)發(fā)安全、高效的新型藥物。

表2 YCSC6殺蟲(chóng)活性的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本實(shí)驗(yàn)自黃海分得一株對(duì)盾纖毛蟲(chóng)有明顯裂解作用的海洋細(xì)菌YCSC6, 該菌最適生長(zhǎng)條件是37℃, pH為6, 鹽度3%, 這與菌株DSM8285T的最適生長(zhǎng)條件相近; 該菌菌體彎曲成弧形, 尾部有一長(zhǎng)鞭毛, 這一特征與菌株DSM8285T相同。在碳源利用方面, 兩菌均主要利用α-D葡萄糖、D-海藻糖、丙酮酸, 且兩者16S rDNA序列相似度高達(dá)99.18%, 系統(tǒng)發(fā)育分析也顯示, 菌株YCSC6與肋生鹽弧菌也聚類到同一支上[25], 因而將菌株YCSC6鑒定為肋生鹽弧菌。

通過(guò)共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn), 在光學(xué)顯微鏡下發(fā)現(xiàn)盾纖毛蟲(chóng)的裂解過(guò)程為: 蟲(chóng)體運(yùn)動(dòng)變緩慢, 原地打轉(zhuǎn), 3 h后蟲(chóng)體顯微結(jié)構(gòu)變模糊, 開(kāi)始出現(xiàn)裂解現(xiàn)象, 隨著作用時(shí)間延長(zhǎng), 蟲(chóng)體表膜裂解程度越大, 胞質(zhì)流出, 直至最后蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)完全裂解。掃描電鏡可觀察到作用初期纖毛蟲(chóng)胞膜出現(xiàn)穿孔, 裂解作用開(kāi)始。姚嘉赟等[26]發(fā)現(xiàn)鏈霉菌-XY52代謝產(chǎn)物可導(dǎo)致小瓜蟲(chóng)胞膜及細(xì)胞核破裂; 胡金城[12]發(fā)現(xiàn)某些中草藥可完全被破壞纖毛蟲(chóng)結(jié)構(gòu), 使胞質(zhì)流出, 凝固; 田海軍[27]曾報(bào)道復(fù)方中草藥制劑可導(dǎo)致南美白對(duì)蝦()纖毛蟲(chóng)蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)完全被破壞, 胞質(zhì)流出, 凝固; 孫裔雷等[28]發(fā)現(xiàn)當(dāng)某些中草藥可損害小瓜蟲(chóng)()細(xì)胞膜完整性, 增加細(xì)胞膜通透性。本實(shí)驗(yàn)所研究YCSC6發(fā)酵液與上述所研究的中草藥及抗生素作用效果相似, 說(shuō)明YCSC6發(fā)酵液中可能含有某種或某幾種成分, 也具有裂解盾纖毛蟲(chóng)的作用; 樊海平等[29]發(fā)現(xiàn), 當(dāng)中草藥質(zhì)量濃度40 mg/ L以上時(shí), 作用10 min后刺激隱核蟲(chóng)()幼蟲(chóng)死亡率大于50%, 作用2 h死亡率為100%, 其中質(zhì)量濃度200 mg/ L作用1 h的死亡率達(dá)100%, 質(zhì)量濃度400和800 mg/L 2個(gè)處理作用10 min的死亡率達(dá)100%。本研究在對(duì)YCSC6的殺蟲(chóng)能力進(jìn)行初步測(cè)定后, 發(fā)現(xiàn)隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng), 發(fā)酵液的裂解活性增強(qiáng), 完全裂解蟲(chóng)體所需要的時(shí)間縮短, 但發(fā)酵66 h后, 其作用效果無(wú)明顯增強(qiáng)。表明隨著細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖, 其代謝產(chǎn)物中的殺蟲(chóng)成分不斷積累, 濃度增大, 殺蟲(chóng)效果增強(qiáng), 但積累到一定程度不再增加。

本研究初步探究了YCSC6的殺蟲(chóng)能力及殺蟲(chóng)機(jī)制, 但尚未對(duì)其有效成分進(jìn)行分離鑒定, 因此本研究下一步將重點(diǎn)從有效殺蟲(chóng)成分提取鑒定及基因組方向深入研究其殺蟲(chóng)機(jī)制, 為大菱鲆盾纖毛蟲(chóng)病的防治提供新材料。

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(本文編輯: 譚雪靜)

Identification of marine bacterium YCSC6 and its insecticidal ability against Scuticociliate

DU Guang-xun1, QU Ling-yun1, 2, SHANG Kun1, 3, WANG Chen1, GAO Ping1

(1. First Institute of Oceanography, SOA, Qingdao 266061, China; 2.Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266235, China; 3. Dalian Ocean University, Dalian 116023, China)

To develop a safe and effective new drug for the prevention and control of turbot scuticociliate disease, from the library of offshore marine microbial resources we screened out a marine bacterium that showed insecticidal activity against scuticociliate. We identified YCSC6 asusing morphological and molecular biological methods. We conducted co-culture pharmacodynamics experiments in which YCSC6 killed pathogenic scuticociliate. We characterized the insecticidal properties of YCSC6 by optical and scanning electron microscopy. The results show that the fermentation supernatant of YCSC6 can lead to membrane perforation inscuticociliate, after which the scuticociliate loses its membrane integrity and cracks. After a certain period of time, the cracking ability strengthens with time. In this research, we made preliminary explorations of the insecticidal characteristics and abilityof YCSC6 and found it to be a safe and effective source for the development of a microbe insecticide for aquaculture.

turbot; scuticociliatlda; YCSC6; lytic process; microbe insecticide

[National Key R & D Program of China, No. 2017YFC1404504; Independent Innovation and Achievement Transformation Project in ShandongProvince, No. 2014ZZCX06205; The Scientific and Technological Innovation Project Financially Supported by Qingdao National Laboratory for MarineScience and Technology, No. 2015ASKJ02-03]

Dec. 2, 2016

Q939.99

A

1000-3096(2017)08-0024-08

10.11759//hykx20161202001

2016-12-02;

2017-03-06

十三五海洋環(huán)境安全保障重點(diǎn)專項(xiàng)(2017YFC1404504); 山東省自主創(chuàng)新及成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(2014ZZCX06205); 青島海洋科學(xué)與技術(shù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室鰲山科技創(chuàng)新計(jì)劃(2015ASKJ02-03)

杜光迅(1991-), 男, 山東章丘人, 碩士研究生, 主要從事海洋微生物學(xué)研究, 電話: 18954296525, E-mail: 1193892753@qq.com; 曲凌云, 通信作者, 博士, 研究員, 電話: 13407609057, E-mail: qly@fio.org.cn