張彩蘭，楊艷梅

（定西市第二人民醫(yī)院，甘肅 定西 743000）

CD44、ALDH1在胃癌中的表達(dá)及與臨床特征的相關(guān)性分析

張彩蘭，楊艷梅

（定西市第二人民醫(yī)院，甘肅 定西 743000）

目的 探討CD44、ALDH1在胃癌中的表達(dá)情況，并且分析CD44、ALDH1與胃癌臨床特征之間的相關(guān)性。方法 采用免疫組化染色、免疫組化雙重染色檢測正常胃黏膜組織、慢性萎縮性胃炎II～I(xiàn)II級胃黏膜組織及胃癌組織中CD44、ALDH1的表達(dá)情況，分析CD44、ALDH1表達(dá)與胃癌臨床特征之間的關(guān)系。結(jié)果 CD44、ALDH1在胃癌組織中陽性表達(dá)的人數(shù)多于慢性萎縮性胃炎的胃黏膜組織及正常胃黏膜組織（P＜0．05）；胃癌組織中CD44、ALDH1的表達(dá)與腫瘤分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性（P＜0．05）。結(jié)論 胃癌組織中CD44、ALDH1的表達(dá)明顯高于正常胃黏膜組織，與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有密切相關(guān)性，可作為胃癌早期發(fā)現(xiàn)、浸潤、轉(zhuǎn)移、預(yù)后的重要指標(biāo)。

胃癌；CD44；ALDH1；臨床特征

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，世界各地發(fā)病率有很大差異，日本、中國、智利、芬蘭、冰島等國家是胃癌的高發(fā)區(qū)，而美國、澳大利亞、新西蘭等國胃癌的發(fā)病率則較低。中國胃癌的發(fā)病率占全世界的42%，并且胃癌死亡率占惡性腫瘤的第一位，全國平均胃癌死亡率高達(dá)20/10萬，男性高于女性，男女比約為3∶1。目前胃癌的治療主要以手術(shù)為主，輔以放療和化療等綜合治療方法，但手術(shù)治療對晚期胃癌患者已失去了意義。找到一種能夠早期發(fā)現(xiàn)胃癌，與胃癌的發(fā)現(xiàn)、發(fā)展、浸潤、預(yù)后有關(guān)的指標(biāo)，將為胃癌的治療提供新的策略。目前研究發(fā)現(xiàn)，一些細(xì)胞表面分子標(biāo)志物與惡性腫瘤的發(fā)現(xiàn)、發(fā)展及預(yù)后具有相關(guān)性。而CD44是研究比較廣泛的腫瘤干細(xì)胞因子，它是一種細(xì)胞表面跨膜蛋白，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，主要作用是通過和透明質(zhì)酸、纖維粘連蛋白及膠原結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)之間的特異性黏附，參與細(xì)胞對透明質(zhì)酸的攝取及降解，與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞偽足的形成，從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移[1－2]。而ALDH1是乙醛脫氫酶（ALDH）家族成員之一，是催化細(xì)胞內(nèi)乙醛氧化為乙酸的細(xì)胞溶質(zhì)酶，在其與惡性腫瘤關(guān)系的研究中，最初發(fā)現(xiàn)與環(huán)磷酰胺（CTX）類藥物耐藥有關(guān)，這就進(jìn)一步說明ALDH1陽性細(xì)胞能避免化療藥物的作用。進(jìn)一步研究CD44、ALDH1的表達(dá)與胃癌臨床特征的相關(guān)性，可為未來胃癌的發(fā)現(xiàn)、治療提供新的線索及策略，現(xiàn)介紹如下。

1 病例與試劑

本研究中的48例胃癌患者的腫瘤組織（術(shù)前均未行放化療）、18例慢性萎縮性胃炎II～I(xiàn)II級患者的胃黏膜組織及16例正常人的胃黏膜組織均來自定西市第二人民醫(yī)院病理科及內(nèi)鏡中心，均經(jīng)病理學(xué)研究證實。胃癌患者中男26例，女22例；年齡 23～75歲，平均年齡 57．8歲；胃癌處于I、II級的20例，胃癌處于III、IV級的28例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的 28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的20例。

本次研究的濃縮性ALDH1兔抗人多克隆抗體購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，CD44鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，免疫組化染色試劑盒：UltraSensitveTMSP染色試劑盒、DouTMSP雙染試劑盒（KIT－9999）均購自福州邁新生物科技有限公司。

2 方法

將不同組織包埋在石蠟塊里，每個石蠟塊切片4張，用于CD44、ALDH1單染及雙染。經(jīng)過處理的切片置于60℃～70℃烤箱中烘烤6小時，備用。免疫組化染色及免疫組化雙重染色步驟均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

3 結(jié)果判定及統(tǒng)計學(xué)分析

免疫組化染色及免疫組化雙重染色結(jié)果顯示：CD44陽性，表達(dá)于細(xì)胞膜，呈棕黃色；ALDH1陽性，表達(dá)于細(xì)胞漿，呈棕黃色。陽性細(xì)胞計數(shù)參照TomomiIshida的計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)[3]，選擇腫瘤組織比較豐富的區(qū)域，在物鏡下觀察10個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，計算所有陽性細(xì)胞數(shù)。采用半定量方法進(jìn)行統(tǒng)計，無陽性細(xì)胞數(shù)為（－），陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為（+），陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%為（++），陽性細(xì)胞數(shù)＞25%為（+++），染色結(jié)果均由兩位醫(yī)生用雙盲法進(jìn)行評估。

采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

4 結(jié)果

4.1 CD44、ALDH1在不同組織中的表達(dá)

在胃癌組織中，CD44陽性，表達(dá)于細(xì)胞膜，呈棕黃色；CD44在慢性萎縮性胃炎中局灶陽性表達(dá)；而在正常胃黏膜中幾乎不表達(dá)。在胃癌組織中，ALDH1陽性，表達(dá)于細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒；在慢性萎縮性胃炎II～I(xiàn)II級的胃黏膜組織中，ALDH1陽性表達(dá)率明顯低于胃癌組織；在正常胃黏膜組織中，ALDH1無表達(dá)，見表1。

表1 CD44和ALDH1在不同組織中的表達(dá)

4.2 CD44和ALDH1的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

在胃癌組織中，CD44、ALDH1的陽性表達(dá)與腫瘤分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0．05）；CD44、ALDH1 的表達(dá)與性別、腫瘤大小、年齡無明顯相關(guān)性（P＞0．05），見表 2。

表2 CD44和ALDH1在胃癌中的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

4.3 CD44+/ALDH1+在胃癌組織中的陽性表達(dá)及與臨床特征的相關(guān)性

在胃癌組織中，CD44+/ALDH1+的陽性表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分級相關(guān)（P＜0．05）；隨著腫瘤分級的升高、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，CD44+/ALDH1+陽性表達(dá)的患者人數(shù)逐漸增多，見表3。

表3 CD44+/ALDH1+在胃癌中的表達(dá)及與臨床特征的相關(guān)性

5 討論

胃癌是消化道高發(fā)腫瘤，近年來發(fā)病年輕化，發(fā)病率和死亡率增加，晚期患者人數(shù)增加，好多患者錯過手術(shù)時機(jī)。Mayer等[4]發(fā)現(xiàn)，正常胃黏膜無CD44陽性表達(dá)，慢性炎癥有誘導(dǎo)良性胃黏膜表達(dá)CD44的作用，而ALDH1是ALDH超家族編碼特定生命進(jìn)程中的關(guān)鍵酶，與多種人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，最初發(fā)現(xiàn)與環(huán)磷酰胺（CTX）類藥物耐藥有關(guān)，其表達(dá)增高提示對化療藥不敏感、預(yù)后差。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展一直是研究的熱點，研究CD44、ALDH1這兩種蛋白的表達(dá)，為胃癌的早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)防及治療提供線索。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中CD44、ALDH1陽性表達(dá)的人數(shù)明顯多于慢性萎縮性胃炎、正常胃黏膜組織（P＜0．05），慢性萎縮性胃炎的胃黏膜組織中，CD44、ALDH1陽性表達(dá)的人數(shù)多于正常胃黏膜組織（P＜0．05），進(jìn)而說明CD44、ALDH1的陽性表達(dá)與胃癌及胃黏膜疾病有相關(guān)性。任何腫瘤的發(fā)生都是多階段、多基因參與的過程，前期研究發(fā)現(xiàn)，CD44廣泛參與胃癌細(xì)胞的黏附、歸巢、侵襲及轉(zhuǎn)移過程。

Harn等[5]在1996年就發(fā)現(xiàn)，在慢性萎縮性胃炎的胃黏膜組織中，CD44陽性表達(dá)的人數(shù)明顯多于正常胃黏膜組織（P＜0．05），并認(rèn)為它可作為檢查胃癌前病變的有用工具。本次研究證實，CD44、ALDH1的表達(dá)與胃癌患者的年齡、性別及腫瘤大小無明顯相關(guān)性（P＞0．05），而與腫瘤分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明確相關(guān)性（P＜0．05），隨著腫瘤分級的升高、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，CD44、ALDH1陽性表達(dá)的人數(shù)明顯增多，通過進(jìn)一步的免疫組化雙重染色結(jié)果顯示，CD44+/ALDH1+的表達(dá)與腫瘤分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P＜0．05）。Winder等[6]的研究證實，CD44是一種轉(zhuǎn)移相關(guān)基因；謝建偉、Hirata、王軍等[7－9]通過實驗證實，CD44參與胃癌發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程，發(fā)現(xiàn)CD44的表達(dá)與腫瘤分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切相關(guān)性（P＜0．05）。前期關(guān)于結(jié)直腸癌組織的研究證實，CD44、ALDH1、CD44+/ALDH1+的表達(dá)與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有相關(guān)性（P＜0．05）[10]，為靶向治療提供靶點。

[1]Shah N，Cabanillas F，Mclntyre B，et al．Prognostic value of serum CD44，intercellular cell adhesion molecule－1 and vascular cell adhesion molecule－1 levels in patients with indolent non－Hodgkin lymphomas[J]．Leuk Lymphoma，2012，53（1）：50－56．

[2]WakamatsuY，SakamotoN，OoHz，et al．Expressioof cancer stem cell markers ALDH1，CD44，CD133 in primary tumor and lymph node metastasis of gantric cancer[J]．Pathol Int，2012，62（2）：112－119．

[3]Ishida T．Immunohistochemical expression of the CD44 variant 6 in colorectal adenocar－cinoma[J]．Surg Today，2000，30（1）：28－32．

[4]Mayer B，Jauch KW，Gunthert U，et al．Denovo expression of CD44 and survival in gastric cancer[J]．Lancet，1993，42（8）：1019－1022．

[5]Harn HJ，Ho LI，Shyu RY，et al．Soluble CD44isoforms in serum as potential markers of metastatic gastric carcinoma [J]．J Clin Gastroenterol，1996，22（2）：107－110．

[6]Winder T，Ning Y，Yang D，et al．Germline polymorphisma in genes involved in the CD44 signaling pathway are associated with clinical outcome in localined gastric adenocarcinoma[J]．Int J Cancer，2011，129（5）：1096－1104．

[7]謝建偉，黃昌明，鄭朝輝，等．腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44在胃癌中的表達(dá)及其意義[J]．中華胃腸外科雜志，2013，16（11）：1107－1111．

[8]Hirata K，Suzuki H，Imaeda H，et al．CD44 variant 9 expression in primary early gastric cancer as a marker for recurrence[J]．Br J，2013（109）：379－386．

[9]王軍，張勇，任芳，等．干細(xì)胞標(biāo)志物CD44與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性研究[J]．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013，21（3）：85．

[10]張彩蘭，劉斌，楊艷麗，等．癌干細(xì)胞CD44+/ALDH+在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義[J]．世界華人消化雜志，2012（31）：3005－3009．

G73

B

1671－1246（2017）24－0150－03