梁群超，李引乾，宋志元，儲 君，孫雪峰，張要齊*

（1.河南惠通天下動物藥業(yè)有限公司，河南鄭州450002；2.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新鄭451162；3.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西楊凌712100）

四黃止痢泡騰顆粒有效成分在雞體內(nèi)代謝動力學研究

梁群超1，李引乾2，宋志元3，儲 君3，孫雪峰1，張要齊1*

（1.河南惠通天下動物藥業(yè)有限公司，河南鄭州450002；2.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新鄭451162；3.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西楊凌712100）

目的為了了解四黃止痢泡騰顆粒相對生物利用度，分別給雞灌胃四黃止痢泡騰顆粒和普通顆粒，采用HPLC法測定血漿中黃芩苷含量，采用DASS2.1.1軟件計算相關藥動學參數(shù)。結果雞血漿中黃芩苷濃度出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象。泡騰顆粒和普通顆粒 C1max分別為：1.03 μg·m l-1和 0.93 μg·ml-1；C2max為 0.95 μg·m l-1和 0.73 μg·m l-1；T1max為 0.47 h 和 0.39 h， T2max為 2.43 h和1.93 h；AUC為11.6μg·h·m l-1和10.63μg·h·m l-1；相對生物利用度為109.13%。 結論：四黃止痢泡騰顆粒相對生物利用度有所提高,值得推廣。

四黃止痢泡騰顆粒；黃芩苷；相對生物利用度；藥動學

四黃止痢泡騰顆粒以泡騰物料為崩解劑制成的顆粒制劑，有黃連、黃柏、大黃、黃芩、板藍根和甘草組成。具有清熱瀉火、止痢功效。有研究報道泡騰顆粒吸收好，生物利用度高[1-4]。具有分散性好，釋藥速度快，充分保持有效成分的生理活性，促進有效成分的吸收，口感好等特點；黃芩苷在其它動物體內(nèi)動力學報道較多[5-9]，在雞體內(nèi)動力學報道較少[10-12]。該藥泡騰顆粒中黃芩苷在雞體內(nèi)代謝國內(nèi)尚未報道，本實驗利用高效液相測定法，蘆丁為內(nèi)標物，普通顆粒做參比試劑，測定雞血漿中泡騰顆粒和普通顆有效成分黃芩苷的含量，計算四黃止痢泡騰顆粒相對生物利用度。為該藥的臨床應用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器與設備

Agilent1100高效液相色譜儀 （美國惠普公司）；AE240型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；XK96-B快速混勻器 （新康醫(yī)療器械有限公司）；KQ-250E超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；TGL-16G臺式高速離心機（上海醫(yī)用分析儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

黃芩苷對照品（110715-201616）、蘆丁對照品（100080-201610）購于中國食品藥品檢定研究院；肝素鈉（鄭州中原昕泰生物科技有限公司，批號10067）；四黃止痢泡騰顆粒和普通顆粒（河南惠通天下生物工程有限公司制備）；甲醇為色譜純；其他均為分析純；水為雙蒸水。

1.3 實驗動物

海蘭褐雛雞購于河南雛鷹農(nóng)牧股份有限公司，1日齡購入，雌雄兼有，籠養(yǎng)，自由飲水、采食，飼料為全價日糧，常規(guī)飼養(yǎng)管理。

2 方法

2.1 動物分組

取120日齡海蘭褐雞12只，公母各半，平均體質(zhì)量（1480±50）g，給藥前禁食 12h，隨機分成四黃止痢泡騰顆粒組和普通顆粒組，灌服四黃止痢顆粒普通顆粒及泡騰顆粒（30 g/kg·W），

2.2 血樣的采集

于給藥后0.16h,0.5h,1h,2h,3h,4h,6h,8h,12h,24h,翅靜脈取血0.5ml，置含有肝素抗凝的EP管內(nèi)，離心10min（4000r·min-1）分離血漿，置 -20℃冰箱保存待測。

2.3 分析方法的建立

2.3.1 色譜條件

分析柱：DiamonsilTMC18 （4.6mm×250mm，5 μm）；流動相：甲醇 - 水 - 磷酸（43：57：0.2）；內(nèi)標物：蘆?。?00 μg·ml-1）；檢測波長：278 nm；流速：1.0ml·min-1，柱溫：35 ℃，進樣量：50 μl。

2.3.2 對照品及內(nèi)標溶液的配制

精密稱取黃芩苷對照品2.65mg，用甲醇溶解并定溶10ml量瓶，即得濃度為265μg·ml-1黃芩苷對照品溶液，4℃冰箱保存。精密稱取蘆丁對照品12.5mg，用雙蒸水溶解并定溶25ml量瓶，即得蘆丁濃度為0.5mg·ml-1內(nèi)標溶液，4℃冰箱保存。

2.3.3 血漿樣品預處理

取200μl血漿樣品，加入0.5mg·ml-1蘆丁內(nèi)標液20μl及高氯酸溶液50μl，渦旋1min；加入甲醇200μl、旋渦振蕩10min沉淀蛋白，離心 10min（14000 r·min-1），取上清液，進樣分析。

2.3.4 方法專屬性

分別取空白血漿、空白血漿加黃芩苷對照、空白血漿加內(nèi)標物及黃芩苷對照、含藥血漿樣品，按2.3 項下色譜條件測定。

2.3.5 標準曲線和線性范圍

精密量取空白血漿0.2ml，精密加入適量黃芩苷對照品，配制成 0.0375、0.075、0.15、0.3、0.6、1.2μg·ml-1濃度標準血漿。按照樣品預處理血漿方法進行操作，依次進樣50μl。以黃芩苷濃度為橫坐標，黃芩苷峰面積與蘆丁峰面積比值為縱坐標，繪制標準曲線。求得直線回歸方程

2.3.6 精密度考察

配制 0.05 μg·ml-1，0.10 μg·ml-1，0.53 μg·ml-1濃度的標準血漿樣品各5份，按血漿樣品處理方法平行操作后進行，得到3個濃度樣品的RSD。連續(xù)測定5天，得到3個濃度樣品RSD。

2.3.7 穩(wěn)定性考察

配制標準黃芩苷濃度為0.53μg·ml-1的濃度的血漿樣品，分別室溫放置24 h、凍融3次、按血漿處理后冷凍，按2.3項下方法測定黃芩苷含量。

2.3.8 數(shù)據(jù)處理

HPLC法測定黃芩苷的血藥濃度數(shù)據(jù)，將平均血藥濃度數(shù)據(jù)輸入DAS2.2.1版軟件計算相應參數(shù)。所得參數(shù)用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學處理。

3 結果

3.1 方法專屬性

按2.3項下色譜條件測定，結果蘆丁在11.03 min出峰，黃芩苷19.69min出峰，于血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)能完全區(qū)分開，專屬性好，HPLC圖結果見圖1。

圖1 HPLC法測定雞血漿中黃芩苷藥物濃度的色譜圖

3.2 標準曲線和線性范圍

繪制標準曲線如圖2，求得直線回歸方程Y=0.7141x+0.0728，R2=0.9995。 結 果 表 明 在0.0375-1.2μg·m l-1范圍內(nèi)線性關系良好。

圖2 黃芩苷與蘆丁峰面積比值和黃芩苷濃度標準曲線圖

3.3 最低檢測限

信噪比S/N為3時的質(zhì)量濃度為最低檢測質(zhì)量濃度，得黃芩苷的最低檢測限為3.495 ng·ml-1。

3.4 精密度考察

配制三個濃度的標準血漿樣品日內(nèi)、日間平均回收率大于89%；RSD均小于5%，結果見表1。

3.5 穩(wěn)定性考察

分別室溫放置24 h、凍融3次、按血漿預處理后凍存，計算回收率結果分別為93.5%（RSD=3.24,n=5）；96.7% （RSD=2.81，n=3）；94.2%（RSD=4.35,n=5），表明黃芩苷在室溫、冷凍及反復凍融條件下穩(wěn)定。

3.6 藥-時曲線擬合及藥動學參數(shù)計算

泡騰顆粒組與普通顆粒組的平均血藥濃度-時間曲線見圖3。達峰時間（Tmax）和達峰濃度（Cmax）均采用實測值，AUC面積采用梯形法計算，組間藥動學參數(shù)用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，藥動學主要參數(shù)見表2。

表1 雞血漿中黃芩苷含量精密度實驗結果

表2 灌胃雞四黃止痢泡騰顆粒和普通顆粒黃芩苷主要藥動學參數(shù)

圖3 灌胃雞四黃止痢泡騰顆粒和普通顆粒黃芩苷藥-時曲線

4 討論

4.1 四黃止痢泡騰顆粒和普通顆粒藥-時曲線出現(xiàn)雙峰，有文獻報道，大鼠灌服黃芩水煎劑后，黃芩苷等在體內(nèi)過程有明顯的雙峰現(xiàn)象，高海[11]報道復方連翹中黃芩苷濃度也有類似的結果，本實驗結果與其一致，其原因可能是由于給藥存在肝腸循環(huán)；也可能是雙部位吸收所致[13-16]，存在胃腸循環(huán)引起雙峰現(xiàn)象，但需要進一步證實。雙峰增大了藥-時曲線下面積，同時也延長了半衰期，為臨床制定合理的給藥方案提供科學依據(jù)。

4.2 四黃止痢泡騰顆粒組與普通顆粒組比較，T1max、T2max雖然延遲，差異不顯著；C2max顯著增加，泡騰型顆粒組AUC顯著增大；表明四黃止痢泡騰顆粒生物利用度有所提高。

4.3 泡騰顆粒劑是近年來國外開發(fā)應用的一種新型制劑工藝，以泡騰物料為崩解劑制成的一種顆粒劑，投入水中會產(chǎn)生大量的氣泡（CO2），使顆粒迅速崩解和融化、起效迅速、生物利用度高；經(jīng)過調(diào)味后的泡騰顆粒，口味更佳，適口性好；同時泡騰顆粒，工藝穩(wěn)定、貯存、運輸、攜帶方便。本實驗將普通顆粒做參照，對泡騰型顆粒進行血漿黃芩苷含量測定，計算四黃止痢泡騰顆粒相對生物利用度109.13%。中藥組分復雜，化學成分多，加上藥材品種、產(chǎn)地、加工等因素的影響，其有效成分一直是中藥分析的難點和重點。大多數(shù)的中藥有效成分和藥理作用機制尚未明確，其藥效一般是多成分共同作用的結果。針對某種化學結構明確且能用定量分析法測定的以其血藥濃度為研究對象。對成分復雜或不明的以生物效應為研究對象[17-19]。本研究采用化學測定法對有效成分黃芩苷作為研究對象，制劑中的其它成分的藥動學還需進一步研究。

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S853.74

B

1003-8655（2017）05-0012-03

梁群超（1979--），獸醫(yī)師，從事獸藥研究與開發(fā)

＊通訊作者：張要齊，碩士，研究方向為農(nóng)業(yè)推廣，E-mail∶httx0371@126.com