曹利丹

（鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，河南鄭州451150）

樺褐孔菌多糖對小鼠抗運動疲勞的影響

曹利丹

（鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，河南鄭州451150）

為了研究樺褐孔菌多糖對小鼠的抗運動疲勞作用，試驗利用將小鼠進(jìn)行分組，分別為低、中、高劑量組和對照組，按劑量（10、20、30、0mg/kg）灌胃樺褐孔菌多糖，灌胃延續(xù)30d，末次灌胃后測定抗運動疲勞及消炎作用指標(biāo)，包括小鼠負(fù)重游泳、爬桿、耐缺氧時間以及運動后小鼠體內(nèi)尿素氮、血乳酸、肝糖原、炎癥因子腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）的含量的方法.結(jié)果表明：樺褐孔菌多糖可提高小鼠爬桿、負(fù)重游泳、耐缺氧時間，還能夠提高小鼠機體運動后肝糖原儲存量，降低血乳酸和血清尿素氮儲存量，說明樺褐孔菌多糖具有增強小鼠抗運動性疲勞和耐缺氧的功能活性.

樺褐孔菌多糖；小鼠；運動；抗疲勞；消炎

樺褐孔菌（（Inonotus obliquus）隸屬擔(dān)子菌亞門，主要產(chǎn)地為俄羅斯、日本以及我國的吉林省、黑龍江省等地，是非常重要的藥用菌類.其含有重要的功能性成分，如含有樺褐孔菌多糖、樺褐孔菌多酚類物質(zhì)以及樺褐孔菌三萜類化合物，具有抗氧化、抗腫瘤以及消炎等功效.有研究表明，樺褐孔菌還具有治療糖尿病、防治高血壓等功效，因此樺褐孔菌在藥用真菌中占有重要的地位.近年來，樺褐孔菌的研究廣受人們關(guān)注，本研究通過制得的樺褐孔菌多糖灌胃小鼠，研究其對小鼠的抗運動疲勞的影響，對進(jìn)一步開發(fā)樺褐孔菌產(chǎn)品提供技術(shù)參考.

1 材料

1.1 試驗動物

ICR小鼠，60只，雄性，重量28～30g，購自中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物中心，合格證號SCXK2016-0013.

1.2 主要材料與試劑

樺褐孔菌，由雪開野生靈芝銷售有限公司提供；石油醚、乙醇，購自宏盛化工科技有限公司；尿素氮、血乳酸試劑盒，，Siemens Medical Solutions Diagnostics生產(chǎn)；小鼠TNF-α酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA）檢測試劑盒、小鼠IL-6 ELISA檢測試劑盒，由上海依科賽生物制品有限公司生產(chǎn).

1.3 主要儀器

德國EK Flactatescout便攜式血乳酸測定儀，德國EKF有限公司生產(chǎn)；WFJ-15型超微粉碎機，江陰市康和機械制造有限公司生產(chǎn)；TS-5型離心機，湖南平凡科技有限公司生產(chǎn)；721G-100型可見分光光度計，上海雷韻試驗儀器制造有限公司生產(chǎn)；Hei-VAP Advantage旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國HEIDOLPH有限公司生產(chǎn)；HWS-14型電熱恒溫水浴鍋，上海善志儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)；LPS（E.coliO26:B6）美國Sigma公司；

2 方法

2.1 樺褐孔菌多糖的制備

取一定量的樺褐孔菌，洗凈烘干后進(jìn)行粉碎至40目，取一定量粉末，向其中加入40倍水，在90℃溫度下浸提2.5h，進(jìn)行過濾，濃縮，再加入4倍體積的乙醇（95%）溶液，在4℃下靜止24h，離心后取沉淀，再采用無水乙醇溶液清洗3次，干燥后得到多糖粗品.取一定量樺褐孔菌粗多糖，向其中加入1L純凈水溶解，用三氯乙酸-正丁醇法去除蛋白后于4℃冰箱中保存，備用.

2.2 試驗動物分組與給藥

將小鼠分成4組，每組15只，除每天正常飼養(yǎng)外，給對照組每天灌胃去離子水10mg/kg，低劑量組每天灌胃樺褐孔菌多糖10mg/kg，給中劑量組每天灌胃樺褐孔菌多糖20mg/kg，給高劑量組每天灌胃樺褐孔菌多糖30mg/kg，持續(xù)灌胃30d.其他條件四組均相同.

2.3 負(fù)重游泳時間測定試驗

各組小鼠經(jīng)末次灌胃樺褐孔菌多糖30min后，將每組小鼠分別置于相對應(yīng)的小鼠游泳試驗游泳箱內(nèi)，水深約為35cm，水溫約為28℃，再將小鼠尾巴負(fù)重體重5%鉛絲，從此刻開始記錄時間，也即從小鼠開始游泳至小鼠死亡時間，作為負(fù)重游泳時間.

2.4 爬桿時間測定試驗

對小鼠進(jìn)行末次灌胃樺褐孔菌多糖30min后，將其放于玻璃棒上，玻璃棒長度為140mm，直徑為10mm，此時，使小鼠身體每個部位肌肉有緊張感覺，開始記錄從小鼠開始上爬至小鼠疲勞后不能玻璃棒上繼續(xù)爬，從而下落，參照以上上爬試驗，共做3次平行試驗，平均時間即為爬桿時間[17].

2.5 常壓耐缺氧時間測定試驗

對小鼠進(jìn)行末次灌胃樺褐孔菌多糖30min后，將其放在大瓶中，瓶內(nèi)提前放入石灰15g，小鼠進(jìn)入后將大瓶密封，此時記錄從小鼠進(jìn)入至小鼠無法呼吸時的時間，即小鼠常壓耐缺氧時間[18].

2.6 生化指標(biāo)的測定方法

2.6.1 血清尿素氮含量

對小鼠進(jìn)行末次灌胃樺褐孔菌多糖30min后，將小鼠放于試驗用游泳池中進(jìn)行游泳，泳池溫度約為35℃，游泳90min后，對小鼠進(jìn)行采血，同時分離血清，測其中尿素氮含量.

2.6.2 肝糖原含量

對小鼠進(jìn)行末次灌胃樺褐孔菌多糖30min后，將小鼠放于試驗用游泳池中進(jìn)行游泳，泳池溫度約為35℃，游泳90min后，處死后進(jìn)行取小鼠肝組織200mg，將其勻漿，檢測肝糖原含量[19].

2.6.3 血乳酸含量

對小鼠進(jìn)行末次灌胃樺褐孔菌多糖30min后，將小鼠尾部系上鉛絲，重量為其身體重量的5%，進(jìn)行負(fù)重游泳，泳池水溫約為35℃，游泳90min后，休息20min，從小鼠眼球位置取血，測血乳酸含量.

2.6.4 TNF-α和IL-6含量檢測

收集各組小鼠血清，參照ELISA試劑盒相關(guān)說明書操作，測定血清TNF-α和IL-6含量.

3 結(jié)果與分析

3.1 樺褐孔菌多糖對小鼠負(fù)重游泳、爬桿及常壓耐缺氧時間的影響

結(jié)果見表1.

表1 樺褐孔菌多糖對小鼠負(fù)重游泳、爬桿、耐缺氧時間的影響(n=15，x±s)

由表1可知，將小鼠灌胃樺褐孔菌多糖后，小鼠運動后各項指標(biāo)均發(fā)生明顯變化，游泳時間明顯延長，且灌胃樺褐孔菌多糖劑量越大，小鼠負(fù)重游泳時間越長，而且中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳延長時間極顯著，爬桿時間也明顯增長，劑量越大，延長時間越長，耐缺氧時間也有較明顯變化，灌胃樺褐孔菌多糖劑量越大，小鼠耐缺氧時間越長.說明樺褐孔菌多糖能夠增強小鼠的運動能力以及運動耐力，具有較強的抗疲勞和耐缺氧能力.

3.2 樺褐孔菌多糖對小鼠生化指標(biāo)的影響

結(jié)果見表2.

表2 樺褐孔菌多糖對小鼠各項生化指標(biāo)的影響(n=15，x±s)

由表2可知，將小鼠灌胃樺褐孔菌多糖后，生化指標(biāo)變化較為明顯，劑量越大，生化指標(biāo)變化越大.血清尿素氮隨著灌胃樺褐孔菌多糖劑量增大而降低，而且灌胃劑量達(dá)到20mg/kg后，下降極顯著.運動后肝糖原儲存量隨著灌胃樺褐孔菌多糖劑量的增大而增加，從表中可明顯看出，中、高劑量組肝糖原儲存量增長極顯著.血乳酸含量隨著灌胃劑量的增大降低顯著，達(dá)到中、高劑量組后下降明顯.血乳酸和尿素氮的降低能夠說明小鼠運動后機體恢復(fù)能力加強，恢復(fù)速度會加快，有利于減少運動后乳酸堆積，具有積極效果，肝糖原能夠為運動機體不斷提供能量，灌胃樺褐孔菌多糖后，小鼠體內(nèi)肝糖原儲存量增多，能夠為機體運動提供保障，因此，灌胃樺褐孔菌多糖能夠增強機體運動能力，加快機體恢復(fù)，提高抗疲勞功能.

4 結(jié)論

小鼠經(jīng)灌胃樺褐孔菌多糖后，各項運動及生理生化指標(biāo)均發(fā)生變化，而且隨著灌胃樺褐孔菌多糖劑量越大，各項指標(biāo)變化越明顯，隨著灌胃劑量的增大，小鼠負(fù)重游泳時間明顯延長且中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳延長時間極顯著，爬桿時間延長，耐缺氧時間也顯著延長.血乳酸和血清尿素氮隨著灌胃劑量的增大而下降顯著，肝糖原儲存量增多，樺褐孔菌多糖劑量組均可顯著降低血清TNF-α和IL-6含量.因此可得出，灌胃樺褐孔菌多糖能夠顯著增強小鼠機體運動能力，加快機體運動后恢復(fù)，對小鼠具有較強的抗運動疲勞和消炎功能.

〔1〕張梅梅,魏志文,劉玉冰,趙艷霞,鄭維發(fā).Folin-Ciocalteu比色法測定樺褐孔菌多酚的條件優(yōu)化[J].菌物學(xué)報,2011(02):295-304.

〔2〕陳義勇,顧小紅,湯堅.樺褐孔菌多糖的抗腫瘤活性研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報,2011(01):65-69.

〔3〕閆可，等.樺褐孔菌不同菌株培養(yǎng)特性及人工栽培比較[J].延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報，2011（04）.

R285.5

A

1673-260X（2017）11-0149-02

2017-08-24