王 雷，馬園園，李亞玲，周粵閩

(河南大學(xué)附屬淮河醫(yī)院整形外科，河南 開(kāi)封 475001)

芍藥苷對(duì)增殖性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖抑制作用及機(jī)制研究

王 雷，馬園園，李亞玲，周粵閩

(河南大學(xué)附屬淮河醫(yī)院整形外科，河南 開(kāi)封 475001)

目的探索芍藥苷對(duì)增殖性瘢痕(HS)成纖維細(xì)胞增殖抑制作用及機(jī)制研究。方法0(對(duì)照組)，200，400，800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞24、48、72 h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，Hoechst染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞Ⅰ型膠原(COL Ⅰ)和Ⅲ型膠原(COL Ⅲ)含量，Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白及基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)、MMP13表達(dá)。結(jié)果200，400，800 μmol/L芍藥苷能顯著降低HS成纖維細(xì)胞活力(P< 0.01)，使細(xì)胞核發(fā)白，皺染，使細(xì)胞周期阻滯在G1期(P< 0.01)，能顯著降低細(xì)胞中COLⅠ、COLⅢ含量(P< 0.01)，下調(diào)MMP1、MMP13、TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3表達(dá)(P< 0.01)。結(jié)論芍藥苷能明顯抑制HS成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成，可能是通過(guò)抑制TGF-β1/Smad信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。

芍藥苷；增生性瘢痕；成纖維細(xì)胞；增殖；膠原合成

增生性瘢痕(hypertrophic scar，HS)是皮膚嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷或者感染后，創(chuàng)面異常修復(fù)的必然結(jié)果，臨床主要表現(xiàn)為創(chuàng)面皮膚增厚，高于正常皮膚，瘢痕攣縮并有瘙癢感，甚至影響患者外觀，引起關(guān)節(jié)功能障礙，給患者造成巨大心理負(fù)擔(dān)[1]。目前研究認(rèn)為HS的發(fā)生機(jī)制是皮膚受損后，成纖維細(xì)胞被激活后大量增殖，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)膠原的大量合成及過(guò)度沉積[2, 3]。TGF-β1是一種具有多種功能的細(xì)胞因子，在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中起著重要作用，不僅能夠調(diào)控促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，凋亡及遷移，還能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞大量合成膠原，抑制細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶(MMPs)的分泌及膠原的降解[4]。芍藥苷是傳統(tǒng)中藥芍藥的干燥根提取物，研究表明芍藥苷能夠通過(guò)抑制TGF-β1的表達(dá)及分泌，進(jìn)而抑制膠原及細(xì)胞外基質(zhì)的合成，從而抑制大鼠、小鼠肝、腎及肺纖維化[5-7]。進(jìn)而提示芍藥苷可能通過(guò)TGF-β1信號(hào)通路抑制HS的發(fā)生發(fā)展，成為HS的有效治療藥物，但相關(guān)報(bào)道較少，因此本研究將對(duì)此展開(kāi)探討。

1 材料和方法

1.1增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的制備

本研究所需要的增生性瘢痕組織塊由某整形科提供。所有研究對(duì)象均征得患者或者其家屬同意并簽署知情同意書(shū)，并由我院的倫理委員會(huì)通過(guò)。在無(wú)菌條件下用眼科剪剪去附著于組織塊上的脂肪組織及表皮，接著用含有100 μg/mL的青霉素及鏈霉素的PBS洗滌組織塊3次，接著用眼科剪繼續(xù)將組織塊剪成1 mm3左右的組織塊，后將組織塊平鋪于25 cm2的培養(yǎng)瓶中，加入含有15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在第3天用PBS將浮在培養(yǎng)基中的組織塊洗去，并加入少量新鮮培養(yǎng)基，同時(shí)觀察組織塊中細(xì)胞游離出來(lái)的的情況，當(dāng)培養(yǎng)瓶中細(xì)胞密度達(dá)到80%的時(shí)候，用0.25%的胰蛋白酶消化細(xì)胞，以1∶2的比例進(jìn)行傳代，取第3～5代細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究[8, 9]。

1.2主要試劑與儀器

芍藥苷購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；四甲基偶氮唑鹽(MTT)，DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清，Ⅱ型膠原酶均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；胰蛋白酶，細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒，Hoechst染色試劑盒均南京凱基生物技術(shù)有限公司；COLⅠ、COL Ⅲ酶聯(lián)免疫吸附試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司；兔抗人TGF-β1、Sma2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、MMP1、MMP13、GAPDH多克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

MK3酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；FACSCalibur流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司；TS100倒置熒光顯微鏡購(gòu)自日本Nikon公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 MTT法檢測(cè)HS成纖維細(xì)胞活力

將6 × 103個(gè)HS成纖維細(xì)胞接種到96孔板，培養(yǎng)24 h后，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞24、48、72 h后，每孔加入終濃度為5 mg/mL的MTT并孵育4 h后，棄上清液，再另外每孔加入150 μL的二甲基亞砜，振蕩使結(jié)晶物溶解，于酶標(biāo)儀波長(zhǎng)560 nm處測(cè)A560值。

1.3.2 Hoechst染色檢測(cè)HS成纖維細(xì)胞形態(tài)

將9 × 103個(gè)HS成纖維細(xì)胞接種到6孔板，培養(yǎng)24 h后，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h，PBS洗滌，加入4%多聚甲醛固定10 min，PBS洗滌，加入終濃度為10 μg/mL的Hoechst染色液，染色5 min，PBS洗滌后，于熒光顯微鏡下觀察并拍照，凋亡的細(xì)胞熒光更強(qiáng)，細(xì)胞核發(fā)白，呈現(xiàn)皺染。

1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HS成纖維細(xì)胞周期

將9 × 103個(gè)HS成纖維細(xì)胞接種到6孔板，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，每組收集1 × 105個(gè)/mL細(xì)胞，再加入5 μL終濃度為10 mg/mL的RNase，吹打混勻后，37℃孵育1 h，繼續(xù)加入PI染液，吹打混勻并于室溫避光孵育30 min，1 h內(nèi)在流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)分析。

1.3.4 ELISA法檢測(cè)HS成纖維細(xì)胞中COLⅠ、COLⅢ含量

將8 × 103個(gè)HS成纖維細(xì)胞接種到6孔板，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，利用0.25%胰蛋白酶消化并收集細(xì)胞，接著分別按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)細(xì)胞中COLⅠ、COL Ⅲ含量。

1.3.5 Western blot檢測(cè)HS成纖維細(xì)胞中TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白及MMP1、MMP13蛋白的表達(dá)

將9 × 103個(gè)HS成纖維細(xì)胞接種到6孔板，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，在4℃條件下刮下6孔板中細(xì)胞，離心并收集細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液，裂解30 min，離心收集上清液即是總蛋白。接著采用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度。制作濃縮膠及分離膠，并水封靜置30 min。蛋白樣品上樣，進(jìn)行十二烷基苯磺酸鈉凝膠電泳1～2 h，后濕法轉(zhuǎn)膜30～50 min。5%脫脂奶粉封閉1 h，一抗溶液(兔抗人TGF-β1、Sma2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、MMP1、MMP13、GAPDH多克隆抗體，稀釋度為1∶100)孵育，4℃過(guò)夜；二抗溶液室溫孵育1～2 h。于凝膠成像系統(tǒng)中曝光。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞活力的影響

如表1所示，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞24、48、72 h后，經(jīng)MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著給藥濃度的增加，細(xì)胞活力逐漸降低(P< 0.01)。

2.2芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞凋亡的影響

如圖1所示，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，與對(duì)照組細(xì)胞凋亡率(3.25±0.32)%比較，200、400、800 μmol/L芍藥苷組細(xì)胞凋亡率分別為(13.47±1.35)%、(26.69±2.67)%、(39.36±4.00)%，說(shuō)明芍藥苷能使細(xì)胞核皺縮，濃染，細(xì)胞凋亡顯著。

2.3芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞周期的影響

如表2所示，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，經(jīng)流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，200、400、800 μmol/L芍藥苷能使HS成纖維細(xì)胞周期阻滯在G期(P< 0.01)。

2.4芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞中COLⅠ、COLⅢ含量的影響

如表3所示，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，經(jīng)ELISA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，200、400、800 μmol/L芍藥苷能降低HS成纖維細(xì)胞中COLⅠ、COL Ⅲ含量(P< 0.01)，且呈劑量依賴關(guān)系。

Tab.1Effect of paeoniflorin at different doses on cell viability of the HS fibroblasts

組別Groups24h48h72h對(duì)照組Controlgroup0.543±0.0500.645±0.0610.732±0.071200μmol/L芍藥苷組200μmol/Lpaeonifloringroup0.473±0.043**0.532±0.053**0.562±0.058**400μmol/L芍藥苷組400μmol/Lpaeonifloringroup0.408±0.041**0.451±0.052**0.464±0.042**800μmol/L芍藥苷組800μmol/Lpaeonifloringroup0.334±0.030**0.364±0.036**0.368±0.016**

注：與對(duì)照組比較，**P< 0.01。

Note. Compared with the control group,**P< 0.01.

Tab.2Effect of paeoniflorin on cell cycle of the HS fibroblasts

組別GroupsG1期/%G1phaseS期/%SphaseG2期/%G2phase對(duì)照組Controlgroup41.53±4.1523.48±2.2435.99±3.60200μmol/L芍藥苷組200μmol/Lpaeonifloringroup48.18±4.82**19.42±2.20**33.40±3.34**400μmol/L芍藥苷組400μmol/Lpaeonifloringroup55.69±5.57**18.38±1.83**25.93±2.59**800μmol/L芍藥苷組800μmol/Lpaeonifloringroup67.86±6.79**14.65±1.45**17.49±1.75**

注：與對(duì)照組比較，**P< 0.01。

Note. Compared with the control group,**P< 0.01.

Tab.3Effect of paeoniflorin on the levels of COL I and COL III in HS fibroblasts

組別GroupsCOLI含量/ng/mLCOLIlevelCOLIII含量/ng/mLCOLIIIlevel對(duì)照組Controlgroup213.47±2.2325.70±0.58200μmol/L芍藥苷組200μmol/Lpaeonifloringroup182.45±1.65**19.89±1.08**400μmol/L芍藥苷組400μmol/Lpaeonifloringroup143.22±1.43**14.51±0.53**800μmol/L芍藥苷組800μmol/Lpaeonifloringroup128.71±1.29**8.74±0.82**

注：與對(duì)照組比較，**P< 0.01。

Note. Compared with the control group,**P< 0.01.

注：A：對(duì)照組；B：200 μmol/L芍藥苷組；C：400 μmol/L芍藥苷組；D：800 μmol/L芍藥苷組。圖1 芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞凋亡的影響(× 200)Note. A: Control group； B: 200 μmol/L paeoniflorin group； C: 400 μmol/L paeoniflorin group； D: 800 μmol/L paeoniflorin group.Fig.1 Effect of paeoniflorin on cell apoptosis of the HS fibroblasts

2.5芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞中MMPs含量的影響

如圖2所示，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，經(jīng)Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，200、400、800 μmol/L芍藥苷能降低HS成纖維細(xì)胞中MMP1及MMP13表達(dá)量(P< 0.01)，且呈劑量依賴關(guān)系。

注：A：對(duì)照組；B：200 μmol/L芍藥苷組；C：400 μmol/L芍藥苷組；D：800 μmol/L芍藥苷組。與對(duì)照組比較，** P< 0.01。圖2 芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞中MMPs表達(dá)量的影響Note. A: Control group; B: 200 μmol/L paeoniflorin group; C: 400 μmol/L paeoniflorin group; D: 800 μmol/L paeoniflorin group. Compared with the control group,**P< 0.01.Fig.2 Effect of paeoniflorin on the expression levels of MMPs in HS fibroblasts

2.6芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞中TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

如圖2所示，0(對(duì)照組)、200、400、800 μmol/L的芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞48 h后，經(jīng)Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，200、400、800 μmol/L芍藥苷能降低HS成纖維細(xì)胞中TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3表達(dá)(P< 0.01)，且呈劑量依賴關(guān)系。

注：A：對(duì)照組；B：200 μmol/L芍藥苷組；C：400 μmol/L芍藥苷組；D：800 μmol/L芍藥苷組。與對(duì)照組比較，** P< 0.01。圖3 芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞中TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Note. A: Control group; B: 200 μmol/L paeoniflorin group; C: 400 μmol/L paeoniflorin group; D: 800 μmol/L paeoniflorin group. Compared with the control group,**P< 0.01.Fig.3 Effect of paeoniflorin on the expression levels of TGF-β/Smad signaling pathway related proteins in HS fibroblasts

3 討論

TGF-β包括TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3，是創(chuàng)傷愈合過(guò)程中重要的細(xì)胞因子，其中TGF-β1研究最為廣泛。Smad蛋白是TGF-β受體作用的唯一信使分子，包括受體型(Smad2、Smad3、Smad5等)、輔助型(Smad4)及抑制型(Smad6和Smad7)。TGF-β將外界信號(hào)傳遞給Smad2/3，使Smad2/Smad3磷酸化，接著與Smad4結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞核中調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。而Smad6/7可以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合TGF-β受體抑制Smad2/Smad3的磷酸化。研究表明燒傷患者在康復(fù)以后常常出現(xiàn)瘢痕組織的增生，而且患者此時(shí)瘢痕組織中TGF-β1、Smad2、Smad3的表達(dá)量顯著高于正常人[10]。而且臨床試驗(yàn)證實(shí)抗TGF-β抗體對(duì)糖尿病腎纖維化作用顯著，且副作用小[11]。另外Wang等[12]研究證實(shí)TGF-β多肽拮抗劑能顯著的減輕HS成纖維細(xì)胞表型。這些研究研究說(shuō)明通過(guò)拮抗TGF-β信號(hào)通路對(duì)HS的治療具有顯著的理論指導(dǎo)意義。

芍藥屬于毛莨科植物，具有止攣，活血化瘀等功效，被廣泛應(yīng)用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)退行性疾病、自身能免疫性疾病、心腦血管疾病等疾病的治療中[13]。芍藥苷是芍藥主要的單體活性成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、抗抑郁等作用[14]。近些年研究還發(fā)現(xiàn)芍藥苷具有抗纖維化作用，如胡宗濤等[5]研究表明芍藥苷能下調(diào)TGF-β1、p-Smad3、p-Smad4及p-Smad7表達(dá)抑制大鼠放射性肝纖維化。Zeng等[6]研究證實(shí)芍藥苷能夠減輕腎間質(zhì)纖維化模型小鼠的肺組織及腎間質(zhì)纖維化作用，與通過(guò)下調(diào)p-Smad2及p-Smad3表達(dá)有關(guān)。Ji等[7]研究證實(shí)芍藥苷能通過(guò)Smad通路抑制TGF-β誘導(dǎo)的A549細(xì)胞的纖維化。從而提示芍藥苷可能能夠通過(guò)調(diào)控TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)抑制HS成纖維細(xì)胞的增殖與膠原沉積。

因此本研究首先參考相關(guān)文獻(xiàn)并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)[14]，采用0、200、400、800 μmol/L芍藥苷作用HS成纖維細(xì)胞24、48、72 h，MTT結(jié)果表明200、400、800 μmol/L芍藥苷能顯著降低細(xì)胞活力，并呈時(shí)間及劑量依賴關(guān)系。接著Hoechst染色法進(jìn)一步證實(shí)200、400、800 μmol/L芍藥苷能使HS細(xì)胞核發(fā)白，皺染，說(shuō)明細(xì)胞凋亡顯著。然后利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)芍藥苷對(duì)HS細(xì)胞周期的影響，結(jié)果表明200、400、800 μmol/L芍藥苷能使細(xì)胞周期阻滯于G1期，從而說(shuō)明芍藥苷能使細(xì)胞復(fù)制阻斷于DNA復(fù)制前期，繼而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，最終抑制細(xì)胞凋亡。

細(xì)胞外基質(zhì)的膠原不斷合成及沉積是HS形成的重要原因之一，是源自于細(xì)胞外細(xì)胞降解酶的分泌不足所致的[2, 3]。細(xì)胞外基質(zhì)主要成分是Ⅰ型膠原(ColⅠ)和Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)，這些膠原在HS形成過(guò)程不斷合成并沉積加劇病情[11]。而MMPs是降解細(xì)胞外基質(zhì)最為重要的蛋白水解酶，MMP1及MMP13是能夠降解包括ColⅠ及Col Ⅲ在內(nèi)幾乎所有纖維類膠原的間質(zhì)膠原酶。且通過(guò)抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路能顯著的下調(diào)MMP1及MMP13蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制ColⅠ及Col Ⅲ合成，最終減輕小鼠心肌纖維化[9, 15]。所以本研究繼續(xù)利用Western blot及ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)芍藥苷對(duì)HS成纖維細(xì)胞中MMP1，MMP13表達(dá)及ColⅠ、Col Ⅲ含量。結(jié)果表明芍藥苷能顯著的下調(diào)MMP1及MMP13蛋白表達(dá)，減少ColⅠ及Col Ⅲ的合成，最終抑制膠原的沉積。最后本研究探討芍藥苷對(duì)TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明芍藥苷能顯著的下調(diào)TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3表達(dá)。

綜上所述，200、400、800 μmol/L的芍藥苷能顯著的降低HS成纖維細(xì)胞活力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞周期阻滯于G1期，同時(shí)下調(diào)MMP1及MMP13蛋表達(dá)，減少ColⅠ及Col Ⅲ的合成，此過(guò)程與芍藥苷抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路有關(guān)。

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Inhibitoryeffectandmechanismofpaeoniflorinonproliferationofhypertrophicscarfibroblasts

WANG Lei， Ma Yuan-yuan， Li Ya-ling， Zhou Yue-min

(Department of Orthopedic Surgery, Huaihe Hospital Affiliated to Henan University, Kaifeng 475001, China)

ObjectiveTo explore the inhibitory effect and related mechanism of paeoniflorin on proliferation of hypertrophic scar (HS) fibroblasts.MethodsHS fibroblasts were cultured with 0 (control), 200, 400, 800 μmol/L of paeoniflorin for 24, 48, and 72 h. Cell viability was detected by MTT assay. Cell apoptosis was detected using Hoechst staining. Cell cycle was measured by flow cytometry. The levels of type I collagen (COL I) and type III collagen (COL III) were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The expressions of transforming growth factor-β (TGF-β)/Smad signaling pathway related proteins, as well as matrix metalloproteinase 1 (MMP1) and MMP13 were detected by Western blot.Results200, 400, 800 μmol/L of paeoniflorin reduced the cell viability of HS fibroblasts significantly (P< 0.01), with the nuclei turning pale and shrunken, and caused cell cycle arrest at G1 phase (P< 0.01). Moreover, the levels of COL I and COL III in the cells were decreased significantly (P< 0.01), and the expressions of MMP1, MMP13, TGF-β1, p-Smad2 and p-Smad3 were down-regulated significantly (P< 0.01).ConclusionsPaeoniflorin can obviously inhibit the proliferation and collagen synthesis of hypertrophic scar fibroblasts, probably through inhibition of the TGF-β1/Smad signaling pathway.

Paeoniflorin; Hypertrophic scar, HS; Fibroblasts; Proliferation; Collagen synthesis

河南省省部共建課題項(xiàng)目：自體細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)合型人工真皮的構(gòu)建及臨床應(yīng)用研究(編號(hào)：201401014)。

王雷(1982 -)，男，本科，研究方向：瘢痕的預(yù)防及治療。E-mail: 54206653@qq.com

R-33

A

1671-7856(2017) 11-0038-06

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.11.008

2017-05-26