申識川,王冠杰

(1.濮陽市檢驗(yàn)檢疫服務(wù)中心,河南 濮陽 457000;2.濮陽市農(nóng)牧局)

一例副豬嗜血桿菌的分離培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)

申識川1,王冠杰2

(1.濮陽市檢驗(yàn)檢疫服務(wù)中心,河南 濮陽 457000;2.濮陽市農(nóng)牧局)

副豬嗜血桿菌(HPS)是革蘭氏陰性細(xì)小桿菌,屬于巴斯德桿菌科嗜血桿菌屬,主要危害保育豬群,引發(fā)以腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性漿膜炎等為主要特征的傳染病,豬群一旦發(fā)病,病死率較高,給養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失.試驗(yàn)從疑似發(fā)生副豬嗜血桿菌病的河南濮陽某豬場無菌采集病料,并進(jìn)行觸片鏡檢、分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn).結(jié)果表明,試驗(yàn)成功分離到了副豬嗜血桿菌,分離菌株對氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、頭孢菌素、丁胺卡那霉素、頭孢噻肟高敏,對紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素、土霉素低敏.根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果,對發(fā)病豬群進(jìn)行治療,取得了良好的治療效果.

副豬嗜血桿菌;分離培養(yǎng);藥敏試驗(yàn);豬

副豬嗜血桿菌是一種多形態(tài)、非溶血性、不運(yùn)動、NAD依賴型、革蘭氏陰性細(xì)小桿菌,屬于巴斯德桿菌科嗜血桿菌屬.副豬嗜血桿菌只感染豬,有很強(qiáng)的宿主特異性,可以影響2周齡到4月齡的青年豬,主要在斷奶后保育舍階段發(fā)病,感染高峰通常見于保育期的4～6w,發(fā)病率一般在10%～15%,嚴(yán)重時病死率可達(dá)50%[1].該菌在特定的條件下,可以侵入豬機(jī)體,引發(fā)一種以腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性漿膜炎等為主要特征的傳染病,又稱為豬革拉斯氏病[2],主要臨床癥狀表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行和被毛粗亂;主要剖檢病變表現(xiàn)為纖維素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎等.目前,根據(jù)免疫擴(kuò)散試驗(yàn),確定該菌有15個血清型,全國各地流行的血清型不完全相同.由于副豬嗜血桿菌血清型多、產(chǎn)生耐藥性快,致使臨床疫苗免疫和用藥效果不理想,給該病的預(yù)防和治療帶來很大的困難[3].相對于傳統(tǒng)用藥,分離鑒定該菌并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)分析是比較有效的治療方法.

2016年4月11日,濮陽地區(qū)某中小規(guī)模豬場出現(xiàn)25頭47日齡的病豬,根據(jù)患病豬流行病學(xué)調(diào)查情況、臨床癥狀和剖檢變化,疑似副豬嗜血桿菌病.通過無菌采集病豬典型病變組織病料進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、鏡檢和生化鑒定等實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù),最終確認(rèn)分離到的細(xì)菌為副豬嗜血桿菌,確診該豬場所患豬病為副豬嗜血桿菌病.對分離到的細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行治療,取得了良好的治療效果,現(xiàn)將結(jié)果報告如下.

1 材料

1.1 病料

在無菌操作條件下取疑似病豬的肺臟、胸膜、胸腹腔積水、心包積液、心血、關(guān)節(jié)液.

1.2 培養(yǎng)基

胰蛋白大豆瓊脂(TSA)、胰蛋白大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基.

1.3 試劑

新生牛血清、輔酶I(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸,NAD).

1.4 細(xì)菌染色液

革蘭氏染色液.

1.5 生化試驗(yàn)試劑

氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯膠糖等.

1.6 藥敏紙片

氟苯尼考、泰妙菌素、頭孢菌素、丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素、頭孢噻肟、紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素、土霉素.

2 方法及結(jié)果

2.1 病理變化

剖檢病死豬,發(fā)現(xiàn)胸腔內(nèi)有大量淡紅色液體、纖維性滲出物.肺臟呈纖維素性胸膜肺炎,肺腫大暗紫紅色,表面覆有纖維素性滲出物.支氣管內(nèi)有淡紅色泡沫樣滲出物.心包積液.腹腔內(nèi)有大量透明黃褐色滲出液,有的呈膠胨狀凝塊.全身淋巴結(jié)腫大,暗紅色.關(guān)節(jié)腫大,有漿液纖維素性化膿性炎癥.

2.2 觸片鏡檢

取發(fā)病豬的肺組織、心血、胸水和腹膜面涂片,革蘭氏染色,鏡檢可見革蘭氏陰性的細(xì)小桿菌.

2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌取發(fā)病豬的肺臟、腹膜、胸水和心血劃線接種于含NAD+和5%小牛血清的TSA平板,置37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48h[4],出現(xiàn)無色、透明、濕潤、光滑、邊緣整齊的針頭大小菌落,鏡檢可見大小不一、形態(tài)有細(xì)長、絲狀的革蘭氏陰性桿菌.接種無NAD的TSA不生長.而后挑取單個菌落,接種到含有NAD的TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行純培養(yǎng).

2.4 生化試驗(yàn)

挑取純化菌落接種于氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯膠糖等生化鑒定管中,同時加入0.01%的NAD5μl,置于37℃5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果如下表:

表 生化試驗(yàn)結(jié)果

菌符合副豬嗜血桿菌的生化特性.

2.5 藥敏試驗(yàn)

吸取200μl細(xì)菌TSB純培養(yǎng)物均勻涂布于TSA平板上,進(jìn)行藥敏試驗(yàn),置37℃5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,測量抑菌環(huán)直徑并判定結(jié)果.該菌對氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、頭孢菌素、丁胺卡那霉素、頭孢噻肟高敏,對紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、鏈霉素、土霉素低敏.

3 防治

加強(qiáng)日常管理,將發(fā)病豬與健康豬隔離飼養(yǎng);對發(fā)病豬舍進(jìn)行全面消毒,每天早晚各1次,連續(xù)5d;在飲水中添加電解多維減少豬群應(yīng)激;根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果,對發(fā)病豬只用氟苯尼考注射液肌注2mg/kg,1d1次,連續(xù)注射5d.

4 結(jié)論與討論

根據(jù)發(fā)病豬只的流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化,初步懷疑該病是由副豬嗜血桿菌引起的.通過對采集病料進(jìn)行顯微鏡鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)檢測,結(jié)果顯示和副豬嗜血桿菌的生理生化特性相符合,最終判定分離到的細(xì)菌為副豬嗜血桿菌,即確定該場豬群所發(fā)病為副豬嗜血桿菌病.

隨著規(guī)模化、集約化養(yǎng)豬的發(fā)展,副豬嗜血桿菌病在我國各大豬場的帶菌率、發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢,給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5].在實(shí)際生產(chǎn)中常用大量抗菌藥來治療細(xì)菌性疾病,誤用、濫用抗菌藥對細(xì)菌產(chǎn)生較強(qiáng)的藥物選擇壓力,從而使得細(xì)菌耐藥情況愈加突出[5].因此,建議在實(shí)際生產(chǎn)中,采用細(xì)菌體外分離培養(yǎng)與鑒定確診病原后,結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果有針對性地用藥,可以取得較好的治療效果,同時要避免長期使用一種抗菌藥物.

[1]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006:23-24.

[2]蔡旭旺.副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2006:6.

[3]高豐,羅毅,成軍,等.副豬嗜血桿菌感染的診斷與防治[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2002,23(6):101-103.

[4]張悅,李蓓蓓,魏建超,等.上海副豬嗜血桿菌分離鑒定及其耐藥性分析[J].中國動物傳染病學(xué)報,2015,23(4):25-30.

[5]李志勇.海南省規(guī)?；i場副豬嗜血桿菌病的分子流行病學(xué)調(diào)查和綜合防治措施[D].廣西大學(xué),2010:5.

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2017-06-20)