毛翔光，朱新培，趙家才，楊彩云，高玉瓊，何永富，李 雯，張 潔

（云南省種畜繁育推廣中心，昆明 650212）

電刺激采精器在大額牛種質(zhì)資源保護上的應用研究

毛翔光，朱新培，趙家才，楊彩云，高玉瓊，何永富，李 雯，張 潔

（云南省種畜繁育推廣中心，昆明 650212）

大額牛為我國地方畜禽遺傳資源瀕危品種，目前仍處于半野生狀態(tài)。為了進行大額牛種質(zhì)資源保護，針對大額牛調(diào)教假陰道采精較為困難，對電刺激采精和假陰道采精的效果進行了比較研究。結(jié)果表明：電刺激法的采精量5.34 mL±2.36 mL，原精活力（56.25±14.20）%，精子密度 7.33億/mL±3.48億/mL，解凍活力（35.95±1.04）%，采精成功率97.30%，可利用率64.44%；假陰道法的采精量4.38 mL±1.65 mL，原精活力（55.41±9.78）%，精子密度 14.07億/mL±5.06億/mL，解凍活力（36.10±2.29）%，采精成功率88.00%，可利用率78.79%。說明電刺激法的采精成功率高，可有效地應用于大額牛種質(zhì)資源的保護工作中。

大額牛；電刺激采精器；精液；遺傳資源

大額牛（Bos frontalis），又名獨龍牛，作為我國半野生半家養(yǎng)的珍稀瀕危物種之一，已被列入國家級畜禽遺傳資源保護名錄。在世界范圍內(nèi)，大額牛主要分布于印度、孟加拉和緬甸，不丹、尼泊爾以及馬來半島上的柬埔寨、泰國、老撾和越南等地亦有少量分布。目前，我國境內(nèi)的大額牛零星分布于西藏門隅、珞渝地區(qū)，云南省較為集中地分布于西部的高黎貢山的獨龍江和怒江流域（位于貢山縣西北部的高黎貢山與擔當力卡山之間，與緬甸接壤，面積為 1 994 km2，海拔 1 170～4 964 m）［1］。是世界上現(xiàn)存的7個牛種之一，不但具有耐粗飼、抗逆性強，產(chǎn)肉性能和肉質(zhì)好等優(yōu)良特性，還具有很高的遺傳資源價值與經(jīng)濟利用價值。

1 大額牛精液的采集

1.1 大額牛的來源

大額牛從其原產(chǎn)地云南省怒江州貢山縣遷地保護區(qū)依法引進到云南省種畜繁育推廣中心冷凍精液站，飼養(yǎng)方式為人工舍飼，日糧為全混合飼料，夏秋補飼適量青飼料，供給清潔飲水，定期免疫和檢疫。經(jīng)過簡單馴化調(diào)教后，用電刺激法和假陰道法采集大額牛精液進行冷凍精液制作。

1.2 大額牛的電刺激法采精

按趙家才等［2］的電刺激方法進行采精。把采精的大額牛由飼養(yǎng)員牽引到保定架內(nèi)妥善保定，確保人、畜安全。采精前用0.05%～0.10%的高錳酸鉀溶液清洗大額牛包皮和外陰部，采精員和精液收集員站在大額牛的左、右兩側(cè)并由另一助理將電刺激采精器電極探頭插入采精公牛直腸，然后打開電源輸出按鈕，使用自動或手動脈沖刺激大額牛副性腺，使其充分分泌和陰莖勃起，待大額牛副性腺分泌和陰莖勃起充分后開始排精時收集其精液。

1.3 大額牛的精液品質(zhì)測定指標

大額牛精液采集后，依據(jù)GB4143—2008分別測定其采精量、精子密度、精子活力和畸形率。精子畸形率用姬姆薩染色法染色后鏡檢，合格的鮮精用于制作冷凍精液。

1.4 數(shù)據(jù)來源和處理

大額牛精液質(zhì)量測定數(shù)據(jù)來源于2011—2016年的采精記錄，利用SPSS 18.0軟件對采精數(shù)據(jù)進行分析，差異顯著性采用t檢驗。結(jié)果采用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 電刺激法和假陰道法采集精液質(zhì)量比較

先用電刺激法采精，經(jīng)過誘導調(diào)教，再用假陰道法采精。結(jié)果表明：采用電刺激法的采精量為5.34 mL±2.36 mL（n=116），原精活力（56.25±14.20）%（n=116），精子密度 7.33億/mL±3.48億/mL（n=116），解凍活力（35.95±1.04）%（n=74），采精成功率 97.30%（180/185）；假陰道法采集精量為4.38 mL±1.65 mL（n=66），原精活力（55.41±9.78）%（n=66），精子密度 14.07億/mL±5.06億/mL（n=66），解凍活力（36.10±2.29）%（n=52），采精成功率88.00%（66/75）。其中電刺激法采集的精液量顯著高于假陰道法（P＜0.05），而精子密度極顯著低于假陰道法（P＜0.01）。

2.2 大額牛第1次采精和第2次采精精液質(zhì)量比較

大額牛第1次電刺激采精后，間隔40 min，再進行第2次電刺激采精，第2次電刺激采精效果好于第1次，原精活力和密度極顯著提高（P＜0.01）。詳見表1。

2.3 大額牛與云嶺牛、西門塔爾牛電刺激法采集精液質(zhì)量比較

由表2可知，大額牛電刺激法采精量和原精活力均極顯著低于西門塔爾牛，而西門塔爾牛電刺激法采精量雖最高，但精子密度最低。

表1 大額牛第1次和第2次采集精液質(zhì)量比較

表2 大額牛與云嶺牛、西門塔爾牛電刺激采集精液品質(zhì)比較

3 討論

3.1 大額牛遺傳資源保護的必要性

馬月輝等［3］用群體生存力方法模擬分析了大額牛的生存過程和系統(tǒng)壓力，結(jié)果表明，大額牛目前的生存狀況很危險，按現(xiàn)在的生存狀況，群體平均滅絕時間只有52～78年。特別是隨著當?shù)厣鐣?jīng)濟的發(fā)展，大額牛生活的自然環(huán)境在迅速縮小，這無疑更加重了其生存壓力。大額牛遺傳物質(zhì)的保護尤為重要，通過制作凍精可促進大額牛遺傳資源的開發(fā)利用，通過利用又可促進保護。

3.2 大額牛電刺激采精效果

由于大額牛野性較強，目前仍處于半野生狀態(tài)，假陰道法采精公牛調(diào)教難度大［4］，用電刺激法采精，采精成功率高，利于收集精液，是一種行之有效的采精方法。

與假陰道采精相比，電刺激采集的精液量、原精活力、解凍活力都無顯著性差異（P＞0.05），并且冷凍后的精液品質(zhì)達到國家相關(guān)標準。二者之間精子密度存在極顯著差異，這一問題仍待進一步研究。

［1］云南省畜牧局，云南省家畜家禽品種志編寫委員會.云南省家畜家禽品種志［M］.昆明：云南科技出版社，1987：84-87.

［2］趙家才，劉國璋.三種采精方法在種公牛上的應用效果分析［J］.黃牛雜志，2001，27（1）：48-50.

［3］馬月輝，吳常信.群體生存力分析在大額牛保種中的應用研究［J］.畜牧獸醫(yī)學報，2002，33（2）：127-131．

［4］和協(xié)超，沈放，季維智，等.電刺激采集大額牛精液及其低溫冷凍的初步研究［J］.獸類學報，2000，20（3）：239-240.

S823.3

A

2095-3887（2017）06-0073-02

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.06.021

2017-08-03

農(nóng)業(yè)部畜禽種質(zhì)資源保護項目（2010年度2130135農(nóng)業(yè)資源保護）

毛翔光（1974-），男，高級獸醫(yī)師，主要從事家畜遺傳育種及疾病防治。