楊 帆,鄧保國(guó),魏紀(jì)東,趙永新,李 敏

醫(yī)源與動(dòng)物源肺炎克雷伯菌耐藥性和分子特性研究

楊 帆1,鄧保國(guó)1,魏紀(jì)東1,趙永新2,李 敏1

目的了解不同宿主來(lái)源的肺炎克雷伯菌耐藥性和分子特點(diǎn)，探討其在人與動(dòng)物間傳播的可能性。方法收集2013年3月至2014年12月肺炎克雷伯菌98株(包含動(dòng)物源67株、醫(yī)源31株)，通過(guò)K-B紙片擴(kuò)散法和肉湯稀釋法測(cè)定對(duì)15種抗菌藥物的敏感性；拉絲試驗(yàn)測(cè)定產(chǎn)粘液表型；PCR擴(kuò)增2個(gè)毒力基因和7個(gè)耐藥基因；多位點(diǎn)序列(MLST)分析分子型。結(jié)果醫(yī)源菌株耐藥率顯著高于動(dòng)物源菌株，在動(dòng)物源菌株中，雞源和豬源菌株耐藥率高于兔源和犬源菌株；除犬源菌株外均表現(xiàn)多重耐藥，醫(yī)源菌株多重耐藥率最高(74.19%)。98株肺炎克雷伯菌有18個(gè)ST型，雞源菌株主要流行ST37、豬源菌株為ST258、兔源菌株為ST60、犬源菌株為ST11，醫(yī)源菌株為ST11。ST11為醫(yī)源、犬源、豬源菌株共有，ST235為醫(yī)源和雞源菌株共有，ST258為醫(yī)源和豬源菌株共有。高粘液菌株主要為ST11、ST235、ST258，且在這些分子型中檢測(cè)到rmpA、magA基因。醫(yī)源菌株blaKPC的檢出率最高(54.84%)，犬源和兔源菌株未檢出BlaKPC基因。超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因在醫(yī)源菌株中檢出率高于動(dòng)物源菌株，qnrA和qnrB基因在雞源菌株中檢出率高于醫(yī)源菌株。ST11、ST258、ST235攜帶的多種耐藥基因最高。結(jié)論不同宿主來(lái)源的肺炎克雷伯菌耐藥表型、粘液表型及分子特性不同，但ST11、ST235、ST258為人源和動(dòng)物源肺炎克雷伯菌共有的分子型。

肺炎克雷伯菌；耐藥性；MLST；醫(yī)源；動(dòng)物源

肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae,KP) 是引起醫(yī)院和社區(qū)感染的重要條件致病菌，全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)和全國(guó)醫(yī)院感染監(jiān)控網(wǎng)報(bào)道，臨床上肺炎克雷伯菌的分離率居第2位[1]。同時(shí)肺炎克雷伯菌也是動(dòng)物的一種條件致病菌，可引起一些動(dòng)物的多種感染[2]。隨著抗菌藥物在臨床和動(dòng)物生產(chǎn)中的廣泛應(yīng)用，肺炎克雷伯菌已對(duì)多種抗生素產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥性，特別是一些泛耐藥菌株[3-4]、多重耐藥菌株[5-6]的出現(xiàn)，給防控該菌引起的疾病帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)。在對(duì)其它細(xì)菌的一些研究中報(bào)道，細(xì)菌的耐藥性可在人和動(dòng)物間傳播[7]。為了解肺炎克雷伯菌在人和動(dòng)物中的流行趨勢(shì)，探討其在人與動(dòng)物間傳播的可能性。本研究收集本地區(qū)不同宿主來(lái)源肺炎克雷伯菌，進(jìn)行了如下研究。

1 材料與方法

1.1菌株來(lái)源 收集2013年3月至2014年12月河南省新鄉(xiāng)地區(qū)多家動(dòng)物醫(yī)院及規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)分離的肺炎克雷伯菌67株，其中豬源28株、雞源22株、兔源12株和犬源5株；同期收集新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科分離的醫(yī)源肺炎克雷伯菌31株。所有的菌株經(jīng)過(guò)形態(tài)染色、生化試驗(yàn)初步鑒定后，采用Vitek-AMS 60(法國(guó)梅里埃生物公司)全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定后進(jìn)入后續(xù)試驗(yàn)。質(zhì)控菌株分別為：E.coliATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、肺炎克雷伯菌ATCC27853購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。

1.2粘液表型檢測(cè) 將肺炎克雷伯菌轉(zhuǎn)接至哥倫比亞血平板上37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜，用接種環(huán)蘸取菌落，將接種環(huán)向上提起，若形成的黏絲長(zhǎng)度大于0.5 cm則判定為陽(yáng)性，反之則陰性。拉絲試驗(yàn)陽(yáng)性的菌株為高粘液表型菌株。

1.3ESBLs菌株表型檢測(cè) 采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI 2013)推薦的雙紙片協(xié)同法檢測(cè)產(chǎn)ESBLs菌株，即在M-H藥敏瓊脂平板上貼上含克拉維酸及不含克拉維酸的頭孢他啶及頭孢噻肟紙片，任何一種加克拉維酸紙片比其不加克拉維酸紙片抑菌圈直徑大于5 mm，則判讀為產(chǎn)ESBLs菌株，反之為非產(chǎn)ESBLs菌株。

1.4藥物敏感性試驗(yàn) 按照CLSI推薦的K-B紙片擴(kuò)散法和肉湯稀釋法測(cè)定受試菌株對(duì)15種常用抗菌藥物的敏感性，藥物包括阿米卡星、氨芐西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢他啶、頭孢氨芐、卡那霉素、復(fù)方新諾明、克林霉素、阿奇霉素、紅霉素、環(huán)丙沙星、加替沙星、四環(huán)素、亞胺培南、美羅培南，藥物均購(gòu)自O(shè)xoid公司。藥敏結(jié)果根據(jù)CLSI 2013年版的標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。在藥敏試驗(yàn)結(jié)果中，對(duì)3種及3種以上藥物產(chǎn)生耐藥的菌株即可認(rèn)為是多重耐藥菌。

1.5耐藥基因和毒力基因的檢測(cè) 按照試劑盒說(shuō)明提取上述菌株的基因組DNA，以此為PCR模板擴(kuò)增耐藥基因和毒力基因。耐藥基因包括blaKPC、blaNDM、blaCTX-M、blaTEM、blaSHV，qnrA和qnrB，毒力基因包括magA和rmpA。耐藥基因和毒力基因的引物序列參照文獻(xiàn)[8-10]合成。陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果上傳GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析。

1.6多位點(diǎn)序列分型(MLST) 根據(jù)Diancourt等[11]2005年提出的肺炎克雷伯菌MLST方案，用PCR擴(kuò)增基因組上的7個(gè)管家基因：rpoB、gapA、mdh、pgi、phoE、infB與tonB。將PCR擴(kuò)增的陽(yáng)性產(chǎn)物經(jīng)純化后送生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果上傳到網(wǎng)站進(jìn)行比對(duì)(http://bigsdb.web.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html)，確定菌株的序列基因型即MLST類型。

2 結(jié) 果

2.1抗菌藥物敏感性試驗(yàn) 98株不同來(lái)源的肺炎克雷伯菌對(duì)15種常用抗生素的耐藥性見(jiàn)表1?？偟膩?lái)看，這些細(xì)菌對(duì)15種抗菌藥物的耐藥率為12.24%～66.33%，但來(lái)源不同的菌株對(duì)抗生素耐藥性存在明顯差異。醫(yī)源菌株的耐藥率顯著高于動(dòng)物源菌株；在動(dòng)物源菌株中，雞源與豬源菌株的耐藥率明顯高于兔源和犬源菌株。醫(yī)源菌株對(duì)15種抗生素的耐藥率較高，除亞胺培南、美羅培南和磺胺甲氧芐啶外，對(duì)其它抗生素的耐藥率均大于50%。豬源菌株耐藥率大于50%的藥物有頭孢氨芐、氨芐西林、紅霉素、環(huán)丙沙星。雞源菌株耐藥率大于50%的藥物有阿米卡星、氨芐西林、紅霉素、阿莫西林-克拉維酸、四環(huán)素、環(huán)丙沙星和頭孢氨芐；兔源菌株對(duì)紅霉素耐藥率最高(83.33%)，其次為四環(huán)素(66.67%)、頭孢氨芐和氨芐西林(均為50%)。犬源菌株對(duì)大部分抗生素敏感，僅檢出2株對(duì)環(huán)丙沙星耐藥。大部分動(dòng)物源菌株對(duì)碳青酶烯類(亞胺培南、美羅培南)敏感，僅豬源菌株、雞源菌株有耐碳青酶烯類菌株出現(xiàn)，而醫(yī)源菌株對(duì)亞胺培南、美羅培南的耐藥率分別達(dá)到38.71%和32.26%。從表1可見(jiàn)，除犬源菌株外，其余菌株均表現(xiàn)出多重耐藥，多重耐藥率從高到底順序?yàn)獒t(yī)源菌株(74.19%)、雞源菌株(59.09%)、豬源菌株(39.29%)和兔源菌株(25%)。

表1 不同來(lái)源的肺炎克雷伯菌對(duì)15種抗生素的耐藥率
Tab.1 Distribution of resistance to 15 antibiotics of KP isolated from different hosts

抗菌藥物Antibiotic不同來(lái)源菌株耐藥率/株的分布(%)ResistancestrainsofKPisolatedfromdifferenthostshuman(n=31)pig(n=28)chicken(n=22)rabbit(n=12)dog(n=5)total(n=98)Ampicillin77．41(24)64．29(18)72．73(16)50(6)20(1)66．33(65)Amoxicillin?clavulanicacid67．74(21)42．86(12)68．18(15)25(3)052．04(51)Ceftazidime51．61(16)39．29(11)40．91(9)16．67(2)038．78(38)Cephalexin51．61(16)71．43(20)59．09(13)50(6)20(1)57．14(56)Amikacin61．29(19)46．43(13)77．27(17)25(3)20(1)54．08(53)Kanamycin70．97(22)39．29(11)45．45(10)16．67(2)20(1)46．94(46)Trimethoprim?sulfamethoxazole45．16(14)32．14(9)27．27(6)33．33(4)033．67(33)Clindamycin61．29(19)28．57(8)31．82(7)16．67(2)036．73(36)Azithromycin58．06(18)25(7)38．64(8)0033．67(33)Erythromycin54．84(17)57．14(16)72．73(16)33．33(4)20(1)55．10(54)Ciprofloxacin80．65(25)50(14)59．09(13)83．33(10)40(2)65．31(64)Gatifloxacin61．29(19)7．14(2)13．64(3)16．67(2)026．53(26)Tetracycline54．84(17)42．86(12)63．64(14)66．67(8)20(1)53．06(52)Imipenem38．71(12)7．14(2)4．55(1)0015．31(15)Meropenem32．26(10)3．57(1)4．55(1)0012．24(12)Multi?drugresistantstrains74．19(23)39．29(11)59．09(13)25(3)051．02(50)

2.2肺炎克雷伯菌粘液表型及毒力基因 粘液表型試驗(yàn)結(jié)果顯示醫(yī)源菌株有15株陽(yáng)性，占48.39%；豬源菌株陽(yáng)性有5株，占17.86%；雞源菌株陽(yáng)性有3株，占13.64%；兔源和犬源菌株均為陰性。毒力基因magA和rmpA檢測(cè)結(jié)果表明，98株不同來(lái)源肺炎克雷伯菌中攜帶magA基因有24株、rmpA基因有35株，其中醫(yī)源菌株檢出率最高，分別占38.71%(12/31)和61.29%(19/31)；犬源菌株檢出率最低，各檢出1株攜帶這兩種毒力基因，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3ESBLs菌株表型試驗(yàn)與耐藥基因 產(chǎn)ESBLs試驗(yàn)結(jié)果顯示，98株肺炎克雷伯菌中有57株陽(yáng)性，其中醫(yī)源菌株為22株，占38.60%；其次為雞源菌株有16株，占28.07%；豬源菌株有15株，占26.32%；犬源和兔源分離株各有2株，占3.51%，結(jié)果見(jiàn)表2。耐藥基因碳?xì)涿赶┟?blaKPC、blaNDM)、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(blaCTX-M、blaTEM、blaSHV)和喹諾酮耐藥基因(qnrA、qnrB)的PCR擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知醫(yī)源菌株blaKPC的檢出率最高，占54.84%，犬源菌株和兔源菌株未檢出blaKPC基因。blaNDM基因僅在醫(yī)源菌株中檢出2株。98株肺炎克雷伯菌中，超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因的檢出率分別為blaCTX-M23.47%，blaTEM29.59%、blaSHV15.31%，各耐藥基因在不同菌株中檢出率的分布見(jiàn)表2。qnrA基因的檢出率在雞源菌株中最高為72.73%(16/22)，其次為豬源菌株39.29%(11/28)、醫(yī)源菌株22.58%(7/31)。qnrB基因在豬源菌株檢出率最高為50%(14/28)，犬源菌株中未檢測(cè)到qnrB基因。

2.4MLST分型 98株不同宿主來(lái)源的肺炎克雷伯菌歸為18個(gè)ST型。其中豬源菌株有6個(gè)ST型，雞源菌株有5個(gè)ST型、醫(yī)源菌株和兔源菌株各有4個(gè)ST型、犬源菌株有3個(gè)ST型(表2)。由表2可見(jiàn)，ST11為醫(yī)源、犬源、豬源菌株共有的序列型，ST235為醫(yī)源和雞源菌株共有，ST258為醫(yī)源和豬源菌株共有。來(lái)源不同的菌株ST型流行趨勢(shì)也不同，總的來(lái)看，肺炎克雷伯菌在雞源菌株中主要流行為ST37(40.9%)、豬源菌株為ST258(35.7%)、兔源菌株為ST60(50%)、犬源菌株為ST11(60%)，醫(yī)源為ST11(67.74%)。

2.5分子型與耐藥基因、毒力基因的相關(guān)性 粘液表型結(jié)合分子型分析發(fā)現(xiàn)，高粘液菌株主要為ST11、ST235、ST258，分別占52.17%、17.39%和17.39%。對(duì)毒力基因分析發(fā)現(xiàn)rmpA基因在ST11、ST235、ST258 3種分子型中共檢出25株，占71.43%，magA基因檢出17株，占70.83%。由此可見(jiàn)，攜帶的毒力基因rmpA、magA和粘液表型與細(xì)菌的分子分型有一定的相關(guān)性。

耐藥基因分析發(fā)現(xiàn)有22株肺炎克雷伯菌檢出blaKPC基因，分布在5個(gè)ST型中，其中ST11最多，占54.55%(12/22)。blaCTX-M、blaSHV、blaTEM基因分別分布在7個(gè)、6個(gè)、8個(gè)ST型中，而qnrB、qnrA基因各自分布在不同的10個(gè)ST型中(見(jiàn)表2)。同時(shí)檢出2個(gè)及2個(gè)以上耐藥基因的ST型有ST11、ST258、ST235、ST37、ST23、ST106、ST60、ST1863、ST270，結(jié)合耐藥表型發(fā)現(xiàn)，多重耐藥菌株大多屬于這些ST型。ST11和ST258型是檢出攜帶耐藥基因最多的，但發(fā)現(xiàn)不同來(lái)源的菌株其攜帶的基因也不同，醫(yī)源ST11、ST258菌株攜帶blaCTX-M、blaTEM基因高，而豬源菌株ST11、ST258攜帶qnrA、qnrB高。

表2 不同來(lái)源肺炎克雷伯菌MLST分型、耐藥基因、毒力基因分布
Tab.2 Virulence gene and resistent gene and MLST types of KP isolated from different hosts

菌株來(lái)源strainsoriginST型STtype菌株數(shù)numberofstrains拉絲試驗(yàn)(+)stringingtestESBLs表型試驗(yàn)(+)ESBLstypestest耐藥基因分布distributionofresistantgene毒力基因分布distributionofvirulencegeneblaKPCblaNDMblaCTX?MblaTEMblaSHVqnrAqnrBmagArmpAHuman(31)ST232----1-1121-ST235a2222--11-112ST11b2110161111071064713ST258c6344112--334Chicken(22)ST235a3231-12-3112ST379161-16-7511ST20194-4---1-4-2ST20215-21--1-2211ST7261-1----1-1--Pig(28)ST11b6241-11-2423ST258c10181-42-4221ST2703-----2--21-ST106523--13-3412ST18633-------22--ST2631------1--1-Rabbit(12)ST174----------ST1481---------1-ST606-1--3-121-2ST1681-1--------1Dog(5)ST11b3-1---1---1-ST651-1-----1--1ST741-----------合計(jì)18?98235722223291537342435

注：相同字母表示同一ST型，“*”ST型的總數(shù)，“-”為陰性

Notes: the same letter showed the uniform ST type; “*” is the numbers of ST types; “-” is not detected

3 討 論

本研究對(duì)98株不同來(lái)源的肺炎克雷伯菌的藥敏試驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，醫(yī)源菌株的耐藥率高于動(dòng)物源菌株，同時(shí)在動(dòng)物源菌株中，雞源與豬源菌株的耐藥率明顯高于兔源和犬源的菌株，這主要是細(xì)菌所處的環(huán)境壓力所導(dǎo)致的。在醫(yī)院臨床上，常常聯(lián)合使用多種抗生素治療各種感染，導(dǎo)致細(xì)菌抗生素選擇壓力增加，產(chǎn)生耐藥性。在動(dòng)物源菌株中，由于在養(yǎng)雞和養(yǎng)豬生產(chǎn)過(guò)程常使用抗生素來(lái)促生長(zhǎng)和預(yù)防疾病，而兔和犬接觸抗生素的幾率相對(duì)較少，所以兔源、犬源菌株的耐藥率較低。在抗生素的使用上，一些新合成的、價(jià)格昂貴的藥物，很少在動(dòng)物中使用，故對(duì)其產(chǎn)生的耐藥性較低，如加替沙星、亞胺培南、美羅培南等藥物在動(dòng)物中很少使用，本研究發(fā)現(xiàn)醫(yī)源菌株對(duì)這些的耐藥率要顯著高于動(dòng)物源菌株。為進(jìn)一步減少耐藥性，需要生產(chǎn)中減少抗生素的使用、臨床上合理使用抗生素，同時(shí)開(kāi)發(fā)一些新型藥物或抗生素的替代品來(lái)防控該菌。

高粘液性的肺炎克雷伯菌被認(rèn)為是高毒力菌株，這些菌株往往攜帶magA、rmpA毒力基因[12]。在本研究中發(fā)現(xiàn)粘液表型陽(yáng)性的菌株有23株，而攜帶有magA、rmpA毒力基因分別有24株、35株，盡管大部分高粘液菌株均同時(shí)攜帶這兩種基因，但有一些菌株只攜帶其中之一，而攜帶有magA、rmpA毒力基因的菌株表型不一定表現(xiàn)出高粘液特征，由此可推測(cè)可能還有其它因子或機(jī)制參與了粘液表型的形成。另外本研究發(fā)現(xiàn)即使是同一類ST分子型，醫(yī)源菌株產(chǎn)生高粘液特性大于動(dòng)物源菌株，這暗示粘液特性的產(chǎn)生可能與宿主有關(guān)，這一問(wèn)題有待后續(xù)研究。一些研究表明醫(yī)院流行的高粘液菌株主要為ST23、ST65和ST86[13]，但在本研究中高粘液菌株主要為ST11、ST258和ST235，而ST23并未表現(xiàn)高粘液特性，與文獻(xiàn)報(bào)道不一致。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，本研究的ST23菌株只檢測(cè)到magA基因，未檢測(cè)到rmpA基因，可見(jiàn)rmpA基因可能是形成粘液表型的重要因素之一。

MLST分析表明，在醫(yī)源菌株中主要流行型ST11型，這與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相一致[14-15]；ST258是豬源菌株主要流行的分子型，與Jolene等(2015)[16]報(bào)道相似。本研究發(fā)現(xiàn)ST11為醫(yī)源、犬源、豬源菌株共有的分子型，ST235為醫(yī)源和雞源菌株共有，ST258為醫(yī)源和豬源菌株共有。結(jié)合表型特征、耐藥基因和毒力基因分布發(fā)現(xiàn)，這些共有的ST型表現(xiàn)出相似的高粘液、高毒力、多重耐藥的共同特點(diǎn)，揭示了分子型相同的菌株其表型特征也相似。分子型ST11、ST235、ST258為人源和動(dòng)物源菌株交叉存在分子型，表明這些分子型菌株存在人與動(dòng)物間傳播的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上，本研究在對(duì)不同來(lái)源肺炎克雷伯菌耐藥性及分子特性調(diào)查表明，一些在不同宿主間流行的菌株具有交叉的分子型和相似的表型，表明攜帶這些分子型的菌株存在人與動(dòng)物間傳播的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在醫(yī)院臨床和動(dòng)物生產(chǎn)中不僅要合理使用抗生素來(lái)防止耐藥性的產(chǎn)生，更要加強(qiáng)這些細(xì)菌分子流行病學(xué)的監(jiān)測(cè)，來(lái)減少該菌在人和動(dòng)物間傳播的風(fēng)險(xiǎn)。

[1] China Antimicrobial Resistance Surveillance System. Reports of CHINET surveillance of bacterial resistance in 2015[EB/OL](2015-12-25)[2016-12-27]. http://www.carss.cn/Sys/res/ ( in Chinese)

全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng). 2015 年全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)告.http://www.carss.cn/Sys/res/[EB/OL](2015-12-25)[2016-12-27]

[2] Lin XY, Wang Y, Yang ZX, et al. Isolation and identification ofKlebsiellapneumoniaefrom swine[J]. Chin J Prevent Vet Med, 2015, 37(5): 375-378. (in Chinese)

林星宇,王印,楊澤曉,等.豬源肺炎克雷伯菌的分離鑒定[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2015,37(5):375-378.

[3] Wang YY, Liu H, Du X, et al. The study on epidemic characteristics of an outbreak of pan-resistanceKlebsiellapnermoniae[J]. Chin J Microbiol Immunol, 2011, 31(3): 208-212. (in Chinese)

王艷艷,劉紅,杜昕,等.泛耐藥肺炎克雷伯菌株的醫(yī)院內(nèi)流行特性的研究[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 2011,31(3): 208-212.

[4] Magiorakos AP, Srinivasan A, Carey RB, et al. Multidrug-resistant, extensively drug-resistant and pandrug-resistant bacteria: an international expert proposal for interim standard definitions for acquired resistance[J]. Clinical Microbiol Infect, 2012, (18): 268-281.

[5] Lu HY, Zhang HQ, Yao XD, et al. Sequence analysis of plasmid inKlebsiellapneumoniaeKF3[J]. Chin J Microbiol Immunol, 2010, 30(10): 892-896. (in Chinese)

陸紅云,張洪勤,姚曉鼎, 等.一株多重耐藥肺炎克雷伯菌KF3的質(zhì)粒研究[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 2010, 30(10):892-896.

[6] Chen IL, Lee CH, Su LH, et al. Antibiotic consumption and healthcare-associated infections caused by multidrug-resistant Gram-negative Bacilli at a large medical center in Taiwan from 2002 to 2009: Implicating the importance of antibiotic stewardship[J]. PLoS One, 2013(8): e65621.

[7] Liu YY, Wang Y, Walsh TR, et al. Emergence of plasmid-mediated colistin resistance mechanism MCR-1 in animals and human beings in China: a microbiological and molecular biological study[J]. Lancet Infect Dis, 2016, 16(2): 161-168.

[8] Ma LC, Fang CT, Lee CZ, et al. Genomic heterogeneity inKlebsiellapneumoniaestrains is associated with primary pyogenic liver abscess and metastatic infection[J]. J Infect Dis, 2005, 192(1): 117-128.

[9] Yu WL, Ko WC, Cheng KC, et al. Association between rmpA and magA genes and clinical syndromes caused byKlebsiellapneumoniaein Taiwan[J]. Clin Infect Dis, 2006, 42(10): 1351-1358.

[10] Wu JJ, Ko WC, Tsai SH, et al. Prevalence of plasmid-mediated quinolone resistance determinants QnrA, QnrB, and QnrS among clinical isolates of Enterobacter cloacae in a Taiwanise hospital[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2007, 51(4): 1223-1227.

[11] Diancourt L, Passet V, Verhoef J, et al. Multilocus sequence typing ofKlebsiellapneumoniaenosocomial isolates[J]. J Clinical Microbiol, 2005, 43(8): 4178-4182.

[12] Luo Y, Wang Y, Ye L, et al. Molecular epidemiology and virulence factors of pyogenic liver abscess causingKlebsiellapneumoniain China[J]. Clin Microbiol infect, 2014, 20: 0818-0824.

[13] Qu TT, Zhou JC, Jiang Y, et al. Clinical and microbiological characteristics ofKlebsiellapneumonialiver abscess in East China[J]. BMC Infect Dis, 2015, 15(1): 161.

[14] Wang F, Zhu DM, Hu FP, et al. 2012 CHINET surveillance of bacterial resistance in China[J]. Chin J Infect Chemother, 2013, 13(5): 321-329. (in Chinese)

汪復(fù),朱德妹,胡付品,等. 2012年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J].中國(guó)感染與化療雜志, 2013(5):321-329.

[15] Yang M, Wang P, Xu XQ, et al. Resistance genes distribution and molecular typing characteristics of carbapenem-risistantKlebsiellapneumonia[J]. Chin J Zoonoses,2016,32(12):1039-1043.DOI:10.3969/j.issn.1002.2694.12.001 (in Chinese)

楊夢(mèng),王鵬,徐曉倩,等.碳青霉烯類抗生素耐藥肺炎克雷伯菌耐藥基因分布和分子分型[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào), 2016,32(12):1039-1043.

[16] Jolene R, Bowers L, Brandon K, et al. Genomic analysis of the emergence and rapid global dissemination of the clonal group 258Klebsiellapneumoniaepandemic[J]. PLoS One, 2015, 10(7): e0133727.

Drug-resistantandmolecularcharacteristicofKlebsiellapneumoniaeisolatedfromnosocomialandanimalorigins

YANG Fan1, DENG Bao-guo1, WEI Ji-dong1, ZHAO Yong-xin2, LI Min1

(1.DepartmentofMicrobiology,XinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453003,China；2.ThethirdHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453003,China)

We aimed to detect the drug-resistant and molecular characteristic ofKlebsiellaPneumoniae(KP) isolated from different hosts origin, and to investigate the infection possibility between animals and humans. A total of 98 KP strains were collected in Henan Province from March 2013 to December 2014. Drug-resistance to 15 antibiotics was detected by K-B diffusion methods. The phenotype of produce mucus was determined by stringing test. Seven drug-resistant gene and 2 virulence gene were amplified by PCR technique. Molecular types were analysis by MLST. The resistant rate of KP isolated from nosocomial was higher than those isolated from animals. Among animal strains, the resistant rate of KP isolated from chickens and pigs were higher than that from rabbits and dogs. The multidrug resistant (MDR) of nosocomial isolates were the highest (74.19%). There were 18 STs among 98 KP strains. The main prevalent types were ST37 in chicken, ST258 in pigs, ST60 in rabbits, ST11 in dogs and nosocomial respectively. ST11 was common epidemic types among nosocomial, dogs and pigs. ST235 was common molecular types among chicken and human. ST258 existed in both nosocomial and pigs. ThermpA gene andmagA gene were detected in ST11, ST235 and ST 258, producing higher mucus. TheblaKPCgene was 54.84% in nosocomial strains, but not been detected in dog and rabbit strains. The distribution of ESBLs gene in nosocomial was higher than those in animals, butqnrA gene andqnrB gene were higher in chicken than in human. The multidrug resistant gene was the highest distribution in ST11, ST258 and ST235. There were some differences in phenotype of drug-resistance, producing mucus and molecular characteristics, but ST11, ST258 and ST235 were common types of KP isolates from different host origins.

Klebsiellapneumoniae; drug-resistant; MLST; nosocomial; animal origin

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.10.007

河南省高等學(xué)校青年骨干教師資助項(xiàng)目(No.2015GGJS-134)

1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室,新鄉(xiāng) 453003；

2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,新鄉(xiāng) 453003

Email:yangf77@163.com

R378

A

1002-2694(2017)10-0888-05

Supported by the University Youth Backbone Teachers Projects of Henan Province (No. 2015GGJS-134).

2016-12-28編輯張智芳