胡挺松，張海林，劉永華，鄧 波，尹小雄，徐松淼，李 萍，范泉水，張富強

云南省登革4型病毒全基因組序列特征研究

胡挺松1，張海林1，劉永華2，鄧 波1，尹小雄2，徐松淼1，李 萍2，范泉水1，張富強1

目的闡明云南省2015年5株登革4型病毒(DENV-4)流行株的全基因組序列特征及分子流行病學(xué)特點。方法采用C6/36 細胞培養(yǎng)法分離病毒，用RT-PCR法擴增新分離DENV-4的全基因組序列，采用ClastalX1.83和MEGA6等生物信息學(xué)軟件進行核苷酸和推導(dǎo)氨基酸序列同源性及系統(tǒng)進化分析。結(jié)果從2015年云南省瑞麗市登革熱患者血清中分離到5株DENV-4(本地病例2株，來自緬甸臘戍和南坎市輸入性病例3株)。經(jīng)RT-PCR和序列測定，獲得這5株DENV-4的全基因組序列(10 661 nt)，其開放讀碼框(103-10 264)編碼3 386個氨基酸。全基因組或結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白基因序列的系統(tǒng)進化和同源性分析表明，云南分離株間高度同源并聚集為一個進化支，并與泰國不同年代DENV-4基因I型(G-I)流行株具有較近的進化關(guān)系和較高的同源性，同屬G-I。云南株和泰國株均與同基因型的DENV-4原型株(H241，1956年菲律賓)和中國廣州1990年B5株親緣性和同源性都較低。云南株與H241株在結(jié)構(gòu)蛋白或非結(jié)構(gòu)蛋白中分別存在21和45個氨基酸位點差異。結(jié)論首次獲得云南省DENV-4分離株的全基因組序列并發(fā)現(xiàn)它們與近期東南亞DENV-4 G-I流行株親緣關(guān)系較近。首次證實云南省存在DENV-4 本地流行，傳播來源為相鄰緬甸北部邊境地區(qū)。云南分離株某些氨基酸位點的改變是否與其抗原性和毒力有關(guān)尚需進一步研究。

登革4型病毒；全基因組；系統(tǒng)進化分析；同源性分析；氨基酸位點分析

登革病毒(dengue virus, DENV)分為4種血清型(DENV-1、2、3和4)，每一種血清型又可分為多個基因型(genotype)[1-4]。DENV基因組全長約10～11 kb，編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白(C、prM/M 和E)和7種非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b 和NS5)[2]。登革熱(dengue fever, DF)廣泛分布于全球熱帶和亞熱帶地區(qū)，尤以東南亞地區(qū)流行較為嚴重[1]。2000年以來，云南省每年均有來自相鄰東南亞國家的DF輸入性病例[5-12]。2013-2015年云南省德宏州、西雙版納州和臨滄市相繼發(fā)生DENV-1、DENV-2和DENV-3引起的本地DF暴發(fā)疫情[8-12]，其中德宏州瑞麗市連續(xù)3年發(fā)生DENV-1和DENV-2本地流行[8-9,13]。馮云等[13]曾從2014年瑞麗市來自緬甸的一例輸入性病例中檢測到DENV-4，本研究從2015年瑞麗市輸入性病例和本地病例中均分離到DENV-4，首次證實瑞麗市存在該血清型病毒的本地流行，并對新分離病毒株進行全基因組序列測定以及同源性、遺傳進化和氨基酸位點分析。

1 材料與方法

1.1病毒樣本 2015年瑞麗市DF患者急性期血清標本，經(jīng)DENV C/prM基因檢測和血清型鑒定[2]為DENV-4陽性的血清標本。

1.2病毒分離 采用白紋伊蚊C6/36 細胞(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病和微生物研究所提供)培養(yǎng)法分離病毒。取100 μL陽性患者血清，用細胞培養(yǎng)液1∶10稀釋，接種于已長成單層的C6/36細胞，置4% CO2恒溫培養(yǎng)箱28 ℃培養(yǎng)。每日于倒置顯微鏡下觀察細胞病變(CPE)，待75% 以上細胞出現(xiàn)CPE，收取細胞上清液，低溫冰箱保存待鑒定。

1.3RT-PCR和序列測定 用Axygen公司的AxyPrep Body Fluid Viral DNA/RNA Miniprep Kit 提取病毒分離物中的病毒RNA，用美國Invitrogen公司的SuperScript○RIII One-Step RT-PCR System with Platinum○RTaq Kit 試劑盒一步法RT-PCR擴增DENV全基因序列，將上述PCR產(chǎn)物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳并割膠回收, 直接測序。引物為自行設(shè)計，根據(jù)GenBank中的DENV-4基因序列，利用MEGA6軟件進行比對，找出相對保守區(qū)域，利用Primer Premier軟件設(shè)計DENV-4全基因序列的擴增引物(表1)。引物合成和擴增產(chǎn)物的測序均由昆明碩摯生物科技有限公司完成。

表1 DENV-4全基因序列引物信息
Tab.1 Specific primers for DENV-4 used in this study

引物名Primer引物序列Sequencedata(5′-3′)DEV4?1FAGTTGTTAGTCTGTGTGGACCGDEV4?1013RTAGCACCAGATCGACCCATGDEV4?662FAACACCACATTCAGGAATGGGDEV4?2622RCAGTGAGGTCATGTCCTCCTTCDEV4?2280FTTTGGAGGAGTCTCATGGATGDEV4?4337RTGTTATGTCTGCCATCTCATCCDEV4?3946FCAACAATGCCATTGGTCATGDEV4?6301RGGCCTGAGTTTTTTCTTCTCTCDEV4?6085FGAGAGTTCCGCCTCAGAGGDEV4?7771RATCCCTCTTTCAACAATCCATCDEV4?7362FCTCTTGATGAGAACAACATGGGDEV4?9088RCCTTCCACTCCACTCCATGAGDEV4?8804FGGAAGAACAGGGATGGACATCDEV4?10650RAGAACCTGTTGGATCAACAACA

1.4序列分析 采用ClastalX1.83軟件進行核苷酸序列比對，采用MEGA6軟件鄰接法(neighbor-joining)進行病毒基因核苷酸序列系統(tǒng)發(fā)生樹分析[14]。病毒核苷酸和氨基酸序列同源性分析、氨基酸位點分析及系統(tǒng)進化分析均引用GenBank中14株DENV-4(表2)，其中基因I型(GenotypeI, G-I)8株，基因II型(G-II)、基因III型(G-III)和sylyatic型各2株。H241株為DENV-4原型株(prototype strain)，除與其它13株參考株同時用于同源性及進化樹分析外，并作為氨基酸位點差異比對分析所參照的標準株。

表2 本研究引用的登革4型病毒參考株的背景信息
Tab.2 Background information of 14 strains of DENV-4 from GenBank

病毒株名稱Virusstrain基因庫接受號GenBankno．基因型Genotype年份Year國家或地區(qū)CountyorareaH241KR011349G?I1956菲律賓PhilippinesThD4＿0485AY618992G?I2001泰國ThailandThD4＿0348AY618990G?I1991泰國ThailandB5AF289029G?I1990中國廣州Guangzhou，ChinaTH11/1373KT026309G?I2011泰國ThailandTH11/1404KT026310G?I2011泰國ThailandTH11/1194KT026308G?I2011泰國ThailandH781363JQ513345G?I2011巴西BrazilThD4＿0734＿00AY618993G?II2000泰國ThailandGZ29KP723482G?II2010中國廣州Guangzhou，ChinaThD4＿0476＿97AY618988G?III1997泰國ThailandThD4＿0017＿97AY618989G?III1997泰國ThailandP73?1120JF262780sylvatic1973馬來西亞MalaysiaP75?514JF262779sylvatic1975馬來西亞Malaysia

2 結(jié) 果

2.1病毒分離 將DENV-4核酸陽性的DF患者急性期血清接種C6/36 細胞，共分離到5株DENV-4，它們均能引起C6/36 細胞典型CPE。其中2株分離自本地感染病例，3株分離自緬甸輸入性病例(表3)。

表3 云南省5株登革4型病毒的背景信息
Tab.3 Background information of 5 strains of DENV-4 isolated from Yunnan Province, China

病毒株名稱Virusstrain基因庫接受號GenBankno．基因型Genotype地區(qū)City病例性質(zhì)TypeofcaseYN/15DGR9KY672956G?I瑞麗市Ruili緬甸臘戍市輸入病例ImportedcasefromMyanmarYN/15DGR32KY672957G?I瑞麗市Ruili本地感染病例IndigenouscaseYN/15DGR35KY672958G?I瑞麗市Ruili本地感染病例IndigenouscaseYN/15DGR50KY672959G?I瑞麗市Ruili緬甸臘戍市輸入病例ImportedcasefromMyanmarYN/15DGR394KY672960G?I瑞麗市Ruili緬甸南坎市輸入病例ImportedcasefromMyanmar

2.2序列測定 對本次分得的5株DENV-4進行全基因組序列測定，獲得這5株病毒的全基因組核苷酸序列，基因組全長為10 661 nt，其中非編碼區(qū)5′UTR和3′UTR分別為102 nt和397 nt。開放讀碼框(103-10 264)編碼 3 386個氨基酸，包括3個結(jié)構(gòu)蛋白(C、prM/M、E)和7個非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5)。云南株DENV-4全基因核苷酸序列均已提交GenBank(表3)。

2.3進化分析 云南5株DENV-4與來自GenBank中14株不同基因型DENV-4參考株的核苷酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，圖1、2和3顯示，云南分離株無論在全基因組(comeplete genome)還是在C/prM/M、E、NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5基因核苷酸序列均高度聚集在一個進化支，并與泰國不同年代的DENV-4 G-I流行株(ThD4_0485、ThD4_0348、TH11/1373、TH11/1404和TH11/1194)位于同一進化群，具有較近的親緣關(guān)系，它們的基因型同屬G-I。所有云南株均與DENV-4原型株(H241)和中國廣州1990年B5株同處一個大分支，但親緣關(guān)系較遠。此外，云南株均與DENV-4的其它基因型(G-II、G-III和sylvatic)病毒株的進化關(guān)系較遠(圖1和2)。本次云南株非編碼區(qū)3′UTR的進化分析結(jié)果與編碼區(qū)結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白分析結(jié)果基本相似(圖2)。

2.4同源性分析 云南5株DENV-4與14株DENV-4參考株的E基因進行核苷酸和氨基酸序列同源性分析。表4顯示，云南5株DENV-4的E基因核苷酸(氨基酸)同源性為98.84%～100.0%(99.18%～100.0%)，它們間不僅高度同源并與泰國流行株(TH11_1194、TH11_1373、TH11_1404、ThD4_0348和ThD4_0485)E基因核苷酸(氨基酸)同源性為95.95%～98.08%(98.57%～99.59%)，同屬G-I。云南株與同基因型的DENV-4原型H241株E基因核苷酸(氨基酸)同源性僅為92.14%～94.84%(96.48%～96.90%)，與廣州1990分離的B5株也僅為91.24%～91.96%(96.48%～96.90%)。云南株與G-II(ThD4_0734和GZ29株)E基因核苷酸(氨基酸)同源性為90.23%～90.65%(96.27%～96.90%)，與G-III

(ThD4_0476_97和ThD4_0017_97株) E基因核苷酸(氨基酸)同源性為88.84%～89.27%(96.27%～96.90%)，與sylvatic基因型(P73-1120和P75-514株)E基因核苷酸(氨基酸)同源性為84.14%～84.42%(94.52%～95.00%)。

注：黑色圓形為分離自云南省的DENV-4Black circles represent the strains isolated from Yunnan Province, China圖1 云南省5株DENV-4 全基因組序列進化分析Fig.1 Phylogenetic tree based on the comeplete genome of 5 DENV-4 strains isolated from Yunnan Province, China

注：黑色圓形為分離自云南省的DENV-4Black circles represent the strains isolated from Yunnan Province, China圖2 云南省5株DENV-4 C/PrM/M和E基因序列進化分析Fig.2 Phylogenetic tree based on the C/PrM/M and E genes of 5 DENV-4 strains isolated from Yunnan Province, China

注：黑色圓形為分離自云南省的DENV-4Black circles represent the strains isolated from Yunnan Province, China圖3 云南省5株DENV-4 NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5和3′UTR基因序列進化分析Fig.3 Phylogenetic tree based on the NS1, NS2a, NS2b, NS3,NS4a, NS4b, NS5 and 3′UTR genes of 5 DENV-4 strains isolated from Yunnan Province, China

表4 云南DENV-4分離株與DENV-4參考株E基因核苷酸和氨基酸同源性比較
Tab.4 Homology comparisons of the E gene sequences of dengue serotype 4 viruses and Yunnan isolates in Yunnan Province, China

注：左下三角數(shù)據(jù)為E基因核苷酸序列同源性百分率，右上三角數(shù)據(jù)為E基因氨基酸序列同源性百分率。

Note: The percentages of nucleotide sequence identities of the genome are presented on the lower left side; the percentages of amino-acid sequence identities of the genome are presented on the upper right side.

此外，還對云南5株DENV-4與14株參考株的NS5基因進行同源性比較分析，結(jié)果表明，云南株間的NS5基因核苷酸(氨基酸)同源性為98.45%～99.85%(99.09%～99.89%)，并與前述5株泰國流行株NS5基因核苷酸(氨基酸)同源性為96.30%～98.07%(98.86%～99.32%)，同樣均為G-I。云南株與同基因型的DENV-4原型H241株和廣州1990分離的B5株的NS5基因核苷酸(氨基酸)同源性分別僅為94.67%～94.84%(98.05%～98.51%)和92.83%～93.04%(97.70%～98.17%)。云南株與前述G-II、G-III和sylvatic基因型NS5基因核苷酸(氨基酸)同源性較低，依次僅為90.60%～91.14%(96.54%～97.24%)、90.00%～90.35%(97.12%～97.59%)和84.14%～84.42%(94.52%～95.00%)。

2.5氨基酸差異位點分析 云南5株DENV-4與13株DENV-4參考株進行全編碼區(qū)氨基酸位點差異分析，并與原型株(H241)進行氨基酸位點比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論結(jié)構(gòu)蛋白或非結(jié)構(gòu)蛋白的氨基酸殘基均存在不同程度的差異。云南株結(jié)構(gòu)蛋白共有21個氨基酸位點發(fā)生改變，其中C、prM/M、E分別有2、4和15個位點改變(表5)。如所有云南株和各基因型參考株均在prM/M-16、prM/M-52、E-155、E-156、E-221、E-329、E-360、E-402和E-461位點分別出現(xiàn)R-K、E-K、I-T、P-S、A-T、A-T、Y-N、L-F 和F-L的改變；所有云南株和東南亞G-I參考株均在C-102、prM-156、E-96、E-203、E-227、E-233、E-265和E-478位點依次出現(xiàn)M-I、V-I、V-M、K-T、S-L、Y-H、T-A 和T-S的改變；僅有云南5株在E-21和E-384分別發(fā)生W-G和D-E改變；僅云南2株在C-99出現(xiàn)R-K改變。此外，表5空白處為該氨基酸位點與H241株相同，未發(fā)生改變。

云南株與H241株在非結(jié)構(gòu)蛋白中共發(fā)現(xiàn)45個氨基酸位點存在差異，其中NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5依次有11、2、3、13、1、3和12個位點改變。在NS1中所有云南株和所有基因型參考株均在NS1-2(T-M)、NS1-51(E-K)、NS1-66(I-V)和NS1-129(K-R)有改變；所有云南株和東南亞G-I參考株在NS1-128(A-T)、NS1-135(I-V)有改變；僅云南株在NS1-153(L-F)、NS1-214(K-R)、NS1-251(F-V)和NS1-265(V-L)發(fā)生改變。云南株和東南亞G-I參考株在NS3共同存在6個表位的改變；僅云南株NS3有8個表位的改變，其中株間存在差異。NS2a、NS2b、NS4a、NS4b位點僅有較少改變。所有云南株和東南亞G-I參考株在NS5中的NS5-53(H-Y)、NS5-59(S-T)、NS5- 200(K-R)、NS5-256(V-A)、NS5-335(I-V)、NS5-631(Q-R)和NS5-826(T-I)均發(fā)生改變，僅5株云南株在NS5-51(I-T)、3株云南株在NS5-269(T-I)和2株云南株在NS5-628(V-A)、NS5-651(C-Y)出現(xiàn)改變。

表5 DENV-4云南株與H241株結(jié)構(gòu)蛋白(C、prM/M和E)氨基酸差異位點比較
Tab.5 Different sites of amino acid in structural protein (C,prM/M和E ) sequences in Yunnan strains and H241 strain of DENV-4

注：阿拉伯數(shù)字表示本研究中的病毒株名稱。

Note：Arabic numeral represent the virus strain names in the study: 1: H241; 2: P75-514; 3: P73-1120; 4: ThD4_0017_97; 5: ThD4_ 0476_97; 6: ThD4_0734_00; 7: GZ29; 8: ThD4_0485; 9: B5; 10: ThD4_0348; 11: TH11/1404; 12: TH11/1373; 13: TH11/1194; 14: H781363; 15: YN/15DGR394; 16: YN/15DGR50; 17: YN/15DGR35; 18: YN/15DGR32; 19: YN/15DGR9.

3 討 論

東南亞地區(qū)廣泛存在登革4種血清型病毒的流行[1,15]，對云南省構(gòu)成威脅。云南省西南邊境地區(qū)自2013年以來相繼發(fā)生過來自相鄰東南亞國家的DENV-1、DENV-2和DENV-3感染的輸入性病例引起的本地DF流行[8-13]，其中瑞麗市于2013-2016年連續(xù)4年發(fā)生DENV-1和DENV-2流行[8,9,13]。20世紀80年代，曾從云南省西南邊境地區(qū)白紋伊蚊中分離到DENV-4[16-17]，表明云南省局部邊境地區(qū)曾發(fā)生過該血清型病毒的流行。近幾年云南省曾經(jīng)由來自緬甸的輸入性病例中檢測到DENV-4(2013年昆明和2014年瑞麗)[13,18]，本研究首次從中緬邊境重要口岸城市瑞麗市的本地感染病例和緬甸輸入性病例中同時分離到DENV-4，證實2015年該市存在DENV-4引起的本地DF流行，此為首次證實云南省存在DENV-4本地流行。DENV-4同源性和進化分析表明，瑞麗市無論來自緬甸的輸入性病例或本地感染病例的病毒株，它們間均具有較高的同源性和較近的進化關(guān)系，且基因型均為G-I，并發(fā)現(xiàn)這些流行株均與東南亞G-I流行株親緣關(guān)系最為接近，同屬一個進化群。由此認為，導(dǎo)致2015年瑞麗DENV-4本地流行的傳播來源為緬甸輸入性病例，同時還間接證實，與中國瑞麗緊鄰的緬甸北部邊境地區(qū)的南坎市和臘戍市2015年均存在DENV-4 G-I流行。至此，云南省已發(fā)生過登革4種血清型病毒的DF本地流行，其中瑞麗除DENV-3外，其它3種血清型病毒均有本地流行，今后應(yīng)加強DF跨境傳播及本地流行的綜合防控工作。瑞麗多種血清型病毒的共同流行很有可能形成DF地方性流行區(qū)，當?shù)鼐哂幸l(fā)重癥DF或登革出血熱(dengue haemorrhagic fever)的風(fēng)險，疾控和醫(yī)療部門對此應(yīng)予以高度重視。

近幾年，我國南方多以DENV-1和DENV-2流行。新中國成立后我國首次于1978年在廣東佛山市暴發(fā)DF疫情，其病原體為DENV-4，基因型為G-II(78-42和78-56株)[19]，隨后廣州2010年也發(fā)生了該血清型的G-II流行[20]。期間1990年廣州株(B5)和2005年深圳株(SZ0524)DENV-4則為G-I，并發(fā)現(xiàn)SZ0524株與H241株和B5株的E基因核苷酸(氨基酸)同源性則分別高達99.7%(99.2%)和97.7%(98.8%)，相似度較高[21]。本次進化分析發(fā)現(xiàn)，云南株與同為G-I的1956年分離自菲律賓的DENV-4原型株(H241)和1990年廣州的B5株親緣關(guān)系較遠，核苷酸和氨基酸同源性也較低。本次氨基酸差異位點分析還發(fā)現(xiàn)，與H241株相比，云南株和東南亞G-I參考株間在某些位點的改變既有共性也有不同，且云南株與H241和B5株間也有較多差異位點。這些結(jié)果表明，不同時期和地域的DENV-4 G-I流行株間存在明顯差異，并隨著流行時間的推移該基因型病毒變異更為明顯，此可能與DENV在自然界傳播中與宿主共進化有關(guān)。由此認為，開展不同年代和不同地區(qū)的DENV監(jiān)測對掌握自然界流行株的遺傳進化和變異均有重要意義。

目前認為E 蛋白中的結(jié)構(gòu)域III區(qū)(氨基酸303～395位點)、II區(qū)(52～136 和190～284)及II區(qū)和III區(qū)分界面之間的區(qū)域(294～305)與DENV的抗原性和毒力有關(guān)[22-24]。本次云南株E基因中有15個氨基酸位點的改變，其中屬于III區(qū)(E-329、E-360、E-384)和II區(qū)(E-96、E221、E-203、E-227、E-233、E265)的位點有9個，但它們可能不屬于關(guān)鍵位點。劉志文等[25]對DENV-4自然分離株和實驗室減毒株的比較發(fā)現(xiàn)，E-155位氨基酸由T(蘇氨酸)轉(zhuǎn)變?yōu)?I(異亮氨酸)后，可能會使病毒毒力增強，反之毒力減弱，認為該位點與毒力相關(guān)。本次云南株中的E-155位與毒力較強的原型株(H241)相比則由I變?yōu)門，似乎意味著當前云南流行株相較于原型株在毒力上有減弱現(xiàn)象。對于上述位點的變異與抗原性或毒力的關(guān)系以及非結(jié)構(gòu)蛋白某些氨基酸位點改變的意義尚需進一步研究。

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Molecularcharacteristicsofthefull-lengthgenomeofdengueserotype4virusstrainsisolatedfromdenguefevercasesinYunnanProvince,China

HU Ting-song1, ZHANG Hai-lin1, LIU Yong-hua2, DENG Bo1, YIN Xiao-xiong2, XU Song-miao1,LI Ping2, FAN Quan-shui1, ZHANG Fu-qiang1

(1.CenterforDiseaseControlandPrevention,ChengduMilitaryRegion,Kunming650118,China;2.RuiliCenterforDiseaseControlandPrevention,Ruili678600,China)

We investigated the molecular characteristics of the full-length genome of 5 dengue serotype 4 virus (DENV-4) strains isolated in Yunnan Province, China, 2015 and their molecular epidemiological feature.Isolation of dengue virus was using C6/36 cell culture method. Viral RNA was extracted from virus isolates, then the full-length genome was amplified by RT-PCR. The homology and phylogenetic analysis was made on the nucleotide and deduced amino acid sequences by bioinformatics softwares including ClastalX1.83 and MEGA6 etc. Results showed that five strains of DENV-4 isolated from dengue fever cases in Ruili City of Yunnan Province in 2015, of these, 2 strains from indigenous cases, 3 from imported cases from Lashio and Nam Can cities of Myanmar to Ruili of China. RT-PCR and sequencing indicated that the full-length genes (10 661 nt) of 5 DENV-4 strains were obtained, and their open reading frame (103-10 264) were coded 3 386 amino acid residues. Phylogenetic tree and homology analysis based on the comeplete genome or structural and non-structural protein genes showed that the 5 DENV-4 isolates were highly homologous and gathered in an evolution as well as they have a closer genetic relationship with the DENV-4 genotype I (G-I) strains isolated from Thailand. Results indicated that the Yunnan strains belonged to G-I.Yunnan strains and Thailand strains compared with DENV-4 prototype strain (H241, Philippines 1956) and Guangzhou strain (B5, 1990) of China and showed low homology and evolutionary relationship.When Yunnan strains compared with H241 strain, there were 21 and 45 different sites in amino acid of structural and non-structural proteins, respectively.This is the first time in Yunnan to obtain full-length genomes sequence of DENV-4 and they have closer evolutionary relationship with DENV-4G-I strains from Southeast Asia region in recent years. The autochthonous DENV-4 epidemic in Yunnan was detected for the first time, and the virus transmission sources were from neighboring northern Myanmar. It is necessary to further study that change of the amino acid sites of Yunnan strains of DENV-4 is related to its antigenicity and virulence.

dengue serotype 1 virus; full-length genome; phylogenetic analysis; homology analysis; amino acid site analysis

s: Zhang Fu-qiang, Email: zfq1968@aliyun.com; Fan Quan-shui, Email:fqs168@126.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.10.002

國家十三五重大專項(No.2016YFC1200100)，全軍青年培育項目(No.15QNP035)和中國博士后基金項目(No.2015M582907和2016T91009)聯(lián)合資助

張富強，Email: zfq1968@aliyun.com

范泉水，Email:fqs168@126.com

1.成都軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心，昆明 650118；2.瑞麗市疾病預(yù)防控制中心，瑞麗 678600

R373.3

A

1002-2694(2017)10-0859-09

Supported by the National Key Basic Research Program of China (No. 2016YFC1200100), the Science and Technology Programs of Military (No. 15QNP035), and the General Financial Grant from the China Postdoctoral Science Foundation(No. 2015M582907 and 2016T91009)

2017-04-17編輯李友松