李東嫻+杜春華+徐怡+曹紅云+湯秀梅+游燕

摘要： 目的 評價苯甲酸鈉作為白及糖漿抑菌劑的抑菌效力。方法 按《中國藥典》2015 年版通則1121進行實驗。 結(jié)果 苯甲酸鈉對白及糖漿中的細菌和真菌均具有良好的抑菌效果，其抑菌效力符合2015版中國藥典對于抑菌效力的規(guī)定。結(jié)論 苯甲酸鈉可以作為白及糖漿的抑菌劑添加。

關(guān)鍵詞：抑菌效力；白及糖漿；苯甲酸鈉

中圖分類號：R2855 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2017）10-0077-02

白及為蘭科植物白及Bletille striata（Thunb）Reichbf的干燥塊莖。具有收斂止血，消腫生肌的作用。用于咯血，吐血，外傷出血，癰瘍腫毒，皮膚皸裂等癥[1]。白及糖漿是以白及作為主要成分制成的糖漿劑，主治功能為收斂，止血，補肺。用于長年咳嗽，肺痿咯血，肺結(jié)核，慢性氣管炎，百日咳，肺氣腫，久咳傷肺，咯血吐血[2]。而現(xiàn)在市面上該種糖漿通常為多劑量包裝，且該制劑的主要成分白及并未見明顯抑菌性報道，因此使用過程中易被微生物污染，為保證該產(chǎn)品的微生物安全性，需加入抑菌劑[3]。

2015版中國藥典第四部制劑通則的0116項糖漿劑中有如下規(guī)定“三、根據(jù)需要可加入適宜的附加劑，如需加入抑菌劑，除另有規(guī)定外，在制劑確定處方時，該處方的抑菌效力應(yīng)符合抑菌效力檢查法（通則1121）的規(guī)定?！盵4]因此對加入抑菌劑的白及糖漿進行抑菌效力的檢測，是工藝研究過程中不可或缺的一環(huán)。

本研究對白及糖漿（02%苯甲酸鈉），白及糖漿（03%苯甲酸鈉）分別進行了抑菌效力的檢測，以探討白及糖漿抑菌劑添加的合理性。

1 實驗材料

11 樣品 白及糖漿（02%苯甲酸鈉）和白及糖漿（03%苯甲酸鈉）由云南省藥物研究所制劑研究室提供，批號：20160523，包裝均為100 mL/瓶。

12 稀釋劑及培養(yǎng)基 pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，均由廣東環(huán)凱生物科技有限公司提供，并經(jīng)過培養(yǎng)基適應(yīng)性驗證。

13 菌種 金黃色葡萄球菌〔CMCC（B）26 003 第3代〕、大腸埃希菌〔CMCC（B）44 102 第4代〕、銅綠假單胞菌〔CMCC（B）10 104 第3代〕和白色念珠菌〔CMCC（F）10 123 第3代〕均由云南省食品藥品檢驗所提供，黑曲霉〔CMCC（B）98 003 第3代〕，由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 實驗方法

參照《中國藥典》2015年版第四部抑菌效力檢查法（1121）進行實驗，簡述如下：

21 菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，30～35℃培養(yǎng)24 h。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，20～25℃培養(yǎng)2 d。取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物用09%無菌氯化鈉溶液制成濃度為107-108 cfu/mL的菌懸液。取接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，20～25℃培養(yǎng)14 d產(chǎn)生豐富孢子后，加入3～5 mL含005%（mL/mL）聚山梨酯80的09%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，之后用含005%（mL/mL）聚山梨酯80的09%無菌氯化鈉溶液將孢子懸液稀釋成濃度為107-108 cfu/mL的黑曲霉孢子懸液。取上述菌（孢子）懸液，稀釋至100-1000 cfu/mL，待用。

22 方法適應(yīng)性驗證

221 供試液的制備 取3種白及糖漿各10 mL，加pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液90 mL，制成1：10供試液。依次稀釋為1：50，1：100稀釋液。

222 試驗組 取1：10，1：50，1：100供試液99 mL于滅菌試管中，加入100-1000 cfu/mL金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌01 mL，混勻后從試管中吸取1 mL注入滅菌平皿中，立刻傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，待其凝固后，倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30～35℃培養(yǎng)3 d。取1：10，1：50，1：100供試液99 mL于滅菌試管中，加入白色念珠菌、黑曲霉菌液01 mL，混勻從試管中吸取1 mL注入滅菌平皿中，立刻傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，待其凝固后，倒置于恒溫培養(yǎng)箱中20～25℃培養(yǎng)5 d。每個菌種平行制備2個平皿，測定試驗組的菌落數(shù)。

223 供試品對照組 取1：10，1：50，1：100，供試液99 mL于滅菌試管中，加pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液01 mL，其余按試驗組操作。

224 菌液對照組 取pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液99 mL于滅菌試管中，加入制備好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌液01 mL，其余按試驗組操作。

23 抑菌效力實驗

231 供試品接種 取2種白及糖漿各5瓶（100 mL/瓶），分別加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌和黑曲霉107-108 cfu/mL的菌（孢子）懸液1mL，使接種后染菌量為105-106 cfu/mL，充分混勻，使供試品中的實驗菌均勻分布。

232 存活菌數(shù)測定 將231中接種后的供試品，按22中合適方法進行菌落計數(shù)。完成后將供試品置20～25攝氏度避光貯存，于14 d、28 d，再次進行菌落計數(shù)。

3 結(jié)果

31 方法適應(yīng)性驗證結(jié)果 回收率計算公式：[（試驗組平均菌落數(shù)-供試品對照組平均菌落數(shù)）/菌液對照組平均菌落數(shù)]計算回收率，見表1。

32 存活菌落數(shù)測定結(jié)果

321 白及糖漿（02%苯甲酸鈉）的菌落數(shù)測定結(jié)果 見表2。

322 白及糖漿（03%苯甲酸鈉）的菌落數(shù)測定結(jié)果 見表3。endprint

4 討論

2015版中國藥典中抑菌效力檢查法項下規(guī)定，用于存活菌數(shù)測定的方法，其方法適應(yīng)性驗證試驗菌的回收率不得低于70%[4]，而2種不同抑菌劑濃度的白及糖漿方法適應(yīng)性驗證的結(jié)果如表1所示，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率在各稀釋級中均大于70%，故1：10稀釋液可以使用平皿法對菌落進行計數(shù)，而更高的稀釋濃度中抑菌劑含量更低，故也可以使用平皿法進行菌落計數(shù)。

按2015版中國藥典第四部制劑通則的0116項糖漿劑中的規(guī)定加入抑菌劑時“山梨酸和苯甲酸的用量不得超過03%（其鉀鹽、鈉鹽的用量分別按酸計）”[1]，即白及糖漿種的苯甲酸鈉的含量不得超過03%。本實驗選用了03%和02%苯甲酸鈉的白及糖漿，結(jié)果顯示，兩個抑菌劑濃度的白及糖漿，在第14d時所有加入菌種的計數(shù)均已<10 cfu/mL，且在28 d時仍保持<10 cfu/mL的菌落計數(shù)，可見苯甲酸鈉可以作為白及糖漿的抑菌劑使用。

而苯甲酸鈉作為我國常用的防腐劑和抑菌劑之一，雖然一直以來都被認為是安全的，但近年來有報道苯甲酸鈉也具有一定毒性。雖然報道中抑制生長[5]、損害神經(jīng)系統(tǒng)[6]、肝臟損害[7]等的劑量都要高于藥典規(guī)定的03%，但也有01%苯甲酸鈉飼料飼養(yǎng)的小鼠體重高于對照組的報道[5]。根據(jù)本實驗存活菌數(shù)測定的結(jié)果，兩種含不同濃度苯甲酸鈉的白及糖漿，其抑菌效力均達到藥典要求，因此建議選擇使用02%作為白及糖漿中苯甲酸鈉的濃度。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會中國藥典[S].一部北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：103

[2]中國成方制劑（衛(wèi)生部頒藥品標準）[S]北京：人民衛(wèi)生出版社，Z11-49

[3]中國藥典2015版抑菌效力檢查法解讀[J].中國藥師，2016，19（9）：1740-1742

[4]國家藥典委員會中國藥典[S].四部北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：151-153

[5]陳玲，葛才保苯甲酸鈉對小鼠體重的影響[J].首都食品與醫(yī)藥，2016，（2）：78-79

[6]梁川苯甲酸鈉對大鼠神經(jīng)系統(tǒng)損傷的影響[J].食品安全質(zhì)量檢測學報，2016，7（9）：3810-3814

[7]李錦玉，李榮欣，李京路，等苯甲酸鈉多次給藥對大鼠肝腎功能的影響[J].鄭州大學學報（醫(yī)學版）2015，50（1）：134-138endprint