馮莉芳，張玲莉

槲皮黃酮對(duì)酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥及氧化應(yīng)激的作用

馮莉芳a，張玲莉b

目的探討槲皮黃酮對(duì)酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥(HHcy)及氧化應(yīng)激的作用。方法將30只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、低劑量槲皮黃酮治療組、中劑量槲皮黃酮治療組、高劑量槲皮黃酮治療組，每組6只。用酒精+0.5 mL魚(yú)油灌胃誘導(dǎo)酒精性肝損傷模型，造模3周后，治療組大鼠分別給予4、2、1 g/kg槲皮黃酮灌胃，7周后麻醉處死大鼠，測(cè)定血漿總同型半胱氨酸(tHcy)濃度及血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(Alb)、白/球蛋白比值(A/G)、肝勻漿丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH)表達(dá)水平，并對(duì)肝臟病理組織進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果模型組大鼠tHcy、ALT、AST、MDA的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組，而SOD、GSH含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療后，槲皮黃酮治療組大鼠tHcy、ALT、AST、MDA均低于模型組(P<0.05)，而SOD、GSH含量高于模型組(P<0.05)，并呈濃度依賴(lài)性。組織病理學(xué)檢測(cè)顯示，模型大鼠出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、點(diǎn)狀壞死，伴隨炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，槲皮黃酮治療后，點(diǎn)狀壞死和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)消失。結(jié)論槲皮黃酮可改善酒精性肝損傷，其作用機(jī)制可能與降低高同型半胱氨酸水平及氧化應(yīng)激有關(guān)。

槲皮黃酮；高同型半胱氨酸血癥；氧化應(yīng)激

0 引言

槲皮黃酮是一種黃酮類(lèi)化合物，廣泛存在于植物中。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮黃酮具有較多的藥理作用，包括抗炎癥、抗氧化應(yīng)激、抗病毒、抑制血栓形成、抑制病毒、清除氧自由基及參與免疫調(diào)節(jié)等[1-5]，可用于預(yù)防和治療多種疾病，并且其原材料來(lái)源較為廣泛，價(jià)格低廉，藥效明顯，給藥途徑較為方便。近年研究報(bào)道，槲皮黃酮可抑制NF-κB信號(hào)通路的活化，降低有關(guān)炎癥因子水平，起到改善肝損傷的作用[6-7]，因此在抗炎、抗肝纖維化方面有良好的應(yīng)用前景。

酒精性肝損傷的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，有報(bào)道，高同型半胱氨酸血癥(HHcy)可能是導(dǎo)致酒精性肝損傷的機(jī)制之一[8]，槲皮黃酮可以調(diào)節(jié)同型半胱氨酸的代謝[9]。何映等[10]研究了體內(nèi)外急性酒精性肝損傷小鼠模型，為之后的工作奠定了基礎(chǔ)。本研究建立了酒精性肝損傷大鼠模型，探討槲皮黃酮對(duì)酒精性肝損傷的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級(jí)SD雄性大鼠購(gòu)自湖北省疾控中心，體重(152±13) g；酒精和魚(yú)油購(gòu)自武漢中百倉(cāng)儲(chǔ)；肝功能試劑盒購(gòu)自合肥艾力科生物技術(shù)有限公司；槲皮黃酮(美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：20141012)；Hcy檢測(cè)試劑盒(華美公司)；SOD檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Sigma公司)；MDA檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Sigma公司)；GSH檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Sigma公司)；考馬斯亮蘭(華美公司)。

1.2 方法 SPF級(jí)SD雄性大鼠30只，平均體重(145±8) g，正常飼養(yǎng)待大鼠適應(yīng)新環(huán)境1周后，將30只大鼠隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、模型組、低劑量槲皮黃酮治療組、中劑量槲皮黃酮治療組、高劑量槲皮黃酮治療組，每組6只，用酒精和魚(yú)油灌胃誘導(dǎo)酒精性肝損傷模型。每日用酒精、0.5 mL魚(yú)油灌胃，酒精開(kāi)始劑量為6 g/kg，隨后每周遞增劑量0.2 g/kg，共7周，同時(shí)給予飼料喂養(yǎng)。正常對(duì)照組用0.9% NaCl溶液灌胃，同時(shí)給予飼料喂養(yǎng)。在造模后第3周開(kāi)始，治療組大鼠給予4、2、1 g/kg槲皮黃酮灌胃，共持續(xù)4周。造模7周后，收集大鼠血液及肝組織標(biāo)本，對(duì)tHcy、ALT、AST、Alb、MDA、GSH及肝組織病理學(xué)形態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況 與對(duì)照組相比，模型組大鼠體重明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而經(jīng)過(guò)高、中、低劑量槲皮黃酮治療后，大鼠的體重沒(méi)有發(fā)生變化。與對(duì)照組相比，模型組大鼠肝臟指數(shù)(肝臟濕重/體重×100)顯著升高(P<0.05)；而經(jīng)過(guò)3種劑量槲皮黃酮治療后，治療組大鼠肝臟指數(shù)相對(duì)模型組顯著降低(P<0.05)，而治療組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 大鼠血漿中tHcy含量的變化 酒精性肝損傷大鼠血漿中tHcy含量高于對(duì)照組(P<0.05)；而經(jīng)高、中、低劑量槲皮黃酮治療后，大鼠血漿中tHcy含量較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而治療組間tHcy水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 大鼠氧化應(yīng)激產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠中MDA水平升高，而SOD、GSH水平降低(P均<0.05)。與模型組大鼠比較，高、中、低劑量槲皮黃酮治療組大鼠MDA水平降低，SOD、GSH水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而治療組間MDA、SOD、GSH水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表1 各組大鼠體重及肝臟指數(shù)變化

注：與模型組比較，*P<0.05

表2 各組大鼠血漿tHcy水平的變化

注：與模型組比較，*P<0.05

2.4 血清肝功能指標(biāo)的變化 模型組大鼠血清ALT、AST水平高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而經(jīng)過(guò)高、中、低劑量槲皮黃酮處理后，治療組大鼠血清ALT、AST水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；藥物治療組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。進(jìn)一步檢測(cè)，模型組大鼠血清Alb、A/G水平與對(duì)照組、治療組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表3 各組大鼠氧化應(yīng)激產(chǎn)物變化

注：與模型組比較，*P<0.05

2.5 肝組織病理切片檢測(cè)結(jié)果 肝組織病理檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞形態(tài)飽和有光澤，排列規(guī)則有序，細(xì)胞質(zhì)正常，肝小葉規(guī)則，少見(jiàn)脂肪滴，未發(fā)現(xiàn)炎癥與壞死細(xì)胞。模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)雜亂無(wú)章，胞漿疏松，呈顆粒狀變化，肝細(xì)胞出現(xiàn)較多脂肪滴，部分呈點(diǎn)狀壞死灶，間質(zhì)中還發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。槲皮黃酮高、中、低劑量處理組大鼠肝組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及肝細(xì)胞壞死顯著降低。見(jiàn)圖1。

表4 各組大鼠肝功能指標(biāo)變化

注：與模型組比較，*P<0.05

圖1 肝組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果(400×)

3 討論

酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明，甲硫氨酸代謝異常所致的HHcy可能是導(dǎo)致酒精性肝損傷的致病機(jī)制之一[8]。因此，本研究通過(guò)槲皮黃酮治療HHcy來(lái)考察其對(duì)酒精性肝損傷的藥理作用。結(jié)果顯示，模型組大鼠血漿中tHcy水平高于正常對(duì)照組，并且治療數(shù)周后，治療組tHcy水平降低，這可能是槲皮黃酮干預(yù)酒精性肝損傷的機(jī)制之一。魚(yú)油里含有大量卵磷脂，由微粒體細(xì)胞色素P4502E1系統(tǒng)代謝的乙醇及其代謝產(chǎn)物乙醛、脂肪酸生成大量的活性氧自由基(ROS)，ROS不僅可以造成肝細(xì)胞的損害，還可以增強(qiáng)肝細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的敏感性。

SOD和GSH作為機(jī)體重要的還原劑，在拮抗自由基和氧化性毒物中發(fā)揮重要作用。槲皮黃酮在抗炎癥反應(yīng)、抗細(xì)胞凋亡[11]、抗氧化應(yīng)激等方面的研究較多，然而對(duì)同型半胱氨酸血癥及酒精性肝損傷治療的研究較為少見(jiàn)。因此，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了酒精性肝損傷大鼠模型，探討了槲皮黃酮的治療效果。結(jié)果顯示，槲皮黃酮可明顯增強(qiáng)SOD活性，促進(jìn)GSH在肝微粒體中的產(chǎn)生，從而促進(jìn)肝細(xì)胞對(duì)自由基及其代謝產(chǎn)物的清除能力，抑制了氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕了自由基的損傷，保護(hù)肝細(xì)胞受損。本實(shí)驗(yàn)用高、中、低劑量槲皮黃酮治療模型大鼠后，藥物處理組大鼠血清ALT、AST水平下降，肝細(xì)胞壞死消失、炎癥減輕?？傊?，槲皮黃酮能夠緩解酒精性肝損傷，其作用機(jī)制可能與改善高同型半胱氨酸血癥有關(guān)。

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Effectsofquercetinonhyperhomocysteinemiaandoxidativestressinratswithalcoholicliverinjury

FENG Li-fanga,ZHANG Ling-lib

(a.Department of Infectious Diseases,b.Department of Pharmacy,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,China)

ObjectiveTo investigate the effects of quercetin on hyperhomocysteinemia and oxidative stress in rats with alcoholic liver injury.MethodsThirty rats were randomly divided into 5 groups:control group,model group,and 3 quercetin treatment (4,2 and 1 g/kg) groups.Ethanol plus 0.5 mL fish oil were used to establish models by inducing alcoholic liver injury.At 3 weeks after modeling,4,2 and 1 g/kg of quercetin was given in treatment groups.The plasma total homocysteine (tHcy),serum amino transferase activity (ALT and AST),albumin (Alb),globulin (Glb),liver malodialdehyde (MDA),seperoxidezed dismutase (SOD) and glutathione (GSH) were detected after 7 weeks,and the situation of liver injury was also evaluated by using tissue pathological examination.ResultsThe contents of tHcy,ALT,AST and MDA in model group were higher than those of control group (P<0.05),while SOD and GSH levels were lower (P<0.05).After treatment,the contents of tHcy,ALT,AST and MDA in quercetin treatment groups were lower than those of model group (P<0.05),while the levels of SOD and GSH were higher,and the changes in quercetin treatment groups were in aconcentration-dependent manner.The fatty degeneration,focal necrosis and inflammatory cell infiltration in liver occurred in model group,while the focal necrosis and inflammatory cell infiltration disappeared after treatment with quercetin.ConclusionQuercetin can protect liver against alcoholic liver injury by reducing the tHcy level and oxidative stress.

Quercetin;Hyperhomocysteinemia;Oxidative stress

2017-03-01

武漢大學(xué)人民醫(yī)院a.感染科，b.藥學(xué)部，武漢 430060

10.14053/j.cnki.ppcr.201710003