周 明 鄒 文 范少勇 候慧銘

（南昌市洪都中醫(yī)院骨十科，江西 南昌 330006）

仙方活命飲抗炎作用的實驗研究※

周 明 鄒 文 范少勇 候慧銘

（南昌市洪都中醫(yī)院骨十科，江西 南昌 330006）

目的 通過小鼠耳腫脹實驗對仙方活命飲的抗炎作用進行探索，為外科感染的預防及治療提出抗炎的新理念、新方法。方法 取30只小鼠隨機均分為3組空白組（生理鹽水）、實驗組（仙方活命飲），陽性對照組（雙黃連口服液）：采用二甲苯致小鼠耳腫脹的模型并觀察仙方活命飲的作用。結果 小鼠耳腫脹度測定結果實驗組與空白組比較有顯著差異（P<0.05）。陽性對照組與空白組比較有顯著差異（P<0.05）。而實驗組與陽性對照組比較無顯著差異（P>0.05）。結論 仙方活命飲對小鼠耳炎性水腫有顯著的抑制作用。仙方活命飲具有抗菌消炎作用，能為清熱解毒法的臨床應用提供理論基礎，并有望開創(chuàng)抗菌消炎藥物的新時代。

清熱解毒；抗生素；仙方活命飲；實驗

抗菌藥物自出現(xiàn)以來，為治療感染性疾病提供了良好條件，并很大程度上幫助外科醫(yī)生避免圍手術期感染這個棘手問題的發(fā)生，成為外科手術中不可缺少的藥品。而其中抗生素是圍手術期抗菌藥物的首選[1]，對許多嚴重的細菌性感染具有顯著的效果，挽救了無數(shù)人的生命。但隨著抗生素被廣泛和大量的使用，其毒副作用也凸現(xiàn)出來。長時間使用抗生素，可致人體菌群的紊亂，并且產生耐藥性，加大了二重感染的幾率，重者甚至可導致耳聾等癥狀的出現(xiàn)[2]。這些危害，給治療帶來了難以攻克的難題。中藥通過中醫(yī)“君、臣、佐、使”的配伍特點，發(fā)揮仙方活命飲的臨床功效。這也是應對目前多存在濫用抗菌素所帶來的耐藥等問題的研究方向，并有巨大的臨床意義[3]。對推動我國抗炎免疫藥理的發(fā)展及尋求更高效、低毒抗炎免疫藥物起著重要作用。作為清熱解毒的代表方仙方活命飲的臨床療效需要實驗室的驗證，對進一步了解其藥理機制有著十分重要的意義。

1 資料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 雄性C57BL/6小鼠，清潔級，體重：20~25 g（由南昌大學動科部提供）。在潔凈、溫度適中（飼養(yǎng)溫度控制在22~25℃）、空氣流通、相對濕度保持在50%~60%、無喧囂吵雜的環(huán)境中飼養(yǎng)3 d。I在小鼠適應飼養(yǎng)環(huán)境后，將行動自如、無明顯異常、狀態(tài)良好的30只雄性C57BL/6小鼠選為實驗小鼠。

1.1.2 主要藥品及試劑 仙方活命飲（白芷6 g，貝母12 g，防風12 g，赤芍藥12 g，當歸尾12 g，甘草節(jié)12 g，皂角刺12 g，穿山甲12 g，天花粉12 g，乳香12 g，沒藥12 g，金銀花18 g，陳皮18 g）由南昌市洪都中醫(yī)院藥房提供，批號：2016083012；雙黃連口服液10支，由河南竹林眾生制藥股份有限公司生產，批準文號：（國藥準字） Z10970127，包裝規(guī)格10支×10 mL。

二甲苯（許可證號：XK13-201-00153）購自西隴化工股份有限公司；生理鹽水購自四川科倫藥業(yè)有限公司。

1.1.3 主要實驗儀器及設備 AL104電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海） 有限公司），馬頭牌JYT-2架盤藥物天平（上海醫(yī)用激光儀器廠），YLS-Q4耳腫打孔器（淮北正華生物儀器設備有限公司），RE-52CS化驗室旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），手術剪、鑷子、灌胃針頭、10 mL移液管、燒杯、玻璃棒、量筒、1 mL注射器、12號針頭。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組 取30只雄性C57BL/6小鼠隨機均分3組：仙方活命飲組（實驗組）、雙黃連口服液組（陽性對照組）、生理鹽水組 (空白對照組）。

1.2.2 仙方活命飲炮制 仙方活命飲由白芷6 g，貝母12 g，防風12 g，赤芍藥12 g，當歸尾12 g，甘草節(jié)12 g，皂角刺12 g，穿山甲12 g，天花粉12 g，乳香12 g，沒藥12 g，金銀花18 g，陳皮18 g組成。利用南昌市洪都中醫(yī)院門診部藥房炮制方法：煎煮前用蒸飽水浸泡1 h。第1次加入中藥質量6倍的水（約900 mL），先武火煮至沸騰，再用文火煎30 min。收集水煎液用紗布過濾藥液。再加入4倍量水（約600 mL)，浸泡30 min，先武火煮沸后轉為文火煮30 min。收集水煎液用紗布過濾藥液。合并2次水煎液。用旋轉蒸發(fā)器將藥液濃縮成20 mL（即每毫升藥液含原生藥1 g）。0.1 MPa，120℃條件下滅菌15 min，裝瓶置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 小鼠耳腫脹實驗 1）抽取灌注液：用3支1 mL的注射器分別抽取灌胃液抽取實驗組仙方活命飲液0.5 mL、實驗組雙黃連口服液0.5 mL、生理鹽水0.5 mL。然后將注射器配灌胃的12號針頭備用。

2）小鼠灌胃：將實驗小鼠置于實驗臺上，左手的小指和環(huán)指夾住實驗小鼠的尾巴，另外3只手指固定小鼠的頸部，令小數(shù)的頭、頸和身體保持在一條直線上，并用力將小鼠身體拉直，力度適宜。右手持注射器，將灌胃針頭從小鼠的嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎，緩緩推入，進入食管后會有一種刺空感，進入食道后將藥液推注進小鼠體內。灌胃完畢后要輕輕撥出胃管，并要盡量保持原灌胃姿勢約30 s左右。

3）每次灌胃量為：0.5 mL/只，2次/d。連續(xù)5 d。

4）小鼠耳打孔：末次給藥30 min后，每只小鼠約用0.04 mL的二甲苯均勻涂擦在左耳前后兩面皮膚。1 h后頸椎脫臼處死3組小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，將A4紙墊于桌面，以直徑8 mm打孔器于兩耳相同部位沖出耳片。

5）稱重：現(xiàn)將空白A4紙放于天平上，將A4紙的重量稱出，記錄重量；將腫脹的左耳耳片置于天平，將重量記錄；將未涂二甲苯的右耳耳片置于天平，將重量記錄。將兩耳耳片記錄的重量均減去A4紙的重量后，為最終左、右耳片的重量。

1.3 統(tǒng)計分析方法 精確到0.0001 g。耳腫脹度=左耳片重-右耳片重；抑制率=(空白對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/空白對照組平均腫脹度×100%。運用SPSS 16.0 for Windows統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，均數(shù)±標準差 （x±s）表示參數(shù)，采用方差分析進行3組比較，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

表1 仙方活命飲對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

圖1 實驗各組對二甲苯所致小鼠腫脹度影響的比較

圖2 3組對二甲苯所致小鼠腫脹度升高的抑制率比較

由以上3張圖表可見生理鹽水組的小鼠耳腫脹度為（8.27±0.84） mg；仙方活命飲組的小鼠耳腫脹度為（5.92±0.99） mg；雙黃連口服液組的小鼠耳腫脹度為（5.83±1.33）mg。仙方活命飲組與生理鹽水組比較有顯著差異P=0.00（P<0.05）。雙黃連口服液組與生理鹽水組比較有顯著差異P=0.00（P<0.05）。而仙方活命飲組與雙黃連口服液組比較為無顯著差異P=0.853（P>0.05）。從實驗結果分析：（1）仙方活命飲組、雙黃連口服液組與生理鹽水組比較有統(tǒng)計學意義，仙方活命飲可降低小鼠耳腫脹。（2)仙方活命飲降低小鼠耳腫脹的作用與雙黃連口服液相近。

3 討論

目前學多研究者對仙方活命飲進行了系統(tǒng)性的研究，并取得一定的成果。研究顯示仙方活命飲除了有直接抑菌作用外，對于痛風、慢性骨髓炎、痤瘡等[61]多種疾病均有效，進一步說明了祖國醫(yī)學里“異病同治”的科學性，因為中醫(yī)講究辨證論治，但功效如此強大的仙方活命飲現(xiàn)代醫(yī)學機制尚不明確。本次實驗采用經方仙方活命飲對于體內抗炎、體外抑菌研究，目的在于通過抗炎和抑菌效果的觀察對于其機理做一個探索性研究，為圍手術期感染的預防以及外科感染的治療療效進行驗證，開創(chuàng)了抗炎的新理念、新方法。

臨床上，對嚴重耐藥菌的感染，西醫(yī)臨床缺乏有效手段，而清熱解毒藥與抗生素聯(lián)合應用，既可利用抗生素的藥理機制強效消滅細菌的功效，又可以使中醫(yī)清熱解毒藥發(fā)揮將熱毒外達于體外，加強自身免疫力的功效，做到菌毒并治，發(fā)揮祛邪不傷正的效果。有相關研究報道顯示，中醫(yī)清熱解毒藥不僅可以降低人體對藥物的耐藥性，還能加強抗生素的殺菌功效。尤其是組方或者經方，通過中醫(yī)自身的配伍特點可大大提高藥效，同時降低人體耐藥性的產生，并對耐藥菌的增敏有逆轉作用。

通過小鼠耳腫脹實驗，證明仙方活命飲對小鼠耳炎性水腫有顯著的抑制作用，但本實驗由于時間比較有限，樣本數(shù)量限制，實驗經驗的缺乏，實驗條件限制，以及尚無免疫調節(jié)機制的進一步研究?？赡軐嶒灲Y果會有一些不可避免的誤差，但如果該結論成立，我們就能夠很好地解決細菌耐藥問題，運用中醫(yī)學的方法開辟抗炎新局面[4]。下一步研究工作就是在科學的方法指導下，建立合理的研究模型，進一步證明其作用機制。在抗生素濫用、“超級細菌”[5]產生的嚴峻形勢下，開辟抗炎新模式、新方法，更好地繼承和發(fā)揚中醫(yī)學。

[1]李繼勇，王滿貞，陳義祥.圍手術期抗菌藥物合理應用探討[J].2012，18（35）：133-135.

[2]孫濤.抗生素的使用與細菌耐藥性[J].中國臨床藥理學雜志，2014，30(2):151-155.

[3]高雪，韓霞.仙方活命飲臨床治驗[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17(1):79-79.

[4]葉桂彩.中醫(yī)醫(yī)院抗菌藥物臨床應用現(xiàn)狀調查分析[J].當代醫(yī)學:學術版，2008(1)：93-95.

[5]張巍，韓光宇.濫用抗生素催生“超級細菌”[J].中國醫(yī)藥指南，2012，10(11):376-377.

Experimental Study on Anti-inflammatory Effect of Xianfang Huoming Drink

ZHOU Ming,ZOU Wen,FAN Shaoyong,HOU Huiming
(Department of Orthopedics,Hongdu Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Nanchang 330006,China)

Objective Through the mouse ear swelling test,we made an exploratory research on Xianfang Huoming drink,and put forward new ideas for the prevention and treatment of anti inflammation,new method.Methods 30 mice were randomly divided into blank group (normal saline),experimental group (Xianfang Huoming drink)and positive control group (Shuanghuanglian oral liquid).We observed anti-inflammatory action of Xianfang Huoming drink through the model of xylene-induced ear edema in mice.Results There was significant difference between experimental group and blank control group on determination of edema of mouse ear(P<0.05).There was significant difference between the positive control group and the control group on determination of edema of mouse ear (P<0.05).There was no significant difference between the experimental group and the positive control group on determination of edema of mouse ear (P>0.05).Conclusion Xianfang Huoming drink could significantly inhibite inflammatory edema of mouse ear.The Xianfang Huoming drink had antibacterial anti-inflammatory effect.It could provide a theoretical basis for the clinical application of detoxification method,and is expected to be an usher in a new era of anti-bacterial anti-inflammatory drugs.

clearing heat-toxicity;antibiotic;Xianfang Huoming drink;experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.19.063

1672-2779（2017）-19-0143-03

江西省衛(wèi)生計生委中醫(yī)藥科研課題【No.2016B103】

2017-08-24）