胡曉妹，謝媛媛，劉明穎，王義明，梁瓊麟，羅國安

基于超高效液相色譜的清開靈注射液多指標成分定量指紋圖譜研究

胡曉妹，謝媛媛，劉明穎，王義明，梁瓊麟，羅國安

本研究在清開靈注射液高效液相色譜指紋圖譜分析方法基礎上，基于超高效液相色譜，建立清開靈注射液多波長多指標成分定量指紋圖譜分析方法。遵循Lc/dp（色譜柱柱長/填料粒徑）相近以獲取與HPLC相近的柱效和分離效果的原則選擇色譜柱，并以分離度、理論塔板數和拖尾因子等系統(tǒng)適用性參數為指標，優(yōu)化調整流速、柱溫、進樣體積、梯度時間、梯度陡度和采樣頻率等色譜條件，同時測定了清開靈注射液中尿苷、鳥苷、腺苷、色氨酸、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷和咖啡酸等成分含量。實驗結果表明，經方法轉換建立的清開靈注射液超高效液相色譜分析方法可用于其化學成分的全息定量表征，方法快速、準確、靈敏度高。本研究為其他中藥復雜物質體系HPLC和UHPLC分析條件相互轉換提供理論和實驗依據。

清開靈注射液；高效液相色譜；超高效液相色譜；指紋圖譜；多指標成分定量

清開靈注射液是由《溫病條辯》中傳統(tǒng)名方安宮牛黃丸拆方改制而成的現(xiàn)代中藥制劑，具有清熱解毒，化痰通絡，醒神開竅的功效。對急、慢性肝炎，乙型肝炎，上呼吸道感染，肺炎，高燒，以及腦卒中、腦血栓形成、腦出血等臨床病癥療效確切，為國家基本藥物、國家醫(yī)保目錄藥品，被國家中醫(yī)藥管理局定為中醫(yī)臨床急診科必備藥，亦為國家衛(wèi)生和計劃生育委員會列入治療人禽流感診療方案治療用藥[1]。清開靈注射液由金銀花、板藍根、梔子、水牛角、珍珠母、膽酸、豬去氧膽酸和黃芩苷等藥材或提取物組成，是目前市售組方最為復雜的中藥注射劑。自1999年起本課題組在清開靈注射液化學物質基礎表征方面進行了大量研究，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射技術、高效液相色譜-二極管陣列檢測及高效液相色譜-二極管陣列檢測-蒸發(fā)光散射聯(lián)用技術等建立了清開靈注射液多指標成分定量指紋圖譜，并利用液相-質譜聯(lián)用在線分析鑒定結合植物化學分離等手段對清開靈注射液中盡可能多的化學成分，通過多種分析表征方法，共鑒定了清開靈注射液中40多種有機化合物的結構，基本闡明了清開靈注射液的化學組成[2～7]。

超高效液相色譜（UHPLC：Ultra High Performance Liquid Chromatography）是使用超高效填料（例如亞二微米填料）的技術，是近年發(fā)展最迅速的液相色譜（HPLC：High Performance Liquid Chromatography）領域之一。UHPLC越來越多地在中藥分析領域得到了廣泛應用，其更高的分離度、更快的分析速度為中藥分析，特別是為成分極其復雜的藥材及中成藥分析帶來了更好的解決方案。本研究以清開靈注射液為研究對象，將其HPLC指紋圖譜分析方法轉換為UHPLC指紋圖譜分析方法，同時測定清開靈注射液中8種主要代表性化合物——尿苷、腺苷、鳥苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸的含量，探討中藥復雜物質體系HPLC指紋圖譜分析方法與UHPLC分析條件相互轉換時需遵循的原則和規(guī)律，以及需重點關注和調整的參數，以期為其他中藥復雜物質體系UHPLC分析條件的建立提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

液相色譜系統(tǒng)（HPLC系統(tǒng)）：Agilent1200高效液相色譜儀：包括在線真空脫氣機（G1322A）、低壓二元梯度泵（G 1 3 1 2 A）、自動進樣器（G1329A）、柱溫箱（G1316A）、二極管陣列檢測器（G1315D）和Agilent化學工作站（美國Agilent）；超高效液相系統(tǒng)：Agilent1290高效液相色譜儀（UHPLC系統(tǒng)），包括高壓二元梯度泵（G4220A）、自動進樣器（G4226A）、柱溫箱（G1316C）、二極管陣列檢測器（G4212A）和安捷倫OpenLAB CDS ChemStation工作站；色譜柱：Agilent Zorbax StableBond-C18色譜分析柱（4.6×250 mm, 5μm）；Agilent Zorbax StableBond-C18 RRHD色譜分析柱（2.1×100 mm, 1.8μm）；Milli-Q Synthesis超純水純化系統(tǒng)（美國密理博公司）；XS105 型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 對照品

尿苷（含量測定用，純度大于98%，批號：887-200202）、腺苷（含量測定用，純度大于98%，批號：110879-200202）、綠原酸（含量測定用，純度大于98%，批號：110753-200413）、梔子苷（含量測定用，純度大于98%，批號：110749-200714）購于中國食品藥品檢定研究院；(R,S)-告依春（含量測定用，純度大于98%，批號：1072-93-1）、京尼平龍膽二糖苷（含量測定用，純度大于98%，批號：110427）和咖啡酸（含量測定用，純度大于98%，批號：110807）購于四川維克奇生物科技有限公司；鳥苷（含量測定用，純度大于98%，批號：0193）；色氨酸（含量測定用，純度大于98%，批號：091103001）購于日本和光純藥株式會社。

1.3 試劑

乙腈和甲醇均為色譜純，購自德國Merck公司，甲酸（99%）購自美國J.T. Baker公司；其他試劑均為分析純，購自國藥化學試劑公司；超純水（18Ω）由Milli-Q系統(tǒng)制備。

1.4 樣品

清開靈注射液為來源于3個不同生產企業(yè)的市售產品，共計45批，批號見表1。

2 方法

2.1 色譜條件

HPLC指紋圖譜分析條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱：Agilent Zorbax StableBond-C18色譜柱（250 × 4.6 mm，5 μm）；流動相A相為含0.1%甲酸的水溶液，B相為乙腈；梯度洗脫（0～42 min, 1-12%B; 42～65min, 12-19%; 65～75min,19-100B%）；流速為0.8 mL．min-1；柱溫為25 ℃；進樣量為10 μL，HPLC色譜指紋圖譜見圖1-A所示。

圖 1 254nm下清開靈注射液HPLC –UV指紋圖譜（A）和UHPLC-UV指紋圖譜（B）.

UHPLC指紋圖譜分析條件 由HPLC分析方法向UHPLC轉換過程中，遵循Lc/dp（色譜柱柱長/填料粒徑）相近以獲取與HPLC相近的柱效和分離效果的原則，選取了粒徑為1.8μm相同類型填料的色譜柱，規(guī)格為2. 1×100mm（Lc/dp=55.6）。并在參照Agilent Method Translator and Cost Savings Calculator軟件和文獻[8]中相關公式計算的基礎上，對流速、進樣體積、梯度時間和梯度坡度等進行適當優(yōu)化。色譜柱：Agilent Zorbax StableBond-C18色譜柱(2.1×100 mm，1.8μm)；流動相：A 0. 1%甲酸-水，B 乙腈；梯度洗脫（0～10. 5min, 1-12%B; 10. 5～16. 5min, 12-19%; 16.5～20 min, 19-60B%）；流速：0.4 mL．min-1；柱溫：25℃；檢測波長：254 nm，采樣頻率：80 Hz，進樣量為0.5 μl，HPLC色譜指紋圖譜見圖1-B所示。

2.2 對照品溶液制備方法

取尿苷、腺苷、鳥苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL 含0. 176 4 mg鳥苷，0. 290 4 mg腺苷，0. 300 1 mg尿苷，0. 080 2 mg綠原酸，1. 279 6 mg梔子苷，0. 291 1 mg京尼平龍膽二糖苷，0. 095 68 mg咖啡酸和0. 756 mg色氨酸的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備方法

清開靈注射液用0.45μm濾膜過濾后，直接進樣。

2.4 測定方法

精密吸取各對照品溶液和供試品溶液進樣分析，獲取清開靈注射液指紋圖譜，以梔子苷的色譜峰為標準峰，其余峰的保留時間和峰面積與之比值分別為相對保留時間和相對峰面積；并以外標法計算尿苷、腺苷、鳥苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸的含量。

3 結果

3.1 UHPLC指紋圖譜分析

中藥指紋圖譜分析方法的精密度、重復性及穩(wěn)定性的建立方法與常規(guī)分析測定相似。但在中藥指紋圖譜的應用中，這三者認定分為整體和部分兩個方面，前者包括測定圖譜之間的整體相似性考察；后者為指標成分或共有峰的相對保留時間與相對積分面積的考察。本研究分析了37批清開靈注射液，確定其中12個峰為清開靈注射液指紋圖譜共有峰，占總峰面積的95%以上。通過對指紋圖譜精密度、重復性、穩(wěn)定性考察，證明此方法穩(wěn)定、可信，可作為清開靈注射液指紋圖譜分析方法。

3.1.1 精密度試驗 主要考察儀器的精密度。取MX120532批號的清開靈注射液供試品，連續(xù)進樣6次，記錄各共有色譜峰的保留時間和積分面積，以梔子苷峰（11號峰）的保留時間與積分面積為參照，換算出各共有峰的相對保留時間和相對積分面積，以考察色譜峰的相對保留時間、相對峰面積比值的一致性。各共有峰的相對保留時間的 RSD 為0.02% ～ 0.62%，相對峰面積的 RSD 值為0.25% ～3.92%，相對保留時間和相對峰面積RSD值均小于5.0%，表明方法采用的UHPLC儀器及整體系統(tǒng)精密度良好，分析結果穩(wěn)定、可信。

3.1.2 重現(xiàn)性試驗 主要考察實驗方法的重現(xiàn)性。取MX120532批號的清開靈注射液供試品6批，記錄各共有色譜峰的保留時間和峰面積，以梔子苷峰（11號峰）的保留時間與峰面積為參照，換算出各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，以考察色譜峰的相對保留時間、峰面積比值的一致性。各共有峰的相對保留時間的 RSD 為 0. 02% ～ 0. 52%，相對峰面積的 RSD 值為 0. 51% ～ 4. 92%，相對保留時間和相對峰面積RSD值均小于5. 0%，表明方法重現(xiàn)性良好，利于推廣。

3.1.3 穩(wěn)定性試驗 主要考察供試品溶液的穩(wěn)定性。取MX120532批號的清開靈注射液供試品，分別在8小時之內不同時間連續(xù)進樣檢測，記錄各共有色譜峰的保留時間和積分面積，以梔子苷峰（11號峰）的保留時間與峰面積為參照，換算出各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，考察色譜峰的相對保留時間、峰面積比值的一致性。各共有峰的相對保留時間的 RSD 為 0. 03% ～ 0. 65%，相對峰面積的RSD 值為 0. 24% ～ 3. 54%，相對保留時間和相對峰面積RSD值均小于5. 0%，結果表明，經制備的樣品在常溫實驗條件下穩(wěn)定性較好，在8h時間能保證實驗結果的科學可靠。

3.1.4 UHPLC指紋圖譜相似度評價 典型指紋圖譜的生成是通過一系列樣品的指紋圖譜研究，從中選擇一個具有典型意義或有代表性的指紋圖譜作為對照譜，或是把指紋圖譜的共有峰的相對保留值作為對照，還可以采用數據（平均矢量或中位數矢量）綜合所有樣品信息的方法模擬生成的對照指紋圖譜。清開靈注射液的對照指紋圖譜采用多樣本中位數矢量綜合作為共有模式矢量，避免了多樣本中超常樣本的不良影響，使實驗結果更加穩(wěn)健可行。采用色譜圖相似度(similarity)作為指紋圖譜評價指標。數據生成采用藥典委指定的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》。45批不同批次清開靈注射液提取液以藥典委指紋圖譜軟件為評價工具采用中位數的原則擬合生成對照指紋圖譜。利用上述指紋圖譜測定方法，測定了37批次清開靈注射液，用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》生成的對照指紋圖譜作為參照，計算每個樣品指紋圖譜的相似度，結果如表1所示。

表1 45批清開靈注射液的相似度及其中8個活性成分的含量

N.D. no detected.

3.2 清開靈注射液多波長多指標成分含量測定

3.2.1 檢測波長的選擇 在紫外光譜200-400 nm 下掃描最大吸收波長（λmax）。其中尿苷和腺苷的最大吸收波長均為260 nm，鳥苷的最大吸收波長為254nm，綠原酸和咖啡酸的最大吸收波長為330 nm，色胺酸的最大吸收波長為280 nm，梔子苷和京尼平龍膽二糖苷的最大吸收波長為240 nm。根據中藥指紋圖譜“信息最大化原則”，選擇254 nm為指紋圖譜的測定波長；同時，根據待測化合物不同的光譜特性，建立了在4個不同紫外檢測波長下，同時定量測定四類組分，8個成分的多波長多指標成分定量分析方法，選取240 nm作為梔子苷、京尼平龍膽二糖苷含量測定的檢測波長，254 nm作為尿苷、腺苷和鳥苷等核苷類成分測定的檢測波長，280 nm作為色氨酸含量測定的檢測波長，330 nm作為綠原酸和咖啡酸的測定波長。不同波長下的多指標成分定量指紋圖譜如圖2所示。

3.2.2 線性關系考察 精密吸取各濃度混合對照品溶液，按清開靈注射液UHPLC含量測定色譜條件進樣分析。以峰面積（Y）對對照品質量濃度（X，μg．mL-1）進行線性回歸，各指標成分的回歸方程、相關系數、線性范圍見表1。采用信噪比法測定8個成分的檢測限（以信噪比為3∶1）及定量限（信噪比為10∶1），將鳥苷、尿苷、腺苷、色氨酸、綠原酸、咖啡酸、京尼平龍膽二糖苷和梔子苷的對照品溶液分別稀釋不同倍數后，測定檢測限及定量限，結果見表2所示。

圖2 4個波長下混合對照品溶液和清開靈注射液的UHPLC色譜圖.

表2 線性回歸曲線，線性范圍，最低定量限和最低檢測限

3.2.3 精密度實驗 精密吸取清開靈注射液樣品供試液（MX120532）0.5 μL，連續(xù)進樣測定6次，計算鳥苷、尿苷、腺苷、色氨酸、綠原酸、咖啡酸、京尼平龍膽二糖苷和梔子苷峰面積的RSD分別為1. 62%、1. 06%、1. 30%、1. 64%、1. 91%、2. 72%、1. 93%和1. 21%，結果表明儀器精密度良好。

3.2.4 穩(wěn)定性實驗 精密吸取室溫下放置的同一清開靈注射液樣品供試液（MX120532）0.5 μL，分別于制備后0，1，2，4，6和8 h進樣分析，結果樣品中鳥苷、尿苷、腺苷、色氨酸、綠原酸、咖啡酸、京尼平龍膽二糖苷和梔子苷峰面積的RSD分別為1. 02%、1. 57%、2. 36%、2. 08%、2. 19%、2. 90%、2. 35%和2. 23%，結果表明供試品溶液在8 h內穩(wěn)定。

3.2.5 重復性試驗 取清開靈注射液（MX120532），平行制備6份供試品溶液，按清開靈注射液UHPLC含量測定色譜條件進樣分析，每份測定3次，并計算尿苷、腺苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸等8種指標成分的含量，RSD均小于3. 5%，表明該UHPLC含量測定方法重現(xiàn)性良好。

3.2.6 加樣回收率試驗 取已知含量的清開靈注射液（MX120532），共6份，分別精密加入混合對照品溶液適量，按上述供試品溶液制備方法項下制備供試品溶液，按測定法進樣分析，尿苷、鳥苷、腺苷、色氨酸、綠原酸、咖啡酸、京尼平龍膽二糖苷和梔子苷的平均回收率（n=6）分別為99. 6%、102.5%、99. 4%、99. 0%、98. 7%、99. 7%、103. 4%和99. 5%，RSD均小于4%，表明該UHPLC含量測定方法準確度良好。

3.2.7 含量測定 取不同廠家、不同批號的清開靈注射液，清開靈注射液UHPLC含量測定色譜條件進樣分析，外標一點法計算尿苷、腺苷、鳥苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸等8種指標成分含量，含量測定結果見表1。

4 討論

UHPLC所遵循的原理與HPLC相同，因此所有HPLC適用的理論及經驗公式在UHPLC上都適用。比如：柱效的計算。另外，如果想很好、很順暢地把一個傳統(tǒng)的HPLC方法向UHPLC方法轉移，色譜柱的選擇是個關鍵因素。亞二微米的UHPLC色譜柱填料的化學性質一定要與原來的HPLC填料一致。從使用者角度，必須選擇同一品牌、同一化學性質的色譜柱來確保分離選擇性的一致，保證結果最小的可變性。為估算不同顆粒度填料的色譜柱的柱效，可根據由計算柱效的公式近似而來的概念，即：在柱長除以顆粒度（L/dp）的數值相當時，其兩根色譜柱的柱效也相當。所以，我們假定L/dp ≈k?N（k為常數）。如果打算提高分離度，必須使L/dp值比原來更高。想要保持分離度相當，則需要保持L/dp比值不變。為此，在方法轉換過程中，我們選擇了與HPLC分析相同的色譜柱，即均為Agilent Zorbax StableBond-C18色譜柱，并根據Lc/dp（色譜柱柱長/填料粒徑）為常數的原則，確定色譜柱規(guī)格為2.1×100mm（Lc/dp=55.6）。

使用小體積色譜柱時，數據采集速率是“人為”峰展寬的常見原因。對于快速洗脫的色譜峰，要確保在色譜峰上收集到足夠的數據點，數據系統(tǒng)才能準確測定出峰寬、峰面積和保留時間。如果得到的數據點太少（如低數據采集速率），色譜峰就會顯得比其實際要寬。而因為常規(guī)高效液相色譜柱體積較大，數據采集速率對峰寬的影響可忽略不計。為此，本研究在新的梯度條件下考察了不同數據采集速率（160Hz，80Hz，40Hz，20Hz，10Hz和5Hz）對分離性能的影響。結果表明，除鳥苷外，清開靈注射液中其他主要成分的理論塔板數隨數據采集速率的不同，變化不大，而在數據采集速率為40Hz時，鳥苷的理論塔板數最大；而不同數據采集速率對各個主要成分的拖尾因子影響較大，各成分在數據采集速率為40Hz時，各成分拖尾因子最大；因此，綜合考慮理論塔板數（柱效）和拖尾因子（色譜峰峰型）等因素，本研究采樣頻率設定為80Hz。

以清開靈注射液中尿苷、腺苷、鳥苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸等8個成分為指標對方法轉換前后色譜峰參數進行了比較研究。將HPLC方法轉換為UHPLC方法后，分析時間由原來的80分鐘縮短到UHPLC分析的20分鐘，且分離度優(yōu)于HPLC分析方法；以梔子苷為指標成分，對HPLC和UHPLC的峰容量進行比較，峰容量按如下公式計算：P=1+tG/W(P：峰容量，tG：梯度變化時間，W：峰寬)。結果PHPLC=128，PUHPLC=108；可見方法轉換前后柱效與拖尾因子并未見明顯改善，推測與色譜柱的選擇有關：本研究中HPLC分析所用色譜柱為Agilent Zorbax StableBond-C18 (4.6×250mm, 5μm, Lc/dp=50)，而進行方法轉換時，UHPLC所用色譜柱為粒徑為1.8μm相同類型填料的色譜柱，其規(guī)格為2.1×100mm (Lc/dp=55.6)，轉換前后所用色譜柱的Lc/dp相近，柱效并未提高。

本研究測定了來自不同廠家、不同批號的45批清開靈注射液樣品中尿苷、腺苷、鳥苷、綠原酸、梔子苷、京尼平龍膽二糖苷、咖啡酸和色氨酸等8個指標成分的含量，他們分別來自板藍根、金銀花和梔子等三味植物來源的藥材。本研究采用質量均勻化參數P值表征不同廠家、不同批次樣品質量波動情況。

Ci代表供試樣品中被測成分的含量，而Ci代表45批供試樣品中被測成分平均含量。圖3箱式圖所示為45批被測樣品中8種指標成分及相似度P值變化浮動范圍。

圖3 45批清開靈注射液相似度及8種活性成分含量箱線圖

從指紋圖譜的相似度來看，除了來源于C廠的12013008批樣品外，其余批次樣品指紋圖譜相似度在0. 905～0. 985之間，相似度RSD（%）為4. 73%，因此從整體性來看不同廠家清開靈樣品化學物質組成較一致。國家藥典委員會公示的清開靈注射液質量標準中，除規(guī)定了黃芩苷、膽酸和豬去氧膽酸等3個以純度大于90%提取物為原料的指標成分外，僅規(guī)定了來源于梔子的梔子苷的含量應不少于0.1 mg/mL。由此可見，本研究中45批清開靈注射液均符合公示標準的要求。然而，尿苷等8個指標成分的含量在不同批次樣品間變化較大，各指標成分含量RSD（%）在15. 58%～51. 00%之間，上述結果提示不同廠家在原料產地、生產工藝上可能會存在差異。眾所周知，化學成分是中藥注射液發(fā)揮藥效的物質基礎，化學成分含量的高低無疑會影響其藥效及安全性，而指標成分的選擇也將影響質量控制的效果。本研究通過多波長多指標成分定量指紋圖譜，測定了來源于梔子、板藍根和金銀花等3個植物藥材中8個指標成分的含量，為實現(xiàn)清開靈注射液質量全面控制奠定了基礎。

[1] Luo GA, Liang QL, Wang YM. Traditional Chinese Medicine Fingerprint- Quality evaluation, Quality control and R&D of new drugs [S]. Beijing: Chemical Industry Press, 2009.

[2] Luo GA, Liang QL, Wang YM, Liu QF. Systems Biology of Traditional Chinese Medicine [S]. Beijing: Science Press,2010.

[3] Yan SK, Luo GA, Wang YM, Cheng YY. Simultaneous determination of nine components in Qingkailing injection by HPLC/ELSD/DAD and its application to the quality control[J].J. Pharm. Biomed. Anal., 2006, 40 (4): 889-895.

[4] Zhang HY, Hu P, Luo GA, Liang QL, Wang YL, Yan SK,Wang YM, Screening and identification of multi-component in Qingkailing injection using combination of liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry and liquid chromatography/ion trap mass spectrometry[J]. Anal. Chim.Acta. 2006, 577: 190-200.

[5] 曹進,徐燕,張永知,王義明,羅國安.清開靈注射液HPLC/ELSD指紋圖譜建立及質量相關性研究[J].分析化學,2004,32(4):469-473.

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[7] 曹進,徐燕,王義明,羅國安.多波長高效液相色譜法測定清開靈注射液中3種有效成分[J].藥物分析雜志, 2004, 24(1):8-11.

[8] Guillarme D, Veuthey J–L. Guidelines for the use of UHPLC Instruments. www.perkinelmer.com.

(責任編輯：蔣淼）

Multi-component quanti fi cation fi ngerprinting method of Qingkailing injection by UHPLC/

HU Xiao-mei, XIE Yuanyuan, LIU Ming-ying, WANG Yi-ming, LIANG Qiong-lin, LUO Guo-an//(Department of Chemistry, Tsinghua University, Beijing 100084, China)

This study was to establish a multi-component quanti fi cation fi ngerprinting method of Qingkailing injection by UHPLC on the basis of the published HPLC method. The selection of UHPLC column followed the principle that the ratio between Lc (length of the column) and dp (partical size) was a constant. And the fl ow rate, oven, injection volume, elution gradient and data acquisition frequency were optimized to get good resolution and theoretical plate number. And the contents of 8 main components including uridine, vernine, adenosine, tryptophan, chlorogenic acid, geniposide, genipin 1-gentiobioside and caffeci acid in Qingkailing injection were detected by UHPLC at different wavelength. The results indicated that the established fingerprint chromatography by UHPLC could be used to quantificationally represent the holistic chemical information of Qingkailing Injection. And this study provides theoretical and experimental basis for the analysis method transformation between HPLC and UHPLC of other Traditional Chinese medicine complex material system.

Qingkailing injection; HPLC; UHPLC; fi ngerprint; multi-component quanti fi cation

R 284.1

A

1674-926X(2016)06-008-07

國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(2014ZX09201-022-005)

清華大學化學系，北京 100084

胡曉妹（1989-），女，碩士研究生，主要從事中藥質量控制方面的研究

Tel:(010) 62772265 Email:423869972@qq.com

謝媛媛（1980-），女，博士，高級工程師，主要從事中藥質量控制方面的研究

Tel:(010) 62772265 Email:yuanyuan8078@gmail.com

2016-02-10