黃再?gòu)?qiáng)，張燕飛，陳玲，王馨瑤，謝云彤，馬逾英

川產(chǎn)葛根、粉葛總黃酮和多糖含量的對(duì)比分析

黃再?gòu)?qiáng)，張燕飛，陳玲，王馨瑤，謝云彤，馬逾英

目的：對(duì)四川不同產(chǎn)地、來(lái)源的葛根、粉葛藥材進(jìn)行總黃酮和多糖含量測(cè)定，并對(duì)比分析其異同。方法：采用紫外分光光度法（UV），葛根素作對(duì)照，250 nm 波長(zhǎng)測(cè)定總黃酮含量；葡萄糖作對(duì)照，490 nm波長(zhǎng)測(cè)定多糖含量；采用聚類分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果：不同產(chǎn)地、來(lái)源的葛根、粉葛藥材中總黃酮和多糖含量存在差異。粉葛以1、2、8、9、13、16樣品含量較高，分別產(chǎn)自廣元、簡(jiǎn)陽(yáng)、江油、射洪、資陽(yáng)，峨眉葛人工栽培品種總黃酮和多糖含量與粉葛相近；葛根以32～37樣品含量較高，分別產(chǎn)自平武、青川、北川，葛根多糖含量無(wú)明顯差異。聚類分析結(jié)果與數(shù)據(jù)分析結(jié)果相符。結(jié)論：四川不同產(chǎn)地、來(lái)源的葛根、粉葛藥材總黃酮和多糖含量存在差異。該研究為川產(chǎn)葛根類藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)及栽培選址提供了參考依據(jù)。

葛根；粉葛；總黃酮；多糖；紫外分光光度法

2015年版《中國(guó)藥典》收載葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根，粉葛為同屬植物甘葛藤Pueraria thomsoniiBenth. 的干燥根[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2]，同屬其他植物在部分區(qū)域也作中藥葛根或粉葛使用。川產(chǎn)葛根類藥材資源豐富，除上述藥典收載品種外，尚有以野生或栽培的峨眉葛（Pueraria.omeiensisWang et Tang）做粉葛使用，并有商品藥材。

目前葛根、粉葛的成分含量、藥理作用及質(zhì)量研究主要集中在野葛和甘葛藤[3～6]，尚見(jiàn)將同屬其他在部分區(qū)域也作中藥葛根或粉葛使用的品種進(jìn)行比較研究。現(xiàn)行版藥典中僅以葛根素含量為指標(biāo)控制葛根、粉葛藥材的質(zhì)量，單一成分含量并不能完全反應(yīng)藥材質(zhì)量的優(yōu)劣及臨床療效?？傸S酮和多糖是葛根、粉葛中主要的兩大類成分，具有較好的藥理作用，且含量較高，其在藥材質(zhì)量方面的影響不可忽略，且目前尚見(jiàn)相關(guān)研究。故實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法，通過(guò)測(cè)定四川不同產(chǎn)地、不同來(lái)源的葛根和粉葛藥材中總黃酮及多糖含量，并進(jìn)行對(duì)比分析，為川產(chǎn)葛根類藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)及栽培選址提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

葛根素對(duì)照品（純度99.71%，中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所，批號(hào): MUST-16011207），無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（純度99.78%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào): MUST-12122601），實(shí)驗(yàn)涉及試劑苯酚、硫酸等試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)樣品共71批（見(jiàn)表1），其中自采產(chǎn)地對(duì)口藥材44批，均于2015年10 ～12月采自四川各產(chǎn)地，商品藥材27批，均于2016年3月購(gòu)于成都荷花池藥材市場(chǎng)。經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院盧先明、馬逾英教授鑒定品種，1～18、45～ 48、50、51、53～61號(hào)來(lái)源于甘葛藤Pueraria.lobata var.thomsoniiBenth；18～31、49、52號(hào)來(lái)源于峨眉葛Pueraria.omeiensisWang et Tang（作粉葛使用）；31～44、62～71來(lái)源于野葛Pueraria.lobata(Willd)Ohwi。

1.2 儀器

A580型外可見(jiàn)分光光度計(jì)（翱藝儀器有限公司），電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），SB-3200DTD型超聲儀（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司），HWS-26型電恒溫水浴鍋（上海一恒科技有限公司），SHB-III型循環(huán)水式多用真空泵 （鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京中星偉業(yè)儀器有限公司），RE-5203型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

表1 藥材樣品信息表

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取葛根素對(duì)照品適量，用50 % 乙醇制成60.40 μg．mL-1的溶液，備用。

精密稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，用蒸餾水制成0.5080 mg．mL-1，低溫保存，備用。

2.2 葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精密移取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量置于10 mL容量瓶中，用50 % 乙醇稀釋至刻度，波長(zhǎng)250 nm 測(cè)定吸光度。曲線回歸方程為：A=0.06073 C+0.24791，R2=0.9999，表明葛根素在1.208 ～ 14.49 μg．mL-1線性良好。

2.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

采用硫酸-苯酚法，取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液適量置于試管中，用水補(bǔ)足至2 mL，空白組加水2 mL，加5%苯酚2 mL，迅速加入98% 濃硫酸5 mL，放置5 min，置沸水中加熱15 min，波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)吸光度。曲線回歸方程為：A=6.143 C+0.1481，R2=0.9998，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.02541 ～ 0.2540 mg．mL-1線性良好。

2.4 供試品溶液的制備

2.4.1總黃酮供試品溶液制備 稱取樣品適量0.5 g，加50% 乙醇100 mL，稱重，50℃超聲提取30 min，冷卻，補(bǔ)足重量，過(guò)濾即得。精密移取粉葛黃酮提取濾液400 μl，用容量瓶稀釋至10 mL；精密移取葛根黃酮提取濾液100 μl，稀釋至25 mL，備用。

2.4.2 多糖供試品溶液制備 采用水提醇沉法，稱取樣品2 g，按料液比1：40，80℃超聲提取兩次，每次0.5 h。冷卻，離心，濃縮，加95 % 乙醇適量，靜置過(guò)夜，真空抽濾，烘干，即得多糖提取樣品。將提取得到的多糖樣品加熱水溶解，過(guò)濾，用容量瓶定溶稀釋至50 mL，備用。

2.5 方法學(xué)考察

試驗(yàn)進(jìn)行了精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性考察，RSD（n=7）值均小于0.5%，此儀器精密度較好，符合要求；葛根素和葡萄糖溶液在30h內(nèi)，穩(wěn)定性良好；該方法重復(fù)性良好。本試驗(yàn)還進(jìn)行了加樣回收率考察，總黃酮的加樣平均回收率為99.12 %；多糖的加樣平均回收率為99.61% ，RSD（n=7）值均小于0.35%，說(shuō)明此方法回收率良好，方法可行。

2.6 含量測(cè)定

按2.4項(xiàng)下樣品處理方法進(jìn)行，平行3份，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表3，粉葛總黃酮含量為0.14% ～ 0.62%，多糖含量為30.14% ～ 60.74%，以1、2、8、9、13、16樣品含量較高，分別產(chǎn)自廣元、簡(jiǎn)陽(yáng)、江油、射洪、資陽(yáng)；峨眉葛總黃酮含量為0.29% ～ 2.54% ，多糖含量18.42% ～ 50.18% ，峨眉葛人工栽培品種總黃酮和多糖含量與粉葛相近；葛根總黃酮含量為3.36%～ 9.54% ，多糖含量為11.03% ～ 22.10% ，以32 ～ 37樣品含量較高，分別產(chǎn)自平武、青川、北川。葛根總黃酮含量比粉葛高，相差近40倍，粉葛多糖含量高于葛根，相差可達(dá)6倍。粉葛商品藥材，總黃酮含量為0.12% ～ 0.65% ，多糖含量為27.10% ～ 65.94%；葛根商品藥材總黃酮含量為3.28% ～ 9.21% ，多糖含量為11.21% ～ 20.89% 。商品藥材與產(chǎn)地對(duì)口藥材總黃酮和多糖含量情況相符。

表2 樣品總黃酮和多糖含量（n=3）

150.370243.26337.91018.42510.512161.21693.28111.21 160.560355.67347.92118.17520.471148.23703.44217.61 170.240455.58358.11122.10530.381227.06713.30116.95 180．350042．64369．54011．03540．340127．10

2.7 聚類分析

以總黃酮含量和多糖含量，通過(guò)SPSS 22 軟件進(jìn)行聚類分析，采用組間平均連接聚類，平方Euclidean 距離作為樣品聚類公式，聚類結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。聚類結(jié)果將不同來(lái)源粉葛樣品分為三類，總黃酮和多糖含量順序?yàn)镮I ＞ I ＞ III。野生峨眉葛分布在I和III類中，人工栽培峨眉葛分布在I類中，人工栽培峨眉葛與粉葛沒(méi)有明顯的單獨(dú)聚分類，表明兩個(gè)品種總黃酮和多糖含量相近。聚類結(jié)果將個(gè)產(chǎn)地對(duì)口的葛根藥材分為四類，總黃酮和多糖含量順序?yàn)镮I ＞I ＞ IV ＞ III。聚類將粉葛商品藥材分為三類，總黃酮和多糖含量順序?yàn)镮I ＞ I ＞ III，熏硫粉葛在III類占比例較大；聚類將葛根商品藥材分為兩類，總黃酮和多糖含量順序?yàn)镮 ＞ II ，與數(shù)據(jù)分析結(jié)果相符。

圖1 產(chǎn)地對(duì)口藥材聚類分析結(jié)果

圖2 商品藥材聚類結(jié)果

4 討論

葛根、粉葛藥材中總黃酮和多糖的含量情況存在差異，葛根中總黃酮含量高于粉葛約40倍，而粉葛中多糖含量高于葛根約6倍，研究總黃酮和多糖的含量情況可一定程度上反映藥材的質(zhì)量情況。黃酮和多糖都是葛根、粉葛的主要成分，具有較好的藥理作用，在研究葛根、粉葛的質(zhì)量情況時(shí)，不可將其忽略。

紫外分光光度法在總黃酮和多糖含量測(cè)定領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，具有簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)。紫外的吸光度受溶液濃度、雜質(zhì)和石英杯等因素影響，應(yīng)注意樣品前處理和石英杯的配對(duì)等方面的研究。聚類分析可以有效地幫助我們分析數(shù)據(jù)的分布、了解數(shù)據(jù)的特征、確定數(shù)據(jù)類，可以從中尋找隱藏在數(shù)據(jù)中的有用信息，直觀簡(jiǎn)明的顯示結(jié)果，有利于數(shù)據(jù)的分析和研究，具有較好的應(yīng)用前景。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 樓之岑.常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究[M].北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社,2003:380．

[3] 王穎莉,李亞妮,孫偉衛(wèi),等．基于FTIR和HPLC的葛根化學(xué)成分整體介析與評(píng)價(jià)[J].世界科學(xué)技術(shù)－中醫(yī)藥現(xiàn)代化★中藥研究,2014,16(2):279.

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[5] 楚紀(jì)明,馬樹(shù)運(yùn),李海峰,等.葛根有效成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].食品與藥品,2015,17(2):142.

[6] 尤春雪,張振秋,李峰,等.HPLC波長(zhǎng)切換技術(shù)對(duì)葛根中8種成分的測(cè)定及指紋圖譜研究[J].2013,44(5):616.

（責(zé)任編輯：胡慧玲）

Comparative study of the content of total fl avonoids and polysaccharides in pueraria lobata and pueraria thomsonii from Sichuan

/HUANG Zai-qiang, ZHANG Yan-fei, CHEN Lin, WANG Xin-yao, XIE Yun-tong, MA Yu-ying// (School of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To investigate the total flavonoids and polysaccharides content in Pueraria lobata and Pueraria thomsonii sources medicinal from different producing area of Sichuan.Method:The determinations of flavonoids and polysaccharide were performed by UV at wavelength of 250 and 490 nm using puerarin and glucose as control, and data was analyzed by clustering analysis method.Result:Different origins, and different sources of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii from Sichuan had difference total fl avonoids and polysaccharides contents. Pueraria thomsonii sample 1, 2, 8, 9, 13, 16 had higher component content which were collected from Guangyuan, Jianyang, Jiangyou, Shehong, Ziyang and Emei. The result showed that the content of fl avonoids and polysaccharide in cultivated Pueraria lobata was close to Pueraria thomsonii．The fl avonoids in Pueraria lobata sample 32～37 had higher component content which were collected from PingWu, Qingchuan and BeiChuan, but the polysaccharide content was almost the same. The results of cluster analysis were in conformity with the data analysis results.Conclusion:The different Pueraria lobata and Pueraria thomsonii sources of Sichuan have different contents of fl avonoids and polysaccharide, which provides the scienti fi c basis for choosing location for cultivation and the quality research of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii from Sichuan．

Pueraria lobata; Pueraria thomsonii; total fl avonoids; polysaccharides; UV

R 282

A

1674-926X(2017)03-004-04

四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：2014SZ0131）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

黃再?gòu)?qiáng)，在讀碩士，從事中藥品種、質(zhì)量與資源開(kāi)發(fā)研究

Tel:18380186079 Email:1164375439@qq.com

馬逾英，教授，本科，從事中藥品種、質(zhì)量與資源開(kāi)發(fā)研究 Email:ma-yuying@126.com

2016-12-20