王飛　陳哲

摘要：隨著生物學(xué)、免疫學(xué)的快速發(fā)展，對(duì)抗嗎啡、海洛因等阿片類(lèi)毒品依賴(lài)的治療和預(yù)防進(jìn)行細(xì)胞、分子、基因等多層次的研究越來(lái)越多，特別是免疫學(xué)領(lǐng)域，包括毒品疫苗、抗體以及抗體酶等方面的研究。本文結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，就抗嗎啡、海洛因依賴(lài)疫苗和抗體的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為戒毒工作提供一定的參考理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：?jiǎn)岱龋缓Ｂ逡?；疫苗；抗體

中圖分類(lèi)號(hào)：R392 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）20-0023-03

Abstract：With the rapid development of biology，immunology，antagonism of morphine，treatment and prevention of opioid drugs such as heroin dependence of cells，molecules，more and more research on gene levels，especially in the field of immunology，including drugs，vaccine，antibody and antibody enzyme research and so on.This article combined with the relevant literature，anti morphine，research progress of heroin dependence vaccines and antibodies were reviewed，providing a theoretical basis for the reference of rehabilitation work.

Key words：Morphine；Heroin；Vaccines；Antibodies

目前，我國(guó)毒品濫用人數(shù)不斷增加，阿片類(lèi)毒品是當(dāng)前的主要類(lèi)型[1]。海洛因等毒品濫用會(huì)嚴(yán)重?fù)p害吸毒者的身體健康，且對(duì)社會(huì)和公共衛(wèi)生造成不良影響，尤其是增加了艾滋病、肝炎等傳染性疾病的發(fā)生率[2]。盡管我國(guó)在戒毒工作中投入了大量的人力、物力，但收效甚微，而且對(duì)預(yù)防高危人群成癮尚無(wú)有效的醫(yī)療手段。面對(duì)吸毒人數(shù)的增多，對(duì)抗嗎啡、海洛因依賴(lài)疫苗和抗體的研究具有重要的社會(huì)意義。以下綜述抗嗎啡、海洛因依賴(lài)疫苗和抗體的研究進(jìn)展，為目前提高戒毒成功率提供指導(dǎo)意見(jiàn)。

1嗎啡疫苗和抗體

由于阿片類(lèi)毒品基本上都是小分子化合物，通常無(wú)免疫原性，需要經(jīng)過(guò)交聯(lián)或其他途徑制備全抗原[3]，故通過(guò)試驗(yàn)疫苗的制備來(lái)生產(chǎn)抗體。研究顯示，常見(jiàn)的阿片類(lèi)毒品與嗎啡的基本結(jié)構(gòu)較為相似，所以疫苗和抗體的制備，可以將嗎啡樣結(jié)構(gòu)作為依據(jù)。

1.1嗎啡-BSA（牛血清白蛋白）疫苗

嗎啡-BSA（牛血清白蛋白）疫苗的研究起于70年代[4]。由于小分子化合物和大分子載體的交聯(lián)反應(yīng)比較困難，直到出現(xiàn)高效交聯(lián)劑后才開(kāi)始真正的疫苗研究。這種疫苗免疫原性與小分子的大小、組成、形狀、靜電荷及小分子與載體的節(jié)位點(diǎn)等都有一定的關(guān)系。隨著免疫學(xué)的發(fā)展，目前交聯(lián)比率可達(dá)到嗎啡：BSA=100：1[5]。實(shí)驗(yàn)研究顯示，嗎啡疫苗M-6-S-BSA免疫兔后，嗎啡在血液中清除延遲，可能是因?yàn)楫a(chǎn)生了抗原抗體復(fù)合物，影響了嗎啡的代謝情況[6]。

1.2嗎啡抗體

1.2.1嗎啡抗體與阿片類(lèi)物質(zhì)的結(jié)合特性 對(duì)于嗎啡抗體的制備，目前主要采用嗎啡疫苗免疫動(dòng)物來(lái)實(shí)現(xiàn)，即通過(guò)親和純化得到不同親和性的抗體。目前，嗎啡抗體均屬于IgG1、IgG2a、IgG3和IgM類(lèi)型[7]。即使在分子水平或離子水平得到同樣的結(jié)論，即嗎啡抗體均對(duì)海洛因、嗎啡等阿片類(lèi)毒品有顯著的特異性與親和性。但是抗體均對(duì)納洛酮、美沙酮等阿片類(lèi)藥物無(wú)親和性。實(shí)踐證明，阿片類(lèi)物質(zhì)與嗎啡抗體的親和力大小與其他受體的親和力無(wú)顯著聯(lián)系[8]，但是兩者的親和力關(guān)系也存在一定的爭(zhēng)議。

NgDS等[9]人研究中使用M-6-S-BSA免疫兔，產(chǎn)生特異性抗體，對(duì)比了M-6-S、海洛因、嗎啡競(jìng)爭(zhēng)抑制標(biāo)記嗎啡與抗體結(jié)合的能力，結(jié)果顯示放射配體與受體特異結(jié)合減少50%時(shí)需要的濃度值分別為0.052、0.10、0.11、0.16、0.50、2.1、80 μmol/L。在離子體實(shí)驗(yàn)中也得到基本一致的結(jié)果。綜合以上研究結(jié)果，競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合于同系半抗原結(jié)構(gòu)具有一定的關(guān)系。N-甲基或取代基是嗎啡骨架結(jié)構(gòu)中選擇性較高的位置，但是存在一定的識(shí)別缺陷。此外，阿片類(lèi)物質(zhì)和嗎啡抗體的親和性大小與受體的親和性大小無(wú)顯著性關(guān)系。

1.2.2嗎啡抗體的序列比較和免疫生化 嗎啡抗體的序列比較和免疫生化對(duì)新型治療性抗體的研究有重要的指導(dǎo)作用。對(duì)比嗎啡抗體的重鏈、輕鏈的可變區(qū)（V區(qū)）氨基酸序列，試圖研究其機(jī)構(gòu)和抗體多樣性、特異性的聯(lián)系，進(jìn)一步提供有關(guān)抗體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的基因機(jī)制。目前，已經(jīng)測(cè)定出若干株嗎啡單抗V區(qū)的mRNA序列，并推導(dǎo)出相應(yīng)的V區(qū)氨基酸序列[10]。通過(guò)生化免疫分析顯示這些嗎啡單抗的V區(qū)（VH，VL）核苷酸序列來(lái)源于不同幾組的基因家族，其中VL鏈的同源性相對(duì)較高。VH鏈特別是H3環(huán)的多樣性可能使嗎啡抗體產(chǎn)生不同特異性的原因。部分氨基酸殘基例如谷氨酸、酪氨酸等氨基酸殘基在抗原抗體結(jié)合反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。此外，反應(yīng)體系的pH值對(duì)嗎啡抗體和嗎啡分子的結(jié)合也具有較大的影響。張國(guó)華等[11]人研究中測(cè)定比較了11株嗎啡單抗V區(qū)的序列，結(jié)果顯示第8、33、35、44、83和76號(hào)嗎啡單抗的VH區(qū)核酸序列可劃分為VH-5（7183）家族基因。同時(shí)抗體MOR158和MOR180、MOR131和MOR39、MOR83和MOR8、MOR33、MOR35、MOR44、MOR76可能分別來(lái)源與相同一克隆的細(xì)胞突變體，因?yàn)榫哂邢嗤腣H/VL構(gòu)成和V（D）J重組形式。通過(guò)對(duì)嗎啡單抗體的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行分子和生化研究發(fā)現(xiàn)，嗎啡分子結(jié)合抗體對(duì)反應(yīng)體系的pH值有高度依賴(lài)性，表明處于結(jié)合區(qū)域，嗎啡電荷陽(yáng)性或陰性的靜電作用具有至關(guān)重要的作用。同時(shí)表明V區(qū)某些環(huán)上的氨基酸殘基對(duì)其親和性有影響，例如抗體MOR131的H3環(huán)上的第99位氨基酸殘基（Ala99H）和L鏈第52位的天冬酰胺殘基（Asn52L）。但是當(dāng)前還缺少相關(guān)計(jì)算機(jī)軟件對(duì)嗎啡抗體的空間結(jié)構(gòu)和嗎啡分析或其他阿片類(lèi)物質(zhì)和嗎啡抗體的結(jié)合位點(diǎn)的立體結(jié)構(gòu)進(jìn)行報(bào)道。今后還需要我們不斷的研究，進(jìn)一步闡明抗體的結(jié)構(gòu)以及特異性、親和性。endprint

1.3獨(dú)特性抗體

如果采用依賴(lài)性物質(zhì)直接制備抗體存在多方面的潛在危險(xiǎn)。所以，采用依賴(lài)性物質(zhì)的模擬結(jié)構(gòu)，可使其保持原有的抗原性，從而通過(guò)制備模擬疫苗產(chǎn)生獨(dú)特型抗體。Kamendulis等[12]研究中使用嗎啡抗體IgG免疫兔，產(chǎn)生了抗嗎啡IgG獨(dú)特型抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗體可阻斷嗎啡、納洛酮與受體的結(jié)合。同時(shí)范學(xué)良等[13]研究中指出該抗體能劑量依賴(lài)性的一直標(biāo)記納洛酮與阿片受體結(jié)合，屬于非競(jìng)爭(zhēng)抑制。陳華等[14]人研究中使用4株嗎啡單抗的Fab片段免疫兔獲得獨(dú)特型抗體，可逆抑制嗎啡結(jié)合嗎啡抗體和細(xì)胞阿片受體?？躬?dú)特型抗體和抗嗎啡IgG被認(rèn)為是競(jìng)爭(zhēng)同一位點(diǎn)的激動(dòng)/拮抗分子對(duì)。所以，基本上可以認(rèn)為獨(dú)特型抗體可能是模擬了嗎啡的分子結(jié)構(gòu)。但是并沒(méi)有進(jìn)一步進(jìn)行觀(guān)察獨(dú)特型抗體再次免疫動(dòng)物后是否有減少阿片類(lèi)物質(zhì)進(jìn)入中樞的作用。

2海洛因疫苗和抗體

2.1海洛因疫苗和抗體基本與嗎啡疫苗和抗體等同

目前，海洛因是阿片類(lèi)毒品的主要類(lèi)型，但是海洛因疫苗和抗體的研究較少。因?yàn)楹Ｂ逡蚺c嗎啡結(jié)構(gòu)較為相似，即在3，6位上的羥基變?yōu)橐阴；?，嗎啡疫苗制備是?，6位的羥基碳鏈與大分子蛋白結(jié)合，實(shí)驗(yàn)顯示無(wú)論在分子水平或離子水平，嗎啡和海洛因均與嗎啡抗體的結(jié)合特點(diǎn)基本一致。眾多的研究顯示，海洛因疫苗和抗體基本與嗎啡疫苗和抗體一致。

2.2抗體酶

抗體酶會(huì)使海洛因、6-乙酰嗎啡、可卡因等被水解失去活性，反應(yīng)后會(huì)降低血清和肝臟海洛因的濃度，從而發(fā)揮脫毒作用[16]。所謂的抗體酶是指化學(xué)轉(zhuǎn)換中底物的過(guò)度態(tài)類(lèi)似物經(jīng)免疫獲得的人工酶，該酶具有化學(xué)反應(yīng)特點(diǎn)。目前，已經(jīng)分離出的人的特異的寬底物羧酸酯酶，它可催化水解海洛因的3-和6-乙?；?。假設(shè)采用合成海洛因水解過(guò)渡態(tài)類(lèi)似物的活性部位，免疫動(dòng)物可能會(huì)產(chǎn)生水解海洛因抗體酶。

3 新型實(shí)驗(yàn)疫苗研究方向

在免疫學(xué)和生化學(xué)發(fā)展的推動(dòng)下，對(duì)阿片類(lèi)毒依賴(lài)性的治療研究越來(lái)越深入，使治療方法也越來(lái)越多。

目前，多數(shù)研究處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段進(jìn)入臨床試驗(yàn)的可卡因疫苗和尼古丁疫苗是可卡因或尼古丁分子與百日咳毒素交聯(lián)而獲的多價(jià)疫苗。以上說(shuō)法提示，阿片毒品疫苗的制備可應(yīng)用相似的方法制備多價(jià)疫苗[17]。如果直接用海洛因、嗎啡制備疫苗存在潛在危險(xiǎn)因素，采用模擬抗原制備疫苗是當(dāng)前的主要研究方向。同時(shí)可采用計(jì)算機(jī)分子結(jié)構(gòu)模擬的方法或表位篩選方法等獲得模擬多肽，以模擬多肽為基礎(chǔ)研制新型模擬疫苗或表位疫苗。此外，可采用模擬表位對(duì)應(yīng)的DNA序列為基礎(chǔ)研制基因疫苗?？傊?，阿片類(lèi)疫苗和抗體的制備方法有多種，需要不斷的研究和試驗(yàn)，總結(jié)出更為合適的制備方法。

4問(wèn)題與展望

近年來(lái)，免疫學(xué)治療領(lǐng)域得到前足的發(fā)展，與此同時(shí)也面臨一些困難，自身的給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明大劑量藥物會(huì)超出抗體療法的能力。個(gè)體的差異會(huì)使產(chǎn)生的抗體滴度出現(xiàn)不均衡現(xiàn)象，其效果也可能存在差異。當(dāng)前，免疫學(xué)研究的主要方法是靶分子，靶分子是分布于外周血液的濫用型物質(zhì)，雖然不影響中樞系統(tǒng)的功能，但是無(wú)法作用于進(jìn)入中樞的依賴(lài)性物質(zhì)。部分人們還擔(dān)心接受疫苗的個(gè)體是否被識(shí)別或藐視，接種疫苗是否自愿還是強(qiáng)迫等，以上問(wèn)題和難題都是臨床應(yīng)用面對(duì)的問(wèn)題。對(duì)于可卡因免疫學(xué)治療，提倡采用治療傳染病的方式，并將其作為重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題來(lái)對(duì)待，讓社會(huì)和民眾接受和使用毒品疫苗和抗體成為可能。

同時(shí)阿片類(lèi)毒品疫苗和抗體在臨床使用上還可能遇到一個(gè)重要的問(wèn)題，既使用強(qiáng)效的阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥來(lái)緩解術(shù)后疼痛或晚期癌痛，這些疫苗或抗體可能會(huì)抵抗它們的作用。此時(shí)，建議采用其他的鎮(zhèn)痛藥物或鎮(zhèn)痛途徑減輕患者疼痛，尤其是晚期癌性疼痛治療阿片成癮患者，為了提高患者生活質(zhì)量，建議不采用毒品疫苗戒毒或者不戒毒。

在藥理學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科理論和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展下，會(huì)有多種形式和太難的毒品疫苗和抗體研發(fā)成功，例如表位疫苗、模擬疫苗、基因疫苗、人工抗體等。目前，已經(jīng)有其他的依賴(lài)性物質(zhì)的疫苗，例如可卡因疫苗、尼古丁疫苗正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，且取得了理想的效果。所以，免疫學(xué)治療毒品依賴(lài)性完全是可能的。將來(lái)阿片類(lèi)毒品疫苗和抗體將會(huì)有巨大的發(fā)展，值得我們期待，我們?nèi)匀灰獔?jiān)持不懈的研究，以盡快將毒品疫苗應(yīng)用于臨床。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉云，李劍波.甲基苯丙胺抗體、疫苗以及檢測(cè)試紙研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物依賴(lài)性雜志，2005，14（5）：330-332.

[2]趙文忠，李琳，徐江平，等.嗎啡抗體對(duì)嗎啡依賴(lài)小鼠納洛酮催促戒斷癥狀的影響[J].中國(guó)藥物依賴(lài)性雜志，2004，13（1）：29-32.

[3]李琳.嗎啡疫苗及抗體制備的實(shí)驗(yàn)研究[D].第一軍醫(yī)大學(xué)，2004.

[4]謝春明.視覺(jué)“線(xiàn)索”誘發(fā)渴求狀態(tài)的腦功能研究[D].中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2005.

[5]Wainer BH，F(xiàn)itch FW.The structure of morphine monohemisuccinate[J].Science，1972，178（4061）：647-648.

[6]張延軍.嗎啡-載體蛋白交聯(lián)物的鑒定及抗嗎啡單克隆抗體的藥理學(xué)評(píng)價(jià)[D].第一軍醫(yī)大學(xué)，2006.

[7]李浩.可卡因及其系列衍生物水解反應(yīng)機(jī)理的量子化學(xué)研究[D].山東大學(xué)，2007.

[8]王學(xué)廉.腦立體定向手術(shù)用于戒毒治療的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究[D].第四軍醫(yī)大學(xué)，2002.

[9]Ng DSS，Isom GE.Anti-morphine anti-idiotypic antibodies[J].Biochemical Pharmacology，1985，34（16）：2853-2858.

[10]張瑞嶺.嗎啡依賴(lài)大鼠部分腦區(qū)基因表達(dá)、突觸結(jié)構(gòu)改變及其地卓西平的影響[D].中南大學(xué)，2003.

[11]張國(guó)華.海洛因、嗎啡、度冷丁藥物濫用神經(jīng)生物學(xué)變化的實(shí)驗(yàn)性研究[D].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，2003.

[12]Kamendulis LM，Brezinski MR，Pindel EV，et al.Metabolism of cocaine and heroin is regulated by the same liver carboxylesterase[J].Journal of Pharmacology&Experimental Therapeutics，1996，279（2）：713-717.

[13]范學(xué)良.嗎啡對(duì)GRK2、GRK5和JNK3基因在大鼠腦內(nèi)表達(dá)調(diào)控的研究[D].復(fù)旦大學(xué)，2002.

[14]陳華.鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡和氯胺酮治療大鼠神經(jīng)源性疼痛[D].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，2004.

[15]師恩祎，江曉菁，白菡，等.嗎啡預(yù)處理的晚期心肌保護(hù)作用及其與誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的關(guān)系[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2004，84（11）：891-895.

[16]顏玲娣，宮澤輝.抗嗎啡、海洛因依賴(lài)疫苗和抗體的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物依賴(lài)性雜志，2003，12（3）：161-164.

[17]徐旭婷，張富強(qiáng)，劉惠芬，等.海洛因成癮的遺傳學(xué)與表觀(guān)遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物依賴(lài)性雜志，2014，23（1）：5-13.

編輯/王海靜endprint