王 芳，黃 堅(jiān)，嚴(yán)成其,，龐萬(wàn)幅，程 曄，金黎平(.寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 5040； .中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜花卉研究所，北京 008；.浙江省植物有害生物防控省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江 杭州 00)

花旗馬鈴薯品種莖尖脫毒與快繁技術(shù)

王 芳1，黃 堅(jiān)1，嚴(yán)成其1,3，龐萬(wàn)幅2，程 曄3，金黎平2
(1.寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315040； 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜花卉研究所，北京 10081；3.浙江省植物有害生物防控省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江 杭州 310021)

取帶1～2個(gè)葉原基大小為0.2～0.4 mm的莖尖，在MS+6- BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1培養(yǎng)基中培養(yǎng)50 d，成苗率50%。試管苗經(jīng)指示植物檢測(cè)出試管苗脫毒率為59%，脫毒苗莖段快繁的最佳配方為MS+6- BA 0.20 mg·L-1+NAA 0.20 mg·L-1。雙層基質(zhì)栽培脫毒試管苗生長(zhǎng)快、長(zhǎng)勢(shì)好，微型薯產(chǎn)量高、成本低。

花旗馬鈴薯品種； 莖尖脫毒； 組織培養(yǎng)； 快繁技術(shù)

在侵染馬鈴薯的18種病毒中，有9種是專門(mén)寄生于馬鈴薯上的病毒，其中國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的有類病毒PSTV，以及PVX、PVY、PVS、PVM、PVMA、PVA、PLRV7種病毒[1]。這些病毒一旦侵入馬鈴薯塊莖和植株，就表現(xiàn)為束頂、花葉、卷葉幾種類型，植株表現(xiàn)為矮小、頂部葉片變色、卷縮，葉片失綠、葉片卷曲壞死、塊莖表現(xiàn)為龜裂、變尖、變小、內(nèi)部網(wǎng)狀壞死等各種各樣的退化類型，嚴(yán)重者失去發(fā)芽能力，不能作種，一般減產(chǎn)30%左右，嚴(yán)重者減產(chǎn)80%以上[2]，病情逐年加重，最后失去種用價(jià)值。

利用莖尖脫毒快繁是目前解決馬鈴薯種薯退化最直接有效的方法。按照規(guī)范、嚴(yán)格的技術(shù)流程，并通過(guò)莖尖脫毒快繁獲得無(wú)毒微型薯進(jìn)行良種繁育，不斷地為生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種薯，可長(zhǎng)期保持馬鈴薯優(yōu)良品種的增產(chǎn)潛力[3]。

1 材料與方法

1.1材料

花旗馬鈴薯品種是地方特色優(yōu)質(zhì)高效品種，采于寧波市海曙區(qū)梅樹(shù)孔村。

1.2方法

1.2.1 材料采集與消毒

選取健康無(wú)病斑的花旗馬鈴薯洗凈后用30 mg·kg-1GA3浸種30 min，埋在消毒過(guò)的泥炭中，放入25 ℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)催芽，露芽后30 ℃熱處理7 d。剪取生長(zhǎng)旺盛的莖尖5 cm，切去葉片，用75%的乙醇浸泡20～30 s后，用無(wú)菌水沖洗1遍，然后用0.1%的升汞消毒6 min，最后用無(wú)菌水沖洗4次備用[4]。

1.2.2 莖尖剝離與培養(yǎng)

在雙目解剖鏡下，將消毒后的莖尖置于載玻片上，用解剖針輕輕剝?nèi)ト~片，并用解剖刀切去，僅留1～2個(gè)葉原基的莖尖，大小為0.2～0.3 mm。將留下的莖尖接種在含有不同濃度NAA和6- BA的MS培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件為溫度(28±2)℃，濕度50%，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，光照時(shí)間12～16 h·d-1。

1.2.3 試管苗脫毒鑒定

用指示作物千日紅進(jìn)行試管苗脫毒鑒定。

1.2.4 脫毒苗快速繁殖

以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的NAA和6- BA，置于溫度25 ℃、光照強(qiáng)度2 000 lx和光照時(shí)間12 h·d-1的環(huán)境中培養(yǎng)，30 d后統(tǒng)計(jì)植株高度、葉片數(shù)、根數(shù)等生長(zhǎng)情況。

1.2.5 脫毒苗大田種植試驗(yàn)

脫毒苗的移植采用4個(gè)配方，蛭石、蛭石+泥炭(1∶1)、蛭石+河沙(1∶1)、雙層基質(zhì)即底層鋪20 cm厚的營(yíng)養(yǎng)土，上層鋪蛭石5 cm，脫毒苗移植后用塑料薄膜覆蓋，夏天高溫還需加黑膜，保持濕度90%以上，溫度在30 ℃左右，pH 6.5左右，基質(zhì)就有良好的通氣性。

2 結(jié)果與分析

2.1不同培養(yǎng)基對(duì)莖尖成苗率的影響

設(shè)13組含有不同濃度激素的MS培養(yǎng)基，每組培養(yǎng)基接20個(gè)莖尖，50 d后觀察結(jié)果。表1表明，MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的激素均可誘導(dǎo)莖尖成苗，對(duì)花旗馬鈴薯莖尖再生成苗率最好培養(yǎng)基配方是MS+6- BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1，成苗率達(dá)到50%。

2.2指示植物病毒檢測(cè)結(jié)果

以千日紅對(duì)試管苗用嫁接法進(jìn)行病毒檢測(cè)，脫毒率達(dá)到59%。對(duì)已脫毒苗進(jìn)行快速繁殖，對(duì)未脫毒的苗進(jìn)行淘汰[5]。

2.3不同培養(yǎng)基對(duì)脫毒苗快速繁殖的影響

表2表明，NAA能促進(jìn)脫毒苗的生根，但隨著6- BA濃度的升高，NAA的生根作用被抑制。6- BA濃度高于0.50 mg·L-1時(shí)，莖段出現(xiàn)愈傷組織化，且苗生長(zhǎng)緩慢，顏色變淺。由此可見(jiàn)，低濃度的NAA與低濃度的6- BA結(jié)合最適合組培苗的快速繁殖[6]。

表1 莖尖分生組織在不同培養(yǎng)基中成苗情況

表2 不同培養(yǎng)基對(duì)花旗馬鈴薯品種脫毒苗快速繁殖的影響

2.4脫毒苗的大田種植

將花旗馬鈴薯脫毒苗種在4個(gè)基質(zhì)配方中，7 d后打開(kāi)薄膜(表3)生長(zhǎng)在蛭石配方中其成活率可達(dá)95%，脫毒苗移栽成活率最高的是生長(zhǎng)在底層鋪一層20 cm厚的營(yíng)養(yǎng)土，上層鋪蛭石5 cm雙層基質(zhì)中其成活率可達(dá)到96%，在蛭石+泥炭配方中為85%，成活率最低的是生長(zhǎng)在蛭石+河沙 配方中70%；生長(zhǎng)50 d后統(tǒng)計(jì)每株微型薯數(shù)結(jié)果為，生長(zhǎng)在蛭石配方中，每株平均微型薯數(shù)為3.1粒，接微型薯最好的是在底層鋪20 cm厚的營(yíng)養(yǎng)土，上層鋪蛭石5 cm雙層基質(zhì)，其每株平均微型薯數(shù)3.5粒，在蛭石+泥炭配方中每株平均微型薯數(shù)為2.0粒，每株微型薯最低的是生長(zhǎng)在蛭石+河沙配方中，每株平均微型薯數(shù)1.5粒。

表3 花旗馬鈴薯脫毒苗對(duì)微型薯生產(chǎn)的影響

3 小結(jié)與討論

馬鈴薯莖尖分生組織可以獲得脫毒苗，為馬鈴薯病毒病的防治展示了廣闊的前景[7- 8]。但不同激素濃度的培養(yǎng)基對(duì)莖尖出苗率有很大的影響。6- BA是影響花旗馬鈴薯成苗的一個(gè)重要因子。NAA是影響甘薯莖尖成苗的一個(gè)次要因子，其濃度在0.1～0.2 mg·L-1最為合適。在馬鈴薯莖段快速繁殖過(guò)程中，低濃度的6- BA和NAA結(jié)合能促進(jìn)腋芽的萌發(fā)，高濃度的6- BA使植株愈傷化嚴(yán)重，且NAA對(duì)植株的生根作用也會(huì)隨著6- BA濃度的升高而受到抑制。脫毒馬鈴薯原原種生產(chǎn)中，試管苗栽培基質(zhì)的選用比較重要。生產(chǎn)上一般采用蛭石、珍珠巖、粗砂等作基質(zhì)，也可用棉籽皮、鋸末、灰渣、森林土等，但必須進(jìn)行高溫消毒。使用單一基質(zhì)生產(chǎn)脫毒種薯存在營(yíng)養(yǎng)供給不足的現(xiàn)象，雙層基質(zhì)栽培試管苗生長(zhǎng)快、長(zhǎng)勢(shì)好，原原種產(chǎn)量高，成本低，比單一基質(zhì)栽培具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

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：0528- 9017(2017)09- 1577- 02

2017- 06- 30

浙江省重大攻關(guān)項(xiàng)目(2012C12901- 2)；寧波市重大科技項(xiàng)目(2015C110013),浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大科技專項(xiàng)(2016C02050- 7- 6)

王 芳(1981—)，女，浙江寧波人，農(nóng)藝師，主要從事良種選育推廣工作。

文獻(xiàn)著錄格式：王芳，黃堅(jiān)，嚴(yán)成其，等. 花旗馬鈴薯品種莖尖脫毒與快繁技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(9)：1577- 1578，1583.

10.16178/j.issn.0528- 9017.20170924