王 華

·藥學(xué)研究·

HPLC波長(zhǎng)切換法同時(shí)測(cè)定消痰益康(糖漿)中6種成分的含量

王 華

目的建立同時(shí)測(cè)定消痰益康(糖漿)中多成分的定量分析方法。方法采用HPLC波長(zhǎng)切換法同時(shí)測(cè)定原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量。色譜柱為Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-0.04%冰醋酸溶液為流動(dòng)相，按規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速0.9 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為280 nm(原兒茶醛、兒茶素和表兒茶素)、360 nm(金絲桃苷和槲皮素)和299 nm(杜鵑素)；柱溫30 ℃。結(jié)果原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素分別在7.290～145.8、2.550～51.00、13.76～275.2、6.470～129.4、2.660～53.20、3.880～77.60 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率及相應(yīng)的RSD分別為98.68%(1.35%)、99.27%(1.17%)、97.05%(0.58%)、99.84%(1.19%)、97.89%(0.95%)、98.78%(1.13%)。結(jié)論該方法可用于消痰益康(糖漿)的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。

消痰益康(糖漿)；原兒茶醛；兒茶素；表兒茶素；金絲桃苷；槲皮素；杜鵑素；波長(zhǎng)切換法；中成藥；多成分測(cè)定

0 引言

消痰益康(糖漿)收載于《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第九冊(cè)，是由枸杞子、滿山紅、人參葉、黃芪炙等4味中藥材加工而成，具有祛痰、止咳平喘、補(bǔ)陽益氣的功效，臨床應(yīng)用于久咳及慢性氣管炎、肺心病的治療，臨床需求量大。消痰益康(糖漿)標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了性狀、理化鑒別、乙醇量及相對(duì)密度的測(cè)定，對(duì)處方中4味中藥材的任何成分均未進(jìn)行定量測(cè)定[1]。王輝等[2]采用分光光度法對(duì)該制劑中總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定。目前，尚未檢索到對(duì)該制劑多成分進(jìn)行定量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道，而單一成分難以控制復(fù)方制劑的質(zhì)量。為更好地控制消痰益康(糖漿)的質(zhì)量，筆者采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定消痰益康(糖漿)主要藥味枸杞子中的原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素，以及滿山紅[3]中的金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素，對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200系列四元梯度泵高效液相色譜儀(在線真空脫氣裝置、四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱恒溫箱、可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司)；METTLER TOLEDO分析電子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司，十萬分之一)。

1.2 試藥與試劑 消痰益康(糖漿)(規(guī)格：每瓶裝100 mL，批號(hào)：201509002、201602001、201603004)來源于葵花藥業(yè)集團(tuán)(佳木斯)有限公司；原兒茶醛對(duì)照品(批號(hào)：110810-201608，含量：99.3%)、兒茶素對(duì)照品(批號(hào)：110877-201604，含量：99.2%)、表兒茶素對(duì)照品(批號(hào)：110878-200102，含量：100.0%)、金絲桃苷對(duì)照品(批號(hào)：111521-201507，含量：94.3%)、槲皮素對(duì)照品(批號(hào)：100081-201610，含量：98.6%)和杜鵑素對(duì)照品(批號(hào)：110850-201605，含量：100.0%)來源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取各對(duì)照品適量，用甲醇分別制成原兒茶醛1.458 mg/mL、兒茶素0.510 mg/mL、表兒茶素2.752 mg/mL、金絲桃苷1.294 mg/mL、槲皮素0.532 mg/mL、杜鵑素0.776 mg/mL單一成分對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。再分別量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇制成含原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素質(zhì)量濃度分別為0.072 9、0.010 2、0.137 6、0.064 7、0.026 6、0.038 8 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，作為消痰益康(糖漿)對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取消痰益康(糖漿)4.0 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，振搖均勻，過濾，取續(xù)濾液作為消痰益康(糖漿)供試品溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備 根據(jù)消痰益康(糖漿)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中載明的處方和制備工藝，分別制備缺枸杞子陰性樣品和缺滿山紅陰性樣品，再按消痰益康(糖漿)供試品溶液制備方法制成枸杞子陰性樣品溶液和滿山紅陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件 采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；以甲醇-0.04%冰醋酸溶液為流動(dòng)相，按表1的比例梯度洗脫；0～28 min時(shí)在280 nm[4]波長(zhǎng)下檢測(cè)原兒茶醛、兒茶素和表兒茶素，28～40 min時(shí)在360 nm[5-6]波長(zhǎng)下檢測(cè)金絲桃苷和槲皮素，40～55 min時(shí)在299 nm[5-7]波長(zhǎng)下檢測(cè)杜鵑素；流速：0.9 mL/min；柱溫：30 ℃。

表1 梯度洗脫程序

2.3 系統(tǒng)適用性與專屬性試驗(yàn) 精密吸取“2.1.1”、“2.1.2”和“2.1.3”項(xiàng)下的溶液各適量，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件依法檢測(cè)，結(jié)果在與原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間處，供試品溶液色譜圖中有原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的吸收峰，而陰性樣品色譜圖中未顯示對(duì)應(yīng)的吸收峰，說明陰性無干擾，且各峰之間分離度>1.5。色譜圖見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，將其置于6個(gè)20 mL量瓶中并用甲醇稀釋至刻度，制成6個(gè)系列濃度的混合對(duì)照品溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，采用原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素質(zhì)量濃度x作為橫坐標(biāo)，測(cè)得的峰面積y作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程見表2。

圖1 消痰益康(糖漿)色譜圖

注：A.對(duì)照品溶液，B.樣品溶液，C.枸杞子陰性樣品溶液，D.滿山紅陰性樣品溶液；1.原兒茶醛，2.兒茶素，3.表兒茶素，4.金絲桃苷，5.槲皮素，6.杜鵑素

2.5 混合對(duì)照品精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素峰面積的RSD(n=6)分別為1.13%、0.75%、1.02%、0.97%、1.35%、0.82%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為201509002的消痰益康(糖漿)6份，按“2.1.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，分別計(jì)算原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量，并計(jì)算所測(cè)6個(gè)組分含量的RSD，結(jié)果所測(cè)組分的RSD依次為1.42%、0.95%、1.13%、0.77%、0.39%、1.45%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)為201509002的消痰益康(糖漿)供試品溶液，按照上述方法和條件進(jìn)行分析，分別在0、2、4、6、8、10、12 h測(cè)定樣品中原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的峰面積值，結(jié)果顯示,消痰益康(糖漿)供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為0.98%、1.53%、0.85%、1.27%、1.46%、1.33%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取批號(hào)為201509002的消痰益康(糖漿)9份，各精密量取2.0 mL，分別置不同的25 mL量瓶中，依次精密加入對(duì)照品溶液(原兒茶醛0.514 mg/mL、兒茶素0.115 mg/mL、表兒茶素0.892 mg/mL、金絲桃苷0.483 mg/mL、槲皮素0.289 mg/mL、杜鵑素0.471 mg/mL)各適量，使對(duì)照品加入量與所取供試品中待測(cè)定成分之比控制在0.5∶1、1∶1、1.5∶1(各3份)，再按“2.1.2”項(xiàng)方法制備消痰益康(糖漿)加樣回收樣品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算這6個(gè)組分的回收率及RSD，結(jié)果見表3。

2.9 樣品測(cè)定 取3批消痰益康(糖漿)，按“2.1.2”項(xiàng)方法制備消痰益康(糖漿)供試品溶液，依法測(cè)定原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 分別考察了甲醇-水流動(dòng)相體系[3]、乙腈-水流動(dòng)相體系，結(jié)果顯示,甲醇-水系統(tǒng)優(yōu)于乙腈-水系統(tǒng)，但個(gè)別組分的分離效果欠佳，在此基礎(chǔ)上又分別考察了甲醇-0.2%磷酸溶液流動(dòng)相體系[5,7]、甲醇-0.04%冰醋酸溶液流動(dòng)相體系[4]，最終采用甲醇-0.04%冰醋酸溶液作為流動(dòng)相,按照表1規(guī)定的程序進(jìn)行洗脫，此時(shí)色譜圖基線平穩(wěn)，所測(cè)6個(gè)成分原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素均能達(dá)到有效分離，峰形對(duì)稱。

表3 原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素回收率

表4 含量測(cè)定結(jié)果(mg/mL)

3.2 波長(zhǎng)的確定 通過對(duì)原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素對(duì)照品儲(chǔ)備液的紫外光譜全波長(zhǎng)掃描，選擇了各自的最大吸收波長(zhǎng)作為高效液相的檢測(cè)波長(zhǎng)，在280 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)原兒茶醛、兒茶素和表兒茶素，在360 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)金絲桃苷和槲皮素，在299 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)杜鵑素，同時(shí)采用波長(zhǎng)切換方法，能夠很好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

本文建立了HPLC波長(zhǎng)切換聯(lián)合梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定消痰益康(糖漿)中原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素6個(gè)成分的含量，方法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，可以作為控制和評(píng)價(jià)消痰益康(糖漿)質(zhì)量的方法。

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ZX09J13109-03B)

SimultaneousdeterminationofsixcomponentsinXiaotanYikangsyrupbyHPLCswitchingwavelengthmethod

WANG Hua

(Department of Pharmacy,the People′s Liberation Army Tianjin Sanatorium,Tianjin 300191,China)

ObjectiveTo establish a method for the simultaneous determination of the multiple components in Xiaotan Yikang syrup.MethodsThe contents of protocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin,hyperoside,quercetin and farrerol were determined by HPLC gradient elution method.The Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) chromatographic column was adopted;the mobile phase consisted of A (methanol) and B (0.04% glacial acetic acid solution) with the column temperature being 30 ℃ and gradient elution;UV detection wavelength was set at 280 nm [protocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin],360 nm(hyperoside,quercetin) and 299 nm(farrerol) with the flow rate of 0.9 mL/min.ResultsProtocatechuic aldehyde,(+)-catechin,epicatechin,hyperoside,quercetin and farrerol,within the scope of 7.290～145.8,2.550～51.00,13.76～275.2,6.470～129.4,2.660～53.20 and 3.880～77.60 μg/mL,had a good linear relationship,respectively.The average recoveries and the correspondingRSDwere 98.68%(1.35%),99.27%(1.17%),97.05%(0.58%),99.84%(1.19%),97.89%(0.95%) and 98.78%(1.13%),respectively.ConclusionThis method can be used for content determination and quality control of Xiaotan Yikang syrup.

Xiaotan Yikang Syrup;Protocatechuic aldehyde;(+)-catechin;Epicatechin;Hyperoside;Quercetin;Farrerol;Wavelength switching method;Chinese patent drug;Multicomponent determination

2017-03-15

解放軍天津療養(yǎng)院藥劑科,天津 300191

10.14053/j.cnki.ppcr.201709021

收稿日期：2016-12-28

作者單位：沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽 110016

提高寒區(qū)軍事作業(yè)能力-抗寒外用制劑的研制(2013-