石 柳， 夏忠勝， 賴(lài) 宇△， 王思儀， 畢文婷， 劉 雨， 于 濤， 陳其奎

(1贛州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江西 贛州 341000； 2中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州 510120)

瑞巴派特對(duì)阿司匹林誘導(dǎo)的小鼠小腸上皮屏障損傷的修復(fù)*

石 柳1， 夏忠勝2， 賴(lài) 宇2△， 王思儀2， 畢文婷2， 劉 雨2， 于 濤2， 陳其奎2

(1贛州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江西 贛州 341000；2中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州 510120)

目的： 探討瑞巴派特能否通過(guò)促進(jìn)腸道上皮屏障結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)改善阿司匹林導(dǎo)致的小腸黏膜損傷。方法: 本研究利用BALB/c小鼠，使用阿司匹林(200 mg·kg-1·d-1)連續(xù)5 d灌胃的方法制作小腸損傷模型，并根據(jù)是否誘導(dǎo)小腸損傷及接受瑞巴派特(320 mg·kg-1·d-1)的處理將小鼠分為正常對(duì)照組、模型組、瑞巴派特對(duì)照組及瑞巴派特治療組。通過(guò)透射電鏡、免疫組化、qPCR和Western blot等方法，在不同時(shí)點(diǎn)系統(tǒng)地觀察瑞巴派特對(duì)阿司匹林所致的小鼠小腸黏膜損傷模型中小腸黏膜結(jié)構(gòu)及屏障功能蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果: 阿司匹林所致的小腸黏膜損傷小鼠，經(jīng)瑞巴派特(320 mg·kg-1·d-1)連續(xù)5 d處理后，小腸上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)的損害明顯減輕，小腸組織中緊密連接蛋白ZO-1及occludin在mRNA及蛋白質(zhì)水平的表達(dá)均明顯增加(P<0.05)，環(huán)氧化酶2(COX-2)和增殖相關(guān)信號(hào)分子β-catenin、c-Myc的表達(dá)也高于對(duì)照組(P<0.05)，組織勻漿中前列腺素E2濃度顯著增加(P<0.05)，而COX-1的表達(dá)在治療組中無(wú)明顯改變。同時(shí)，治療組血清中的D-乳酸水平明顯降低(P<0.05)。結(jié)論: 瑞巴派特能夠通過(guò)上調(diào)COX-2的表達(dá)，促進(jìn)阿司匹林所致的小鼠小腸黏膜損傷的修復(fù)，改善腸屏障的結(jié)構(gòu)與功能。

瑞巴派特； 阿司匹林； 小腸黏膜損傷； β-catenin； 環(huán)氧化酶2

非甾體類(lèi)抗炎藥(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)是一類(lèi)臨床廣泛應(yīng)用的藥物。其中乙酰水楊酸(acetylsalicylic acid，ASA；又稱(chēng)阿司匹林)應(yīng)用最為普遍。而隨著腸溶阿司匹林的廣泛應(yīng)用，阿司匹林所致的小腸黏膜損傷(small intestinal injury, SII)越來(lái)越受到關(guān)注[1]。阿司匹林主要通過(guò)抑制環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)減少前列腺素(prostaglandin，PG)的生成，進(jìn)而對(duì)胃腸黏膜造成損傷[2]。為了減少或修復(fù)該種損傷，臨床上需要一種能夠增加胃腸黏膜中PG或COX水平，從而促進(jìn)小腸黏膜修復(fù)的藥物。瑞巴派特(rebamipide, Reb)作為一種PG誘導(dǎo)劑，一直用于胃黏膜的保護(hù)及促進(jìn)胃黏膜的修復(fù)。雖然有少數(shù)報(bào)道提示，瑞巴派特可能通過(guò)線粒體保護(hù)改善腸道黏膜的結(jié)構(gòu)和功能，但影響腸上皮增殖、屏障功能改善的通路機(jī)制尚不明確，需要進(jìn)一步探討[3-4]。

本研究通過(guò)觀察瑞巴派特對(duì)阿司匹林誘導(dǎo)的小鼠小腸黏膜損傷模型中小腸上皮黏膜屏障結(jié)構(gòu)與功能，以及主要功能分子表達(dá)的影響，評(píng)價(jià)瑞巴派特對(duì)COX及相關(guān)上皮增殖通路的作用，從而初步探討瑞巴派特對(duì)小鼠小腸黏膜損傷修復(fù)及改善屏障結(jié)構(gòu)與功能的機(jī)制。

材料和方法

1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

BALB/c小鼠，雌雄各半，共72只，體重19～20 g，8周齡，購(gòu)于中山大學(xué)北校區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，在中山大學(xué)北校區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的清潔級(jí)(SPF級(jí))環(huán)境中飼養(yǎng)。

BALB/c小鼠72只，隨機(jī)分為4組，每組18只。分組如下：(1)正常對(duì)照(control，Con)組：正常飲食；(2)Reb對(duì)照組(Con-Reb組)組：前5 d胃飼生理鹽水，第5 d開(kāi)始胃飼瑞巴派特(320 mg·kg-1·d-1)，溶于生理鹽水，每天分3次給藥，連續(xù)5 d；(3)SII組：胃飼阿司匹林(200 mg·kg-1·d-1)連續(xù)5 d,第5 d開(kāi)始胃飼生理鹽水；(4)瑞巴派特治療組(SII-Reb組)：阿司匹林(200 mg·kg-1·d-1)連續(xù)5 d處理，成模后給予瑞巴派特(320 mg·kg-1·d-1)，一天分3次給藥，連續(xù)胃飼5 d。以上各組分別于第0、5、10天組內(nèi)隨機(jī)處死小鼠，常規(guī)取材，每組每個(gè)時(shí)點(diǎn)處死6只。上述第0天代表各組小鼠造模前，第5天代表小鼠小腸損傷造模后、治療前，第10天代表瑞巴派特干預(yù)后。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1小腸上皮(腸屏障)間隙的觀察 常規(guī)取材、固定標(biāo)本[5]，采用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope，TEM)觀察各組小腸上皮細(xì)胞之間的間隙改變情況。

2.2上皮緊密連接蛋白、COX及增殖通路分子的表達(dá) 分別采用定量RT-PCR和Western blot 的方法從mRNA及蛋白質(zhì)水平測(cè)定各組中待測(cè)分子的表達(dá)。其中，上皮緊密連接蛋白為ZO-1及occludin；COX家族為COX-1及COX-2；增殖通路分子為β-catenin及c-Myc。常規(guī)提取總RNA及蛋白質(zhì)，各分子的引物由上海生工公司設(shè)計(jì)、合成。小鼠ZO-1的上游引物為5’-CCA CCT CTG TCC AGC TCT TC-3’，下游引物為5’-CAC CGG AGT GAT GGT TTT CT-3’； occludin的上游引物為5’-CCT CCA ATG GCA AAG TGA AT-3’，下游引物為5’-CTC CCC ACC TGT CGT GTA GT-3’； COX-1的上游引物為5’-ATT CCT TCA TGT CGG ACG AG-3’，下游引物為5’-ACT GAG AAG CCC CCT CAA AT-3’； COX-2的上游引物為5’-ACG AAA TCA ACA ACC CCG TA-3’， 下游引物為5’-GGC AGA ACG ACT CGG TTA TC-3’； β-catenin的上游引物為5’-GTG CAA TTC CTG AGC TGA CA-3’，下游引物為5’-CTT AAA GAT GGC CAG CAA GC-3’； c-Myc的上游引物為5’-TCC TGT ACC TCG TCC GAT TC-3’， 下游引物為5’-GGT TTG CCT CTT CTC CAC AG-3’; 18S核糖體的上游引物為5’-GCT AGG AAT AAT GGA ATA GG-3’，下游引物為5’-ACT TTC GTT CTT GAG GAA TG-3’。qPCR的試劑購(gòu)于TaKaRa。Western blot所需的抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司。qPCR的結(jié)果通過(guò)2-ΔΔCt法表示；Western blot的結(jié)果通過(guò)以β-actin為內(nèi)參照的相對(duì)灰度法表示。

2.3腸屏障功能的測(cè)定 測(cè)定各組小鼠血清中D-乳酸(D-lactate，D-LAC)的水平反映腸屏障的狀態(tài)，試劑盒購(gòu)于上海的西唐生物科技有限公司，通過(guò)分光光度計(jì)并進(jìn)行比色檢測(cè)各組小鼠血清中D-LAC的水平。

2.4小腸上皮增殖狀態(tài)的測(cè)定 采用增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)標(biāo)記的免疫組化法測(cè)定上皮細(xì)胞中處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞，通過(guò)計(jì)算增殖指數(shù)(一個(gè)絨毛-隱窩上皮單位中PCNA陽(yáng)性細(xì)胞的比例)評(píng)價(jià)各組小鼠小腸上皮的增殖狀態(tài)，抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

2.5小腸局部PGE2水平的測(cè)定 常規(guī)取材，制作小腸組織勻漿，離心后提取上清液，采用ELISA法測(cè)定各組小腸組織中PGE2的水平，試劑盒購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有資料統(tǒng)計(jì)均采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)描述，兩組成對(duì)資料均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)之間采用單因素方差分析并用Bonferroni法進(jìn)行各組均數(shù)間的兩兩比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1瑞巴派特促進(jìn)阿司匹林誘導(dǎo)小腸損傷后(腸屏障)小腸上皮細(xì)胞間隙的修復(fù)

透射電鏡觀察的結(jié)果顯示，SII及SII-Reb組模型小鼠經(jīng)200 mg·kg-1·d-1劑量的阿司匹林連續(xù)5 d處理后小腸上皮細(xì)胞間隙明顯增寬。而SII-Reb組小鼠經(jīng)320 mg·kg-1·d-1瑞巴派特連續(xù)5 d處理后，其小腸上皮細(xì)胞間的間隙較SII組明顯變小，見(jiàn)圖1。

其三，巡檢工作不到位。在城市燃?xì)夤艿劳度脒\(yùn)行之后，城市燃?xì)夤艿老嚓P(guān)單位承擔(dān)著管道運(yùn)行維護(hù)的責(zé)任，它們需要組織人員對(duì)管道日常運(yùn)行進(jìn)行巡檢，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并排除一些潛在的安全隱患或是突發(fā)問(wèn)題，這樣可以最大程度的避免燃?xì)庑孤妒鹿实陌l(fā)生。然而在實(shí)際工作中，管道運(yùn)行巡檢工作不到位的情況十分常見(jiàn)，這也為燃?xì)庑孤堵裣铝穗[患。

Figure 1. The intervals between the intestinal epithelial cells observed under TEM at different time points. The wider intervals (green arrowheads) between the intestinal epithelial cells were indicated. The scale bar=200 nm.

圖1透射電鏡顯示的各組不同時(shí)點(diǎn)的小腸上皮細(xì)胞間隙

2瑞巴派特上調(diào)腸上皮緊密連接蛋白的表達(dá)

SII及SII-Reb組小鼠經(jīng)200 mg·kg-1·d-1阿司匹林連續(xù)5 d誘導(dǎo)損傷后，小腸標(biāo)本中ZO-1以及occludin的mRNA及蛋白表達(dá)水平均比Con-Reb組及Con組顯著下降(P<0.05)，提示阿司匹林可以導(dǎo)致小腸緊密連接結(jié)構(gòu)受損。 損傷后通過(guò)瑞巴派特的處理，實(shí)驗(yàn)第10天時(shí)SII-Reb組小腸組織中緊密連接蛋白ZO-1及occludin的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平較均對(duì)照組SII-Sal組明顯上調(diào)(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

3瑞巴派特改善小腸損傷后的腸屏障功能

對(duì)血中D-LAC水平的分析顯示，阿司匹林(200 mg·kg-1·d-1)連續(xù)5 d的處理后可以使SII組及SII-Reb組小鼠腸道的通透性明顯增加，腸屏障功能受損(P<0.05)，而非小腸損傷的對(duì)照組中則無(wú)明顯改變。實(shí)驗(yàn)第10天，通過(guò)連續(xù)5 d的瑞巴派特處理，SII-Reb組升高的血D-LAC水平較未接受處理的SII組明顯減低(P<0.05)，提示瑞巴派特可以改善受損的小腸屏障功能，見(jiàn)圖3。

Figure 2. The mRNA (A) and protein (B) expression of ZO-1 and occludin in the small intestine of the 4 groups. Mean±SEM.n=6.*P<0.05vsCon-Reb;#P<0.05vsSII.

圖2緊密連接蛋白ZO-1及occludin的mRNA和蛋白質(zhì)在各組小鼠小腸組織中的表達(dá)情況

Figure 3. The serum levels of D-LAC in the mice of the 4 groups. Mean±SEM.n=6.*P<0.05vsCon-Reb.

圖3各組小鼠血中的D-LAC水平

4瑞巴派特促進(jìn)小腸損傷后的上皮細(xì)胞增殖

免疫組化結(jié)果顯示，增殖指數(shù)PCNA表達(dá)于腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞核。經(jīng)阿司匹林誘導(dǎo)小腸損傷后SII-Reb組及SII-Sal組的小鼠小腸上皮增殖指數(shù)均明顯較Con-Reb及Con組減低(P<0.05)。損傷后經(jīng)過(guò)瑞巴派特連續(xù)5 d的處理，在實(shí)驗(yàn)第10天時(shí)SII-Reb組小鼠小腸上皮PCNA細(xì)胞增殖指數(shù)明顯增高，達(dá)(82.5±2.84)%，顯著高于SII組(P<0.05)，見(jiàn)圖4。

5瑞巴派特對(duì)小腸上皮COX、PGE2及增殖通路分子表達(dá)的影響

在阿司匹林誘導(dǎo)小腸損傷后，SII及SII-Reb組小鼠小腸組織中COX-1、COX-2、β-catenin及c-Myc的mRNA及蛋白質(zhì)水平均明顯減低(P<0.05)；同時(shí)，小鼠腸組織勻漿上清液中PGE2的水平也明顯下降(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)第10天時(shí)，經(jīng)320 mg·kg-1·d-1瑞巴派特連續(xù)5 d處理后，SII-Reb組小腸組織中的COX-2、β-catenin和c-Myc的表達(dá)較對(duì)照的RII-Reb組顯著增加(P<0.05)， 組織勻漿中減低的PGE2也明顯增加(P<0.05)，但COX-1的表達(dá)無(wú)明顯改變，見(jiàn)圖5。

Figure 4. The intestinal PCNA-positive cells (arrowheads) in the 4 groups detected by immunohistochemistry. The scale bar=50 μm. Mean±SEM.n=6.*P<0.05vsCon-Reb;#P<0.05vsSII.

圖4免疫組化法顯示各組腸上皮的PCNA陽(yáng)性細(xì)胞及增殖指數(shù)

討 論

目前，隨著膠囊內(nèi)鏡等小腸黏膜檢查手段的發(fā)展，阿司匹林誘發(fā)的小腸損傷也逐漸受到臨床的重視[6]。而目前對(duì)阿司匹林所致的小腸黏膜屏障的損傷仍沒(méi)有較為明確的預(yù)防及治療方法。瑞巴派特作為促進(jìn)前列腺素增加的藥物，可以顯著提高胃腸黏膜的血流，使胃腸黏膜得到充分的血液供應(yīng)和營(yíng)養(yǎng)，目前已有研究提示其對(duì)腸道黏膜屏障有預(yù)防損傷的作用，但具體機(jī)制尚不明確[3, 7-8]。

為了研究阿司匹林經(jīng)過(guò)胃腸道吸收后所致的小腸損傷，本實(shí)驗(yàn)組在其它相關(guān)研究的基礎(chǔ)上[9-11],使用胃飼小鼠的方法進(jìn)行給藥，并評(píng)估了不同的阿司匹林劑量下小鼠小腸的損傷情況，從而確定了較為穩(wěn)定的阿司匹林誘導(dǎo)小腸損傷的小鼠模型條件，即阿司匹林200 mg·kg-1·d-1，連續(xù)5 d，為本次實(shí)驗(yàn)提供了基礎(chǔ)。

完整的小腸黏膜屏障由小腸上皮、上皮細(xì)胞間緊密連接及上皮間質(zhì)構(gòu)成，是小腸功能的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。ZO-1和occludin是上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)的主要蛋白分子，對(duì)腸上皮起穩(wěn)定作用[12]。因此，當(dāng)ZO-1及occludin的表達(dá)水平減低時(shí)可提示腸上皮黏膜結(jié)構(gòu)屏障受損。在本次研究中，經(jīng)阿司匹林誘導(dǎo)小腸損傷后SII-Reb組小鼠給予320 mg·kg-1·d-1的瑞巴派特連續(xù)5 d處理后，其小腸組織中ZO-1及occludin分子的表達(dá)水平顯著上升，與對(duì)照的SII-Sal組相比有顯著差異，這一結(jié)果與電鏡下觀察到的上皮間隙改變趨勢(shì)是一致的，提示瑞巴派特可以通過(guò)上調(diào)緊密連接蛋白的表達(dá)，改善腸上皮的屏障結(jié)構(gòu)。

阿司匹林可以導(dǎo)致小鼠小腸上皮黏膜屏障結(jié)構(gòu)破壞，同時(shí)亦可影響其功能，導(dǎo)致通透性增加[13]。作為腸道內(nèi)細(xì)菌固定產(chǎn)物之一的D-LAC，在腸屏障受損而通透性增加時(shí)，血中D-LAC水平會(huì)明顯升高[14]。本次研究顯示，經(jīng)阿司匹林誘導(dǎo)小腸損傷后的小鼠血中D-LAC水平顯著升高，隨后給予320 mg·kg-1·d-1瑞巴派特連續(xù)處理5 d后，SII-Reb組血液中D-LAC的水平較未經(jīng)瑞巴派特處理的SII組明顯降低。這一結(jié)果提示，瑞巴派特在修復(fù)阿司匹林損傷的小腸上皮屏障結(jié)構(gòu)的同時(shí)，還改善了小腸黏膜屏障的功能。

本次研究通過(guò)PCNA標(biāo)記的增殖狀態(tài)的腸上皮細(xì)胞，并通過(guò)計(jì)算增殖指數(shù)推測(cè)各組小腸上皮的增殖情況。結(jié)果顯示阿司匹林可以減低小腸上皮細(xì)胞的增殖，使得小腸上皮損傷后短期內(nèi)難以修復(fù)，而瑞巴派特處理后的SII-Reb組小腸上皮細(xì)胞增殖指數(shù)明顯增高，提示瑞巴派特可以促進(jìn)小鼠小腸上皮細(xì)胞損傷后的增殖及修復(fù)。

本次研究顯示，經(jīng)阿司匹林誘導(dǎo)損傷后小鼠小腸黏膜的COX-1和COX-2都明顯受到抑制，同時(shí)PGE2顯著減少，提示阿司匹林造成小腸黏膜的損傷可能與其誘發(fā)胃黏膜損傷的機(jī)制相似。一些相關(guān)研究提示，上調(diào)腸道中的COX-2及PGE2可通過(guò)Wnt/β-catenin通路促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞的增殖[15-16]。同時(shí)，COX及增殖相關(guān)通路分子的測(cè)定顯示，經(jīng)瑞巴派特處理后小腸組織中COX-2明顯升高，PGE2水平也同步增加，β-catenin通路中的重要調(diào)節(jié)分子β-catenin及其下游的c-Myc表達(dá)也在瑞巴派特處理后顯著上調(diào)，與COX-2及PGE2的改變趨勢(shì)一致，但COX-1的表達(dá)在阿司匹林誘導(dǎo)減低后并未隨著瑞巴派特的處理而回升。這一結(jié)果提示，瑞巴派特可增加阿司匹林誘導(dǎo)的小腸損傷組織中COX-2的表達(dá)水平，并促進(jìn)局部PGE2的產(chǎn)生，進(jìn)而通過(guò)上調(diào)β-catenin增殖相關(guān)通路促進(jìn)腸上皮的增殖、修復(fù)和屏障結(jié)構(gòu)與功能的改善。這一過(guò)程中，COX-1持續(xù)處于低表達(dá)的受抑制狀態(tài)，提示瑞巴派特主要通過(guò)上調(diào)COX-2對(duì)損傷的小鼠小腸上皮黏膜進(jìn)行修復(fù)，而不是COX-1。

Figure 5. The mRNA (A) and protein (B) expression of β-catenin, c-Myc and COX， and PGE2concentration (C) in the mouse small intestine after rebamipide administration in the 4 groups. Mean±SEM.n=6.*P<0.05vsCon-Reb;#P<0.05vsSII.

圖5β-catenin、c-Myc、COX及PGE2水平在各組腸上皮組織中的變化

總之，本次研究證實(shí)瑞巴派特可通過(guò)上調(diào)COX-2及PGE2促進(jìn)阿司匹林誘導(dǎo)的小鼠小腸上皮損傷后的修復(fù)及腸屏障結(jié)構(gòu)與功能的恢復(fù)，這一過(guò)程與β-catenin增殖通路上調(diào)有關(guān)。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Rebamipide repairs injury of small intestinal epithelial barrier induced by aspirin in mice

SHI Liu1, XIA Zhong-sheng2, LAI Yu2, WANG Si-yi2, BI Wen-ting2, LIU Yu2, YU Tao2, CHEN Qi-kui2

(1Department of Gastroenterology, Ganzhou People’s Hospital, Ganzhou 341000, China;2Department of Gastroenterology, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China. E-mail: ayang_lai@163.com)

AIM: To investigate whether rebamipide repairs the small intestinal epithelial barrier in aspirin-induced small intestinal injury (SII) in mice and its mechanism.METHODS: Small intestinal injury was induced by aspirin (200 mg·kg-1·d-1for 5 d) in BALB/c mice. Based on the treatment with aspirin and/or rebamipide (320 mg·kg-1·d-1), the mice were divided into 4 groups (n=18 in each group). The living mice in each group (n=6) were sacrificed via cervical dislocation method at day 0, day 5, and day 10. The structure and function of intestinal barrier and the levels of the signaling pathway factors were measured by transmission electron microscopy, immunohistochemistry, qPCR, and Western blot.RESULTS: Tight junctions between intestinal epithelial cells improved significantly after reba-mipide treatment. The expression of ZO-1 and occludin in the injured small intestine showed a gradually increasing trend after rebamipide administration (P<0.05). There was a decreased trend of D-lactate level in rebamipide-treated SII mice (P<0.05). The expression of cyolooxygenase-2 (COX-2), β-catenin, and c-Myc, and prostaglandin E2concentration in small intestinal tissues were significantly increased in rebamipide treatment group (P<0.05). However, down-regulated COX-1 expression in the SII mice was sustained at a low level after rebamipide administration.CONCLUSION: Rebami-pide repairs the injury of small intestinal mucosa and improves the structure and function of small intestinal barrier in aspirin-induced SII mice by up-regulating the expression of COX-2.

Rebamipide; Aspirin; Small intestinal injury; β-catenin; Cyclooxygenase-2

1000- 4718(2017)09- 1669- 07

2016- 12- 19 [

] 2017- 05- 03

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81370475)

R965； R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.09.022

△通訊作者 Tel: 020-34078169； E-mail: ayang_lai@163.com