劉敏劉琳琳

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頭孢地嗪鈉含量和有關(guān)物測(cè)定方法分析

劉敏1劉琳琳2

1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)·北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司 哈爾濱分公司 150000；

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目的：探討頭孢地嗪鈉中主要成分的含量測(cè)定方法。方法：利用HPLC法進(jìn)行測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相A為pH3.2醋酸銨溶液，流動(dòng)相B為乙腈，流速為1.0mL/min，線性梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫35℃。結(jié)果：各雜質(zhì)峰與主成分峰能完全分離，頭孢地嗪鈉的檢測(cè)限為0.056μg/mL，定量限為0.22μg/mL，頭孢地嗪鈉在0.15ˉ769.2 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＞0.999），80%，100%，120%濃度下各進(jìn)3個(gè)平行樣，測(cè)得含量的RSD為0.25%。結(jié)論：采用HPLC法測(cè)定頭孢地嗪鈉的成分含量具有很好的穩(wěn)定性，測(cè)量結(jié)果較為準(zhǔn)確，適合相關(guān)領(lǐng)域的測(cè)定要求。

頭孢地嗪鈉；含量；測(cè)定

作為頭孢的第三代抗菌性藥品，頭孢地嗪鈉具有很強(qiáng)的免疫增強(qiáng)作用，能夠針對(duì)免疫系統(tǒng)疾病有很好的控制作用，這是因?yàn)轭^孢地嗪鈉能夠在人體內(nèi)激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的殺菌能力，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。對(duì)于頭孢地嗪鈉的含量測(cè)定，一般多采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，在此本文就探討了其具體的測(cè)定過(guò)程。

1、儀器與試藥

1.1 儀器

WatersAlliance2695高效液相色譜儀，2996PDA 檢測(cè)器；MettlerToledo320pH計(jì)；AT260分析天平；Platisil18（250mm4.6mm，5m）色譜柱；Milli-Q超純水系統(tǒng)。

1.2 試藥

乙腈；醋酸銨；甲酸；頭孢地嗪鈉對(duì)照品（含量90.9%），樣品，及雜質(zhì)對(duì)照品[7-氨基頭孢烷酸（7-ACA）、頭孢地嗪母核（3-MTA）、頭孢地嗪側(cè)鏈酸（MMTA）、去乙酰頭孢噻肟（DF）、去乙酰氧頭孢噻肟（DSF）、頭孢噻肟、頭孢噻肟?jī)?nèi)酯（L）]。

2、方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Pl18（250mm×4.mm，5μm）；流動(dòng)相A為醋酸銨溶液（取醋酸銨1.9g，2000mL水溶解，甲酸調(diào)pH3.2），流動(dòng)相B為乙腈，線性梯度洗脫，流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量為20μL。

表1 流動(dòng)相及洗脫程序

2.2 溶液的制備

2.2.1 頭孢地嗪鈉供試品溶液

取本品適量，精密稱(chēng)定，加乙腈-水（19：81）混合溶液溶解并制成每1mL約含0.5mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.2 頭孢地嗪鈉對(duì)照品溶液

取頭孢地嗪對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加乙腈-水（19：81）混合溶液溶解并制成每1mL約含0.5mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 含量測(cè)定

精密量取供試品溶液、對(duì)照品溶液各20L，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標(biāo)法計(jì)算樣品中頭孢地嗪（C20）含量。

2.2.4 有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)

精密量取對(duì)照品溶液1mL，置入100mL量瓶，用乙腈-水（19：81）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取對(duì)照溶液 20L注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分色譜峰的峰高至少為滿量程的10%，再取供試品溶液20L注入液相色譜儀，記錄色譜圖，頭孢地嗪峰和相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。供試品溶液如有雜質(zhì)峰，按1%自身對(duì)照法進(jìn)行計(jì)算。

2.3 分析方法驗(yàn)證

2.3.1 專(zhuān)屬性考察

為考察本方法能否有效檢測(cè)本產(chǎn)品在生產(chǎn)及儲(chǔ)存過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、合成工藝及貯存條件等，進(jìn)行了以下強(qiáng)制降解和分離度考察試驗(yàn)。

2.3.1.1 強(qiáng)制降解試驗(yàn)

將樣品粉末分別進(jìn)行高溫破壞（60℃，10d），紫外光照破壞（UV254nm，10d），強(qiáng)氧化（35%過(guò)氧化氫溶液，15min）、強(qiáng)酸（1mol/L鹽酸溶液，100min）、強(qiáng)堿（0.1mol/L氫氧化鉀溶液，5min）破壞。結(jié)果表明，頭孢地嗪鈉在堿性和氧化條件下較易降解，光照條件下MMTA和異構(gòu)體2（HPLC-MS鑒別）均有增加；堿性條件下產(chǎn)生異構(gòu)體1、異構(gòu)體3和異構(gòu)體4（均由HPLC-MS鑒別）；酸性條件下雜質(zhì)L增加。強(qiáng)制降解產(chǎn)生的雜質(zhì)180食品與藥品FoodDrug2015年第17卷第3期均能與主成分完全分離。

2.3.1.2 分離度考察

將頭孢地嗪鈉與各雜質(zhì)（主要包括起始原料、中間體、副產(chǎn)物等）的對(duì)照品混合溶解后進(jìn)樣，進(jìn)行分離度考察，以考察本方法能否有效監(jiān)測(cè)生產(chǎn)工藝中產(chǎn)生的雜質(zhì)。頭孢地嗪鈉供試品溶液（含頭孢地嗪約 0.5mg/mL）、頭孢地嗪鈉和雜質(zhì)混合液（含頭孢地嗪約0.5mg/mL，各雜質(zhì)的濃度約0.5～1.5μg/mL）的色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，各雜質(zhì)均能得到較好分離。

圖1 頭孢地嗪鈉供試品溶液、頭孢地嗪鈉和雜質(zhì)混合液的色譜圖

上述試驗(yàn)表明，本方法有良好的專(zhuān)屬性，適用于頭孢地嗪鈉在生產(chǎn)和貯存過(guò)程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)。

2.3.2 檢測(cè)限和定量限測(cè)定

精密稱(chēng)取頭孢地嗪鈉對(duì)照品，用乙腈-水（19：81）混合溶液溶解并稀釋?zhuān)瞥珊^孢地嗪鈉0.044，0.13μg/mL的溶液，重復(fù)進(jìn)樣3次。按S/N=3計(jì)算，頭孢地嗪鈉的檢測(cè)限為0.056μg/mL；按S/N=10計(jì)算，頭孢地嗪鈉的定量限為0.22μg/mL。

2.3.3 線性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取頭孢地嗪鈉對(duì)照品，用乙腈-水（19：81）混合溶液溶解稀釋?zhuān)瞥珊^孢地嗪鈉0.1479，0.4929，4.929，9.858，24.64，49.29，98.58，218.7，306.9，388.2，411.1，505.4，599.4，619.7，769.2mg/mL系列不同濃度的對(duì)照品溶液，以濃度 C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)做回歸直線，見(jiàn)表2。

表2 回歸方程

2.3.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取頭孢地嗪鈉對(duì)照品共9份，用乙腈-水（19：81）混合溶液溶解制得 80%，100%（0.5mg/mL），120%濃度水平的溶液。按2.2.3項(xiàng)方法測(cè)定每一樣品的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.5 精密度和重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取頭孢地嗪鈉對(duì)照品約50.0mg，共6份，用乙腈-水（19：81）混合溶液溶解，制成每1mL約含0.5mg的溶液，搖勻。進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算頭孢地嗪鈉響應(yīng)因子的RSD為0.13%。其中一份溶液連續(xù)進(jìn)6次，記錄峰面積。頭孢地嗪鈉峰面積的RSD為0.2%。結(jié)果表明，該方法的精密度良好。

2.3.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

將頭孢地嗪鈉分別用流動(dòng)相（A：B=81：19）、水、乙腈-水（19：81）溶解，室溫20℃下放置，分別于80，160，240，320，360，420min進(jìn)樣測(cè)定，考察各雜質(zhì)的變化情況。結(jié)果顯示，用流動(dòng)相溶解的樣品溶液非常不穩(wěn)定，雜質(zhì)增加顯著，總雜質(zhì)增加3.2%。用水和乙腈-水（19：81）溶解的樣品溶液比較穩(wěn)定，總雜質(zhì)量的變化小于0.1%。鑒于樣品在流動(dòng)相中（A：B=81：19）降解較快，用水溶解時(shí)樣品溶液雖然穩(wěn)定，但水的空白峰影響積分，故采用乙腈-水（19：81）溶解樣品。

2.3.7 耐用性試驗(yàn)

選用Gemini18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，各雜質(zhì)的保留和分離情況與Platisil柱一致。

3、討論

從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以看出，采用高效液相色譜法對(duì)頭孢地嗪鈉的成分含量進(jìn)行測(cè)定是十分可行的，且其適應(yīng)性、專(zhuān)屬性、精密度、準(zhǔn)確度、線性、耐用性和溶液穩(wěn)定性均良好；定量限和檢測(cè)限滿足檢測(cè)需要。

[1]姜曉峰，臧恒昌，薛宗文.頭孢地嗪鈉含量和有關(guān)物測(cè)定方法研究[J].食品與藥品，2015（3）：179-183.

[2]劉錫魯，王艷芳，張鈺.注射用頭孢地嗪鈉聚合物測(cè)定方法的研究[J].疾病監(jiān)測(cè)與控制，2009（1）：16-17.

R712+.3

A

1672-5018（2017）02-005-2