李結(jié)周

(澄邁縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，澄邁571900)

化學(xué)發(fā)光法與POCT檢測降鈣素原的方法比較及臨床應(yīng)用

李結(jié)周

(澄邁縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，澄邁571900)

1975年，Moya等[1]應(yīng)用放射性氨基酸在雞后腮腺發(fā)現(xiàn)降鈣素(Calcitonin,CT)的合成來自于分子量為13 000(CT分子量為:3 500)的前體物質(zhì)(降鈣素原)，鼠研究中發(fā)現(xiàn)CT位于PCT(Procalcitonin)編碼序列的60～91，且PCT兩側(cè)有N端和羧端[2]，人類PCT作為一種無激素活性的糖蛋白由11號染色體降鈣素Ⅰ基因(CALC-Ⅰ)編碼(1～57為N殘端，60～91為降鈣素，96～116為降鈣蛋白)，通過選擇性剪接(編碼1～4外顯子)生成mRNA，轉(zhuǎn)錄后在甲狀腺濾泡旁細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)翻譯成降鈣素原前體，繼而在高爾基復(fù)合體及分泌囊中經(jīng)一系列水解酶作用裂解形成[3，4]，其在人體內(nèi)的半衰期約20～24 h，穩(wěn)定性好，人血清PCT含量極低，約2.5 pg/ml(運(yùn)用高效液相色譜分析)，在一些非甲狀腺損傷如由細(xì)菌感染引起的全身炎癥反應(yīng)、敗血癥或膿毒性休克、慢性腎衰竭等患者血清PCT及其組分均顯著升高。

目前我科考慮將原有的POCT(Point of care testing)熒光免疫分析法替換為更先進(jìn)，更準(zhǔn)確的化學(xué)發(fā)光法。故進(jìn)行兩種方法臨床結(jié)果比對試驗(yàn)，以確認(rèn)試劑性能是否滿足實(shí)驗(yàn)室要求。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1比對試驗(yàn)樣本來源 收集2016年10月8日至2016年11月30日，本院降鈣素原標(biāo)本共376例，同時(shí)收集臨床標(biāo)本以及臨床信息，按照樣本的臨床情況將已經(jīng)確診為中度炎癥反應(yīng)或者膿毒癥的患者分為陽性組(>0.5 ng/ml)，有輕度炎癥反應(yīng)或者局部感染的患者劃分為可疑組(0.1～0.5 ng/ml)，將無炎癥反應(yīng)的患者劃分為陰性組(<0.1 ng/ml)，進(jìn)行兩種不同方法的研究比對。

1.1.2日間重現(xiàn)性試驗(yàn)標(biāo)本來源 收集1.1.1中的陽性組(>0.5 ng/ml)、可疑組(0.5～0.1 ng/ml)、陰性組(<0.1 ng/ml)的標(biāo)本各1例分別分裝成5管，每管分裝200 μl，置于-20℃冰箱中保存。連續(xù)5 d進(jìn)行日間重現(xiàn)性檢測。

1.1.3試劑與儀器 深圳市新產(chǎn)業(yè)MAGLUMI 4000以及配套的PCT試劑，方法為化學(xué)發(fā)光免疫分析法。另外比對的廠家為，瑞萊生物公司ReLIA SSJ-2以及配套的PCT試劑。

1.2方法

1.2.1準(zhǔn)確性檢測 收集臨床標(biāo)本以及臨床信息，根據(jù)1.1.1的分組，采用兩種不同的方法學(xué)進(jìn)行檢測，并記錄結(jié)果。

1.2.2日間重現(xiàn)性 取1.2.1中的陽性組、可疑組、陰性組標(biāo)本各1例，連續(xù)檢測5 d，每天連續(xù)檢測5次，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)，并做記錄，計(jì)算。

2 結(jié)果

兩種方法的準(zhǔn)確性比較結(jié)果見表1。新產(chǎn)業(yè)檢測陽性組、可疑組、陰性組樣本的RSD%分別為0.11%、0.16%、0.21%,瑞萊生物檢測陽性組、可疑組、陰性組樣本的RSD%分別為0.18%、0.27%、0.57%。在準(zhǔn)確度以及日間重現(xiàn)性方面進(jìn)行方法的研究比較，結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法比POCT方法更加準(zhǔn)確，重現(xiàn)性更好。但是從使用的領(lǐng)域方面來說，POCT法有著儀器小巧，便攜，操作簡單，非專業(yè)人士能夠快速上手等優(yōu)勢。

3 討論

降鈣素原(PCT)目前已經(jīng)成為臨床上全身性細(xì)菌感染診斷過程中必不可少的檢測指標(biāo)之一，在美國、德國等發(fā)達(dá)國家中，已經(jīng)將PCT檢測列入膿毒癥以及ICU發(fā)熱患者的臨床診斷指南中。

表1化學(xué)發(fā)光法與POCT準(zhǔn)確性對比

Tab.1Comparisonofaccuracybetweenchemilunninesc-enceandPOCT

GroupsAmountofsamplesNewindustryAccuracyRuilaiAccuracyPositivegroup(>0.5ng/ml)14314097.9%12587.4%Suspiciousgroup(0.1～0.5ng/ml)555294.6%4581.8%Negativegroup(<0.1ng/ml)17816793.8%12067.4%

PCT濃度和炎癥嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，并隨著炎癥的控制和病情的緩解而降低至正常水平，因而PCT可作為判斷病情發(fā)展、療效及預(yù)后可靠指標(biāo)。低濃度的PCT血清水平提示治療有效或預(yù)后良好，而高水平PCT的細(xì)菌膿毒癥患者生存率較低。PCT在感染或非感染性休克中顯著升高，且PCT與膿毒癥患者器官衰竭的嚴(yán)重性呈正相關(guān)，是檢測膿毒癥患者器官功能損傷良好的指標(biāo)。PCT濃度的升高可警示醫(yī)生需對患者加強(qiáng)治療或考慮更換其他藥物治療。如果膿毒癥患者使用抗生素24 h PCT下降30%以上，72 h下降50%以上，提示感染得到控制或抗生素治療有效，此類患者會有更好的預(yù)后。機(jī)體受到細(xì)菌感染時(shí)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)等傳統(tǒng)檢驗(yàn)項(xiàng)目，預(yù)后的相關(guān)性差，而PCT水平可對細(xì)菌感染的預(yù)后進(jìn)行評估。若PCT水平持續(xù)升高或者一直維持在比較高的水平，常常提示預(yù)后不良；若PCT水平快速降低至正常水平，常提示預(yù)后良好。

目前很多的文獻(xiàn)[5-8]，都表明了不同濃度間，PCT有著不同的診斷建議:當(dāng)PCT質(zhì)量濃度<0.1 ng/ml時(shí)，基本沒有細(xì)菌感染的可能性，強(qiáng)烈建議不使用抗生素；當(dāng)PCT質(zhì)量濃度為0.1～0.25 ng/ml時(shí)，細(xì)菌感染的可能性不大，不建議使用抗生素；當(dāng)PCT質(zhì)量濃度為0.25～0.5 ng/ml時(shí)，可能存在需要治療的細(xì)菌感染，建議使用抗生素；當(dāng)PCT質(zhì)量濃度>0.5 ng/ml時(shí)，很可能存在需要治療的細(xì)菌感染，強(qiáng)烈建議使用抗生素。

本研究通過對化學(xué)發(fā)光法與POCT兩種方法進(jìn)行比較、驗(yàn)證，以篩選出目前最為合適檢驗(yàn)科的方法。從上述的準(zhǔn)確性以及重現(xiàn)性結(jié)果來看，化學(xué)發(fā)光免疫分析法無論在準(zhǔn)確性還是在重現(xiàn)性方面，都高于熒光免疫分析法。但是瑞萊生物公司的產(chǎn)品屬于POCT，具有儀器小巧、便攜、操作簡單、非專業(yè)人士能夠快速上手等優(yōu)勢，而新產(chǎn)業(yè)的化學(xué)發(fā)光免疫分析法在結(jié)果的準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性以及成本更加優(yōu)越。兩個(gè)不同方法學(xué)的設(shè)備都各具優(yōu)勢。在實(shí)驗(yàn)室選擇中，應(yīng)根據(jù)情況進(jìn)行選擇測定。

[1] Moya F,Nieto A,Jl RC.Calcitonin biosynthesis:evidence for a precursor [J].Europ J Biochem,1975,55(2):407-413.

[2] Burns DM,Birnbaum RS,Roos BA.A neuroendocrine peptide derived from the amino-terminal half of rat procalcitonin [J].Mol Endocrinol(Baltimore,Md),1989,3(1):140-147.

[3] Russwurm S,Wiederhold M,Oberhoffer M,etal.Molecular aspects and natural source of procalcitonin [J].Clin Chem Laborat Med,1999,37(8):789-797.

[4] 張代民.降鈣素原的測定與臨床應(yīng)用進(jìn)展 [J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2007,24(5):619-622.

[5] 降鈣素原急診臨床應(yīng)用專家共識組.降鈣素原(PCT)急診臨床應(yīng)用的專家共識 [J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2012,21(9):944-951.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會重癥醫(yī)學(xué)分會.中國嚴(yán)重膿毒癥/膿毒性休克治療指南(2014) [J].中華內(nèi)科雜志,2015,54(6):365-367.

[7] 楊 濱,康 梅.降鈣素原在細(xì)菌感染性疾病診斷及治療中的應(yīng)用 [J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2009,36(3):596-597.

[8] 鄭立華,魯辛辛.降鈣素原的臨床研究進(jìn)展 [J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2007,11(1):137-139.

[收稿2017-03-10 修回2017-06-08]

(編輯 許四平 劉格格)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.017

李結(jié)周(1966年-)，男，副主任技師，檢驗(yàn)科主任，主要從事檢驗(yàn)科日常檢測方法的研究，E-mail：jyk67607315@163.com

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