嚴(yán)倩茹，鄔偉魁

(梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071)

·中藥工業(yè)·

基于中藥煮散研究淫羊藿與狗脊配伍合煎對(duì)化學(xué)成分的影響△

嚴(yán)倩茹，鄔偉魁*

(梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071)

目的：建立同時(shí)測定淫羊藿苷與金絲桃苷的HPLC法，結(jié)合指紋圖譜技術(shù)評(píng)價(jià)淫羊藿配伍狗脊煮散對(duì)二者化學(xué)成分的影響。方法：采用HPLC測定淫羊藿苷與金絲桃苷的含量，采用中藥色譜指紋圖譜相似度軟件評(píng)價(jià)兩種溶媒的提取效果，分析合煎液主要色譜峰的來源。結(jié)果：淫羊藿與狗脊水合煎液中淫羊藿苷與金絲桃苷溶出量降低，50%乙醇合煎液中兩種成分溶出量基本不變。結(jié)論：淫羊藿與狗脊配伍合煎后指標(biāo)成分發(fā)生了量變，但未產(chǎn)生新成分；50%乙醇的提取效果優(yōu)于水。

淫羊藿苷；金絲桃苷；高效液相色譜；指紋圖譜

淫羊藿與狗脊是補(bǔ)腰腎方常用配伍。淫羊藿功能溫腎壯陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕；狗脊功能祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝[1]。淫羊藿主要含淫羊藿苷與金絲桃苷[2]等成分，現(xiàn)代藥理研究表明[3]，金絲桃苷與淫羊藿苷在大鼠精液冷凍保存過程中有一定的保護(hù)作用。中藥煮散[4-6]有利于化學(xué)成分煎出，狗脊煮散對(duì)淫羊藿煮散化學(xué)成分的影響未見報(bào)道。本文建立同時(shí)測定金絲桃苷與淫羊藿苷的HPLC法，基于指紋圖譜技術(shù)，研究在水和50%乙醇兩種溶媒中，淫羊藿煮散配伍狗脊煮散后化學(xué)成分的變化。

1 儀器與試藥

美國安捷倫1100型高效液相色譜儀；德國Sartorius BP 211D電子天平。

淫羊藿苷對(duì)照品(110737-200415)、金絲桃苷對(duì)照品(111521-201004)(中國食品藥品檢定研究院)；淫羊藿(01511)、狗脊(01512)購于彬芳大道藥店，經(jīng)梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所鑒定符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定；磷酸、乙腈均為色譜純；其余試劑為分析純；超純水自制。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：SHIMADZUVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)梯度洗脫(0～10min，10%A；10～20min，20%A；20～40min，30%A；)；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；雙波長(0～25min，360nm；25～40min，270nm)；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。指標(biāo)峰分離良好，狗脊煮散對(duì)淫羊藿苷與金絲桃苷測定無干擾。見圖1。

注：A.對(duì)照品；B.合煎液；C.淫羊藿煮散；D.狗脊煮散；1.金絲桃苷；2.淫羊藿苷。圖1 淫羊藿、狗脊及其合煎液的HPLC圖

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品、金絲桃苷對(duì)照品適量，分別用甲醇制成含淫羊藿苷(528μg·mL-1)、金絲桃苷(412μg·mL-1)的對(duì)照品母液。分別精密量取淫羊藿苷、金絲桃苷對(duì)照品母液2、5、10、20、30mL置100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列混合對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液 水煎液：取淫羊藿與狗脊粉末(過四號(hào)篩)各0.5g，精密稱定，加水20mL，加熱煎煮0.5h，濾過，濾液置具塞錐形瓶中，敞口蒸干；精密加入80%甲醇20mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。同法制備淫羊藿與狗脊的單煎液。

50%乙醇煎液：取淫羊藿與狗脊粉末(過四號(hào)篩)各0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。同法制備淫羊藿與狗脊的單煎液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察 分別精密量取上述系列對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積(Y)對(duì)濃度(X，μg·mL-1)進(jìn)行回歸，得回歸方程，金絲桃苷：Y=19.051X+82.811，r=0.9997；淫羊藿苷：Y=21.302X+0.0633，r=0.9999。結(jié)果表明，金絲桃苷在8.24～123.6μg·mL-1，淫羊藿苷在10.56～158.4μg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.3.2精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，金絲桃苷和淫羊藿苷峰面積的RSD分別為1.4%、1.3%，表明該方法精密度良好。

2.3.3重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品粉末0.5g，精密稱定6份，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算金絲桃苷、淫羊藿苷的量，RSD分別為1.2%、0.9%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品溶液，分別于0、4、8、12、16、24h注入色譜儀，記錄金絲桃苷和淫羊藿苷峰面積，RSD分別為1.1%、0.7%，表明24h內(nèi)樣品溶液的穩(wěn)定性良好。

2.3.5回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入一定量的金絲桃苷對(duì)照品和淫羊藿苷對(duì)照品，按照2.2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，再計(jì)算回收率，結(jié)果淫羊藿苷的回收率為98.30%(n=6)，RSD為1.4%，金絲桃苷的回收率為97.60%(n=6)，RSD為1.5%。

2.4樣品測定

取樣品，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算樣品中含量，結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷與金絲桃苷溶出量測定 mg·g-1

結(jié)果表明，以水為溶媒，淫羊藿單煎或與狗脊單煎后合并煎液對(duì)指標(biāo)成分含量基本無影響。以水為溶媒，與狗脊合煎后，淫羊藿中的淫羊藿苷與金絲桃苷溶出量分別下降了19%和58%。以50%乙醇為溶媒，單煎、合煎或分煎后合并，對(duì)淫羊藿中的淫羊藿苷與金絲桃苷的溶出量基本無影響。

2.5指紋圖譜分析

將樣品HPLC圖用國家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件(2012)進(jìn)行疊加分析，指紋圖譜見圖2。結(jié)果顯示：1)S3中的峰都源于S1和S2，S7中的峰都源于S5和S6，未見新色譜峰產(chǎn)生，提示合煎后未產(chǎn)生新化合物；2)S3與S4的相似度為0.976，S7與S8的相似度為0.978，均大于0.95，提示以水或50%乙醇為溶媒，淫羊藿與狗脊單煎后合并煎液或合煎化學(xué)成分基本相同，合煎未產(chǎn)生新成分；3)S2與S6的相似度為0.965，提示淫羊藿水煎液與醇提液化學(xué)成分相似；4)S1與S5的相似度為0.641，提示狗脊水煎液與醇提液化學(xué)成分存在一定的差異；5)S3與S7、S4與S8的相似度分別為0.842、0.828，提示兩種溶媒對(duì)合煎的提取效果存在一定的差異。

注：S1.狗脊水煎液；S2.淫羊藿水煎液；S3.水合煎液；S4.水分煎后合并液；S5.狗脊醇提液；S6.淫羊藿醇提液；S7.醇合煎液；S8.醇分煎后合并液。圖2 淫羊藿、狗脊及其不同方式煎提液的指紋圖譜疊加圖

3 討論

3.1研究對(duì)象的選擇

飲片是中藥臨床應(yīng)用的主要形式，而中藥煮散[7]能提高煎出率，降低原藥材用量。狗脊為根莖類藥材，質(zhì)地較堅(jiān)硬，現(xiàn)行《中華人民共和國藥典》規(guī)定狗脊飲片為厚片[1]。淫羊藿葉片近革質(zhì)，水分不易迅速浸入藥材內(nèi)部組織細(xì)胞。傳統(tǒng)飲片制成煮散后為顆粒狀，可提高有效成分溶出率。本實(shí)驗(yàn)將飲片打粉，過四號(hào)篩，制成煮散，研究淫羊藿煮散與狗脊煮散配伍對(duì)指標(biāo)成分溶出的影響。

3.2樣品的制備

淫羊藿與狗脊臨床常用配比為1∶1，水煎或浸酒服用，故本實(shí)驗(yàn)配伍比例選用1∶1，溶劑選用水和50%乙醇。指標(biāo)成分溶出量結(jié)合指紋圖譜分析，認(rèn)為合煎時(shí)50%乙醇是更優(yōu)的溶媒。

3.3指標(biāo)成分溶出量變化原因分析

以水為溶媒，淫羊藿單煎或與狗脊單煎后合并煎液對(duì)指標(biāo)成分含量基本無影響，提示煎液在常溫下合并不影響指標(biāo)成分的溶出量。以水為溶媒，與狗脊合煎后，淫羊藿中的淫羊藿苷與金絲桃苷溶出量降低，分別下降了19%和58%，提示中藥配伍并非單味藥的簡單相加，淫羊藿指標(biāo)成分溶出受狗脊干擾，或被藥渣吸附。淫羊藿配伍狗脊后合煎液中淫羊藿苷含量降低，并不意味著配伍后藥效減弱。據(jù)報(bào)道[8]，淫羊藿與知母、生地黃配伍后淫羊藿苷含量有所下降，可能是因?yàn)橹浮⑸攸S具有補(bǔ)腎滋陰的效果，且甘寒滋潤，能緩和淫羊藿之燥性。

以50%乙醇為溶媒，單煎、合煎或分煎后合并，對(duì)淫羊藿中的淫羊藿苷與金絲桃苷的溶出量基本無影響，與文獻(xiàn)結(jié)果一致。據(jù)報(bào)道[9]，以60%乙醇為溶媒，與川芎配伍后淫羊藿中的淫羊藿苷等指標(biāo)成分含量無明顯變化。

3.4指紋圖譜差異原因分析

S3與S7、S4與S8的相似度分別為0.842、0.828，提示兩種溶媒對(duì)合煎的提取效果存在一定的差異，但總體相似，原因可能是淫羊藿與狗脊在不同溶媒中溶出成分種類與溶出量存在細(xì)微差異。但無論單煎還是合煎，50%乙醇對(duì)指標(biāo)成分的溶出量均高于水，結(jié)合指標(biāo)成分溶出量綜合考慮，認(rèn)為50%乙醇是更優(yōu)的溶媒，提示補(bǔ)益中藥淫羊藿、狗脊酒劑比湯劑更能提高藥材資源利用率。

本實(shí)驗(yàn)只是從化學(xué)成分的角度開展的，有待進(jìn)行中藥單合煎化學(xué)-藥動(dòng)-藥效-臨床聯(lián)合研究[10]。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

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[3] 盛文潔，聶曉偉，談?dòng)拢?金絲桃苷、淫羊藿苷在大鼠附睪精子冷凍保存中的作用[J].世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2016，18(3)：470-475.

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StudyonInfluenceofCompatibilityonEpimediiFoliumandCibotiiRhizomaBasedonBoilingPowders

YAN Qianru，WU Weikui*

(MeizhouInstituteforFoodandDrugControl，Meizhou514071，China)

Objective：To analyze the changes of chemical constituents in Epimedii Folium and Cibotii Rhizoma before and after compatibility.Methods：HPLC method was used to determinate icariin and hyperoside.The similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of traditional Chinese medicine were applied to analyze the effect of two extracting solvents and the source of decoction of the main chromatographic peaks.Results：The amount of the dissolution of icariin and hyperoside decreased in water.Conclusion：The amount of two compounds was changed after compatibility，but no new components occurred.The extract effect of 50% ethanol is better than that of the water.

Icariin；hyperoside；HPLC；fingerprints

廣東省“十三五”規(guī)劃中藥標(biāo)準(zhǔn)提高項(xiàng)目(BSQSPS CDY-1)

] 鄔偉魁，主管中藥師，研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)；Tel：(0753)2319696；E-mail：weikuiwu@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.5.026

2016-08-24)

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