王興輝蒙炳超龔才偉猶銀俊吳朝福

（1，貴州省都勻市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心558000；

2，貴州省黔南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心558000；

3，貴州省都勻市勻東鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心558000）

黔南州某種豬場(chǎng)豬瘟免疫凈化探索

王興輝1蒙炳超2龔才偉2猶銀俊2吳朝福3

（1，貴州省都勻市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心558000；

2，貴州省黔南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心558000；

3，貴州省都勻市勻東鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心558000）

動(dòng)物疫病凈化工作主要以長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)與豬瘟免疫程序相結(jié)合的方式，即通過(guò)分群→檢測(cè)→淘汰→免疫→檢測(cè)→淘汰的形式進(jìn)行循環(huán)式多階段分層次凈化，病種由點(diǎn)及面，累積經(jīng)驗(yàn)，分步實(shí)施。通過(guò)開(kāi)展豬瘟這一單病種的免疫凈化探索，積累經(jīng)驗(yàn)，為開(kāi)展其他病種的凈化工作奠定基礎(chǔ)。

豬瘟；抗體；疫病凈化

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病，其特征為高熱稽留、先便秘后腹瀉、發(fā)病快、死亡率高，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)豬瘟的流行特點(diǎn)和發(fā)病特征發(fā)生了明顯的變化，病程由急性變?yōu)槁?。臨床癥狀由典型變?yōu)榉堑湫偷臏睾托拓i瘟，特別是低毒力豬瘟病毒的存在，常導(dǎo)致豬瘟病毒持續(xù)感染，母豬表現(xiàn)不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎或木乃伊胎，初生弱仔豬表現(xiàn)為精神沉郁、間歇性腹瀉、死亡或免疫耐受，易形成持續(xù)性感染帶毒豬，造成豬瘟長(zhǎng)期流行[1,2]。為在源頭控制豬瘟病毒影響，2014年開(kāi)始，我們?cè)谇现菽撤N豬場(chǎng)開(kāi)展豬瘟免疫凈化試驗(yàn)。

1 免疫凈化方案

1.1 免疫程序

種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬一年免疫4次，后備豬配種前2次，商品豬35日齡進(jìn)行首免、65日齡二免。

1.2 淘汰及補(bǔ)免

對(duì)豬瘟病原檢測(cè)陽(yáng)性的種豬淘汰并進(jìn)行無(wú)害化處理。對(duì)豬瘟免疫抗體不合格的種豬進(jìn)行補(bǔ)免，對(duì)多次免疫豬瘟抗體仍不合格的豬予以淘汰。

1.3 對(duì)新引進(jìn)豬的監(jiān)測(cè)和處理

對(duì)新引種豬檢測(cè)豬瘟抗體和豬瘟病原，淘汰病原檢測(cè)陽(yáng)性豬；豬瘟抗體不合格的豬進(jìn)行加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫后抗體仍不合格的豬予以淘汰。

1.4 采樣檢測(cè)

1.4.1 本地調(diào)查階段

對(duì)免疫豬瘟疫苗3周后的種公豬后備母豬100%采集、10%經(jīng)產(chǎn)母豬和后備母豬采集血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。對(duì)種100%公豬、10%種母豬和后備母豬采集豬扁桃體進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。調(diào)查豬場(chǎng)豬群豬瘟基礎(chǔ)情況。

1.4.2 免疫控制階段

對(duì)免疫豬瘟疫苗3周后的100%種公豬、5%后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬采集血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。對(duì)100%種公豬、2%種母豬和后備母豬采集豬扁桃體進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，一年兩次。

1.4.3 凈化評(píng)估階段

對(duì)免疫豬瘟疫苗3周后的100%種公豬、5%后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬采集血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。對(duì)100%種公豬、2%種母豬和后備母豬采集豬扁桃體進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，一年兩次。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 疫苗

武漢中博生物股份有限公司豬瘟疫苗 （細(xì)胞源）。

2.1.2 試劑名稱

豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢科前生物科技有限公司，豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物有限公司。

2.1.3 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀 （Biotek 200XL）、熒光PCR 儀 （ABI 7500）。

2.2 方法

2.2.1 豬瘟抗體檢測(cè)

用武漢科前生物有限公司豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法對(duì)分離的豬血清樣品進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)。

2.2.2 豬瘟病原檢測(cè)

RNA提?。喊凑帐兰o(jì)元亨公司豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒A盒說(shuō)明書(shū)方法對(duì)采集的豬扁桃體豬頭提取總RNA，總RNA立即使用或-20℃臨時(shí)保存。

熒光RT-PCR：按世紀(jì)元亨公司豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒B盒說(shuō)明書(shū)配置25μl反應(yīng)體系后在熒光PCR儀器上擴(kuò)增。

熒光RT-PCR結(jié)果判定：根據(jù)試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

3 檢測(cè)結(jié)果

3.1 豬瘟免疫抗體檢測(cè)

對(duì)3個(gè)階段豬群采集血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)，具體檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

3.2 豬瘟病毒病原學(xué)檢測(cè)

采集3個(gè)階段豬扁桃體，用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)豬瘟病原學(xué)，結(jié)果都是陰性，具體檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

4 分析與討論

動(dòng)物疫病凈化工作主要以長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)與豬瘟免疫程序相結(jié)合的方式，即通過(guò)分群→檢測(cè)→淘汰→免疫→檢測(cè)→淘汰的形式進(jìn)行循環(huán)式多階段分層次凈化，病種由點(diǎn)及面，累積經(jīng)驗(yàn)，分步實(shí)施[3,5]。在開(kāi)展該項(xiàng)工作前，對(duì)該場(chǎng)近幾年的監(jiān)測(cè)和調(diào)查分析，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)豬瘟臨床病例或檢測(cè)陽(yáng)性，為開(kāi)展該項(xiàng)工作奠定了比較好的基礎(chǔ)。在凈化工作中，除豬瘟病原檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性必須淘汰并無(wú)害化處理外，免疫抗體分本底調(diào)查階段、免疫控制階段和評(píng)估階段3個(gè)階段制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)后，才能進(jìn)入下以階，并且抗體必須檢測(cè)合格才能作為種豬。

表1 豬瘟抗體檢測(cè)統(tǒng)計(jì)表

表2 豬瘟病原學(xué)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)表

在免疫控制階段，少部分經(jīng)產(chǎn)母豬經(jīng)過(guò)第二次重新補(bǔ)免后，抗體才合格；有些后備種豬按照免疫程序開(kāi)展免疫，經(jīng)過(guò)兩次免疫后，豬瘟抗體檢測(cè)仍然不合格，最終作淘汰處理。免疫失敗除可能與免疫接種技術(shù)有關(guān)外，可能豬圓環(huán)、高致病性藍(lán)耳病和豬偽狂犬病病毒等豬的免疫抑制性疾病，降低了豬對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答能力，這個(gè)階段的工作在免疫、檢測(cè)、淘汰中重復(fù)，也是整個(gè)凈化工作的難點(diǎn)。經(jīng)過(guò)免疫控制階段免疫技術(shù)的積累，后備豬群的群體免疫合格率提高了5.6%，達(dá)到97.3%，但仍有部分后備種豬因?yàn)槠渌庖咭种菩约膊∮绊?，?dǎo)致經(jīng)過(guò)兩次免疫，抗體檢測(cè)仍然不合格。這也反映了豬病種類多，可能會(huì)相互影響，致使疫病凈化是一個(gè)系統(tǒng)而又漫長(zhǎng)的過(guò)程[4,5]。我們通過(guò)開(kāi)展豬瘟這一單病種的免疫凈化探索，積累經(jīng)驗(yàn)，為開(kāi)展其它病種的凈化工作奠定基礎(chǔ)。

[1]李達(dá),馬萍,湯德元,等.規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟和偽狂大病的凈化方案 [J].畜牧與獸醫(yī),2015(7)：119-123.

[2] 王海洋,柴方紅,李春花,等.吉林市不同規(guī)模豬場(chǎng)種豬豬瘟抗體檢測(cè)與豬瘟凈化措施初探[J].吉林畜牧獸醫(yī),2015(1)：20-21.

[3] 楊林,張淼潔,付雯,等.種豬場(chǎng)主要疫病凈化程序[J].中國(guó)畜牧業(yè),2016(1)：52-60.

[4]李嬌,祖立闖,王金良,等.我國(guó) 4 省豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的血清流行病學(xué)調(diào)查[J].養(yǎng)豬,2014(4)：123-124.

[5] 王昌建,范仲鑫,唐小明,等.規(guī)模豬場(chǎng)垂直傳播疫病的凈化實(shí)踐與思考[J].中國(guó)畜牧業(yè),2016(4)：40-42.

項(xiàng)目來(lái)源：黔南州科技計(jì)劃項(xiàng)目基金黔南科技合農(nóng)字 （2015）10號(hào)。

王興輝 （1979.5-），男，本科，獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病診斷和檢測(cè)工作。