云 環(huán) 高 峰 呂東陽 劉來福* 趙靖敏 陳向斌 齊 娜 金曉靜 皮 娜

(1.北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心, 北京 100026；2.上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司，上海 201108)

國產(chǎn)凝膠滲透色譜測定茶葉中7種農(nóng)藥殘留

云 環(huán) 高 峰1呂東陽1劉來福1*趙靖敏1陳向斌2齊 娜2金曉靜2皮 娜2

(1.北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心, 北京 100026；2.上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司，上海 201108)

建立了加速溶劑萃取-凝膠滲透色譜-氣相色譜質(zhì)譜法測定茶葉中7種農(nóng)藥殘留的分析方法。樣品用乙腈-二氯甲烷(V/V，1/1)作為溶劑，加速溶劑提取，提取液經(jīng)過凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography，GPC)除去大分子雜質(zhì)后，供GC/MS分析；添加濃度為0.5 μg時，回收率為79.2%～100.8%，相對標準偏差為3.15%～13.34%，方法具有自動化程度高、萃取效率高、凈化效果好、精密度好，分析快速等優(yōu)點，適用于茶葉中農(nóng)藥殘留的日常檢測工作。

加速溶劑萃取 凝膠滲透色譜 GC/MS 農(nóng)藥 茶葉

1 概述

茶葉以其抗癌、抗氧化、消除人體自由基等獨特的保健功效，深受世人喜愛，已成為僅次于碳酸飲料和飲用水的世界第三大飲料。另一方面，隨著人民生活水平的目益提高，人們對茶葉中農(nóng)藥殘留等質(zhì)量安全問題給予了高度關(guān)注。

加速溶劑萃取(ASE)是近幾年出現(xiàn)的新的萃取技術(shù)。具有溶劑用量少，萃取時間短，萃取效率高的突出優(yōu)點，是美國EPA的標準方法之一。然而，又由于茶葉含有大量的色素、生物堿及酚類化合物等脂溶性物質(zhì)，在萃取后，會帶來各種干擾，降低后續(xù)分析儀器的靈敏度，使用壽命，從而影響最終分析結(jié)果，因此，必須樣品萃取后，必須進一步進行凈化處理。

凝膠滲透色譜(GPC)是利用多孔的凝膠聚合物將化合物按分子空間結(jié)構(gòu)差異(分子量大小)進行選擇性分離，不能進入凝膠孔隙的分子會很快隨流動相洗脫，而能夠進入凝膠孔隙的分子，則需要更長時間的沖洗時間才能夠流出固定相，從而實現(xiàn)對不同組分的分離。利用加速溶劑萃取提取茶葉樣品，提取液經(jīng)過凝膠滲透色譜凈化，利用GC/MS進行定性定量分析，建立了茶葉中11種農(nóng)藥殘留的分析方法。

2 材料與方法

2.1 樣品

實驗用茶葉樣品經(jīng)粉碎機粉碎后，混勻，密封，常溫下保存，備用。

2.2 儀器與試劑

儀器型號：上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司FLEXI 全自動凝膠滲透色譜儀(配有400mm×25mm(內(nèi)徑)，內(nèi)裝BIO-Beads S-X3填料的凈化柱)，用于樣品中大分子雜質(zhì)的凈化；氣相色譜-質(zhì)譜儀，配有電子轟擊離子源(EI)；分析天平，感量為0.0001g；離心機，最大轉(zhuǎn)速為10000 r/min。

水為GB/T 6682規(guī)定的一級水；環(huán)己烷：色譜純；乙酸乙酯：色譜純；乙腈：色譜純；二氯甲烷：色譜純；正己烷：色譜純；乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1，體積比)；乙腈+二氯甲烷(1+1，體積比)；毒死蜱、殺螟硫磷、三氯殺螨醇、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯、溴氰菊酯單個標準儲備液100 mg/L；微孔過濾膜(尼龍)。

2.3 方法建立

稱取5 g磨碎均勻的茶葉樣品，移入加速溶劑萃取的34 mL萃取池中，用乙腈+二氯甲烷(1+1)作提取溶劑，在10.34 MPa壓力、100℃條件下，加熱5 min，靜態(tài)萃取5 min，循環(huán)1次。然后用池體積60%的乙腈+二氯甲烷(1+1)沖洗萃取池，氮氣吹掃100 s。萃取完畢，將萃取液轉(zhuǎn)移到100 mL梨形瓶，40℃水浴中減壓濃縮至近干，然后用適量乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1)溶解殘渣后轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，用乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1)定容至10 mL，溶液高速離心后過0.45 μm濾膜，待凝膠色譜凈化。

凝膠滲透色譜凈化條件，見表1、表2。

表1 全自動凝膠凈化方法進樣程序表(流速：5mL/min)

收集液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約5mL，將濃縮液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，氮吹濃縮至近干，加入1mL的正己烷溶解殘渣，混勻，供氣相色譜-質(zhì)譜測定。

氣相色譜-質(zhì)譜條件，如下：

色譜柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm。柱溫(程序升溫)：70℃保持3min，15℃/min升到180℃，保持2min，10℃/min升到280℃，保持10min。進樣口溫度：250 ℃。進樣口壓力：77 kPa。流速：1.0 mL/min。分流比：不分流。進樣量：1.0 μL。

2.4 線性關(guān)系

5 mg/L混合標準溶液配制，如下：

分別從濃度為100 mg/L的毒死蜱、殺螟硫磷、三氯殺螨醇、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯、溴氰菊酯標準儲備液中，各移取0.5 mL于10mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成濃度為5mg/L的10種農(nóng)藥混合標準溶液，避光，0～4℃保存。

基質(zhì)混合標準工作溶液配制，如下：

用空白樣品基質(zhì)溶液配制成濃度分別為0.03、0.05、0.1、0.2、0.3mg/L的混合標準工作溶液，用于標準工作曲線的繪制。具體結(jié)果見表3。

表3 7種農(nóng)藥線性方程

2.5 加標回收率

在茶葉樣品中加入0.5μg的混合標準溶液，重復(fù)進樣7次，采用基質(zhì)標準曲線定量，檢測數(shù)據(jù)及RSD見表4。

表4 7種農(nóng)藥測定結(jié)果

3 結(jié)論

本實驗使用國產(chǎn)凝膠凈化系統(tǒng)對茶葉中7中農(nóng)藥殘留進行了提取，使用建立了使用凝膠色譜-氣相色譜-質(zhì)譜法檢測茶葉中農(nóng)藥殘留的方法。該方法具有自動化程度高，萃取效率高、凈化效果好、精密度好，分析快速等優(yōu)點，適用于茶葉中農(nóng)藥殘留的日常檢測工作。

[1] 王耀，張漢霞，鄒濰力，劉少彬，謝翠美.ASE萃取/GPC-SPE凈化/GC-MS測定茶葉中的有機磷殘留.食品研究與開發(fā)，2011，32(3)：128-132.

[2] GBT 23376-2009. 茶葉中農(nóng)藥多殘留測定 氣相色譜/質(zhì)譜法.

Determination of seven pesticide residues in tea by domestic gel permeation chromatograph.

Yun Huan1,Gao Feng1,Lǖ Dongyang1, Liu Laifu1*,ZhaoJingmin1,ChenXiangbin2,QiNa2,JinXiaojing2,PiNa2

(1.BeijingEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Beijing100026,China;2.PreeKemScientificInstrumentsCo.,Ltd.,Shanghai201108,China)

A method for determination of 7 kinds of pesticide residues in tea using accelerated solvent extraction-gel permeation chromatography-GC/MS was established in this paper. Acetonitrile-dichloromethane (V/V,1/1) was employed as solvent in accelerated solvent extraction. Extract was purified by gel permeation chromatograph(GPC) to remove macromolecular impurities and then followed by GC/MS analysis. The results showed that recoveries were between 79.2%-100.8% with 0.5 μg standard addition，and RSD values were between 3.15%-13.34%. This fast，accurate and highly automated method with good extraction rate and purification result is very applicable in daily tea analysis.

accelerated solvent extraction; gel permeation chromatograph, GC/MS; pesticide residues; tea

國產(chǎn)分析儀器驗證與綜合評價市場化推廣研究與實踐(Z161100003016006)

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.04.029

2017-06-19

云環(huán),1983年出生,高級工程師,畢業(yè)于清華大學(xué),就職于北京出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心,從事食品安全檢測工作。