陳楊揚,劉坤娜,李云姣,杜佳峰,霍 超,桑亞新,*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,河北保定 071001;2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,河北保定 071001)

副干酪乳桿菌VL8胞外多糖協(xié)同ConA對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子分泌的影響

陳楊揚1,劉坤娜2,李云姣1,杜佳峰1,霍 超1,桑亞新1,*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,河北保定 071001;2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,河北保定 071001)

本研究以前期從viili中分離得到的一株副干酪乳桿菌VL8為基礎(chǔ),對其胞外多糖(VL8-EPS)的免疫活性進(jìn)行了初步探究。首先分離制備小鼠脾淋巴細(xì)胞,采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測不同濃度的VL8-EPS對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及在其與有絲分裂原共同作用下對小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖作用;雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法檢測細(xì)胞因子白介素-2(IL-2)、干擾素-γ(IFN-γ)、白介素-6(IL-6)的含量。結(jié)果表明,VL8-EPS在濃度12.5～800 μg/mL范圍內(nèi),能顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖;VL8-EPS協(xié)同刀豆蛋白(ConA)也顯著地增強了脾淋巴細(xì)胞的增殖作用,且誘導(dǎo)效果高于單獨施用VL8-EPS;并能顯著促進(jìn)協(xié)同ConA誘導(dǎo)的細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6的分泌水平。綜上，VL8-EPS顯著地促進(jìn)了脾淋巴細(xì)胞的增殖,并對ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞的增殖有協(xié)同促進(jìn)作用,還通過促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌發(fā)揮了免疫增強作用,說明VL8-EPS在一定程度上對免疫機制進(jìn)行了調(diào)控。

viili,胞外多糖,副干酪乳桿菌,脾淋巴細(xì)胞,細(xì)胞因子,免疫調(diào)控

viili是一種源自于芬蘭的傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品,又叫Vilia、Filia,具有絲狀或線狀的組織,質(zhì)地粘稠,組織細(xì)膩、風(fēng)味獨特,具有極其宜人的口味和較好的雙乙酰風(fēng)味。研究發(fā)現(xiàn)viili在發(fā)酵過程中形成一層較厚的黏液樣物質(zhì),經(jīng)證實是viili乳制品中副干酪乳桿菌[1]在生長代謝過程中分泌到細(xì)胞壁外、易與菌體分離、分泌到環(huán)境中的水溶性多糖[2]。viili中的這種胞外多糖具有降低血液膽固醇含量、抗腫瘤以及促進(jìn)益生菌與腸黏膜的吸附等重要的生理活性[3]。乳酸菌菌株及其胞外多糖能夠增強細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),如促進(jìn)T/B淋巴細(xì)胞增殖、NK細(xì)胞殺滅腫瘤活性、單核細(xì)胞吞噬能力、促有絲分裂、釋放細(xì)胞因子,從而增強宿主對致病菌的免疫防護(hù)作用[4-6]。大量的研究[7-9]表明乳酸菌胞外多糖主要用于研究食品和醫(yī)藥行業(yè)作為免疫增強劑來調(diào)節(jié)機體免疫能力。

脾臟作為機體最大的免疫器官,主要是T、B淋巴細(xì)胞的聚集場所,而T、B淋巴細(xì)胞是機體免疫活性細(xì)胞,其激活、分化、增殖在免疫應(yīng)答過程中起著重要的作用[10-11]。目前,國內(nèi)外有關(guān)乳酸菌胞外多糖的研究較多,但是有關(guān)VL8-EPS對體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用的研究鮮見報道。因此,本實驗是以VL8-EPS為研究對象,研究VL8-EPS對小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖及誘生細(xì)胞因子的影響,對VL8-EPS的免疫調(diào)節(jié)作用做初步探究,以期為VL8-EPS提高免疫作用機制的研究及其開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

VL8-EPS 本實驗室制備[2],不含蛋白、主要由中性多糖組成,其單糖組成為甘露糖∶半乳糖醛酸∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖為1∶2.05∶3.46∶49.66∶16.74;RPMI-1640培養(yǎng)基、刀豆蛋白(ConA)、四甲基偶氮唑鹽(MTT) 北京索萊寶科技有限公司;無支原體新生牛血清 浙江天杭生物科技股份有限公司;IL-2、IFN-γ、IL-6試劑盒 南京建成生物工程研究所;其余化學(xué)試劑 均為分析純;清潔級ICR(Institute of Cancer Research)小鼠 雌性,體重(20±2) g 北京華阜康生物科技有限公司。

MCO-18AC CO2培養(yǎng)箱 日本SANYO三洋有限公司;1500-823型酶標(biāo)儀 Thermo Scientific公司;SW-CJ-1FD型超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;YS100顯微鏡 Nikon儀器公司;Feb-80電動離心機 天津市華北實驗儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 脾細(xì)胞懸液的制備 參照文獻(xiàn)[12-15],8～10周齡的小鼠眼球放血,脫頸致死,于75%乙醇內(nèi)浸泡殺菌5 min,轉(zhuǎn)移超凈臺內(nèi)取脾臟,先用RPMI 1640培養(yǎng)液清洗干凈,后轉(zhuǎn)到200目鋼網(wǎng)及培養(yǎng)皿內(nèi)研磨,直至培養(yǎng)液發(fā)白為止,細(xì)胞懸液1000 r/min離心10 min。3倍體積紅細(xì)胞裂解液裂解2 min去除紅細(xì)胞,沉淀用PBS清洗三次,離心后靜置3 min。最后沉淀用1 mL含10%無支原體新生牛血清RPMI 1640 培養(yǎng)液重懸。取出上述細(xì)胞懸液0.1 mL于小離心管中,臺盼藍(lán)染色1 min后,血球計數(shù)板計數(shù),調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為5×106個/mL。臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞存活率大于95%。

1.2.2 VL8-EPS對脾細(xì)胞的增殖作用 MTT法觀察VL8-EPS對小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖作用。按上述方法制備脾細(xì)胞懸液,取80 μL加入96孔板中,實驗分為空白對照組、VL8-EPS組(終濃度分別為800、600、400、200、100、75、50、25、12.5 μg/mL)以及VL8-EPS協(xié)同ConA組(ConA終濃度分別為5 μg/mL)。每組6個復(fù)孔,最后用RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整總體積至160 μL。96孔培養(yǎng)板置于37 ℃含5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,在終止培養(yǎng)前4 h,各孔添加5 mg/mL MTT 10 μL,置于CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4 h后取出,加入90 μL甲瓚溶解劑[2]培養(yǎng)過夜,酶標(biāo)儀檢測570 nm處的吸光值,重復(fù)實驗3次。

1.2.3 VL8-EPS協(xié)同ConA對小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的測定 按上述方法制備脾細(xì)胞懸液加入24孔板中,每孔1 mL,實驗分為ConA單獨刺激組(0.1 mL終濃度5 μg/mL)和VL8-EPS協(xié)同ConA組(VL8-EPS終濃度分別為800、400、200、100、50 μg/mL),最后用RPMI 1640培養(yǎng)液補足體積至1.5 mL。24孔板置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后,1000×g離心15 min,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,按ELISA試劑盒操作說明測定脾細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-2、IFN-γ、IL-6含量,重復(fù)實驗3次。

1.2.4 統(tǒng)計分析 組間差異采用統(tǒng)計軟件SPSS Statistics 17.0 作單因素ANOVA 處理,數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示,以p<0.05或p<0.01時,組間差異判斷為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 VL8-EPS對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用的影響

VL8-EPS對脾淋巴細(xì)胞增殖作用的影響結(jié)果如圖1、圖2所示。

圖1 VL8-EPS對脾淋巴細(xì)胞增殖作用的影響Fig.1 Effect of VL8-EPS on proliferation of spleen lymphocyte注:與空白對照組相比,*:p<0.05,**:p<0.01。

圖2 VL8-EPS協(xié)同ConA對脾淋巴細(xì)胞增殖的影響Fig.2 Effect of VL8-EPS cooperated with ConA on proliferation of spleen lymphocyte注:與ConA組相比,*:p<0.05,**:p<0.01，圖3～圖5同。

由圖1可見,與空白組相比,單獨施用不同濃度的VL8-EPS的吸光值有不同程度的增加,并且在一定濃度范圍內(nèi)有一定的劑量關(guān)系。在12.5～100 μg/mL低濃度范圍內(nèi),VL8-EPS對脾淋巴細(xì)胞增殖作用緩慢,且不具有統(tǒng)計學(xué)意義,而當(dāng)VL8-EPS濃度為200、400、600 μg/mL時,能顯著地促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖,吸光值比對照組分別提高了8.9%、12.5%和20.4%(p<0.01)。當(dāng)濃度為800 μg/mL時,達(dá)到了最大吸光值,較對照組提高23.7%(p<0.01)。當(dāng)VL8-EPS協(xié)同ConA作用時結(jié)果見圖2,隨著VL8-EPS濃度的增加,VL8-EPS與ConA共同作用對脾淋巴細(xì)胞增殖作用逐漸增強(p<0.05),并且在一定濃度范圍內(nèi)有劑量關(guān)系。當(dāng)VL8-EPS濃度為400 μg/mL時,誘導(dǎo)效果最好,其吸光值比ConA單獨刺激提高49.7%(p<0.01)。以上結(jié)果表明,在濃度12.5～800 μg/mL范圍內(nèi)的VL8-EPS能顯著地促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖,而且在協(xié)同ConA作用時,其誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖效果明顯高于單獨施用VL8-EPS。

2.2 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

2.2.1 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2的影響 IL-2活化的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的一種重要的T淋巴細(xì)胞生長因子,具有廣泛的生物調(diào)節(jié)活性。同時IL-2與其受體結(jié)合后,能引起T細(xì)胞分化、增殖,促進(jìn)細(xì)胞毒T細(xì)胞的殺傷作用,增強NK細(xì)胞活性[16],其分泌水平高低可以反映機體的免疫功能的強弱。圖3為VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2的影響。

圖3 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2的影響Fig.3 Effect of VL8-EPS on IL-2 induction of spleen lymphocyte

由圖3可知,不同濃度的VL8-EPS均可促進(jìn)ConA誘導(dǎo)脾細(xì)胞分泌IL-2,其VL8-EPS協(xié)同ConA組的分泌量極顯著高于ConA單獨刺激組(p<0.01),并且隨著VL8-EPS的濃度的增加而逐漸增大,具有量效關(guān)系。在多糖濃度為50 μg/mL時,IL-2的分泌量較對照組就提高了26.18%。由此說明,在50～800 μg/mL濃度范圍內(nèi),VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2具有促進(jìn)作用。

2.2.2 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ的影響 IFN-γ作為體內(nèi)重要的免疫調(diào)節(jié)因子具有多種生物活性,主要由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生,能夠增強Th1細(xì)胞活性和細(xì)胞免疫功能。VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ的影響結(jié)果見圖4。

圖4 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ的影響Fig.4 Effect of VL8-EPS on IFN-γ induction of spleen lymphocyte

由圖4可知,不同濃度的VL8-EPS均可促進(jìn)ConA誘導(dǎo)脾細(xì)胞分泌IFN-γ,其分泌量顯著高于ConA單獨刺激組(p<0.01),并且隨著VL8-EPS的濃度的增加而逐漸增大,具有一定量效關(guān)系。在較低多糖濃度時(50 μg/mL),IFN-γ的分泌量達(dá)到了292.34 pg/mL,在最大多糖濃度時,IFN-γ的分泌量為486.48 pg/mL,比對照組提高了146.17%。由此說明,在50～800 μg/mL濃度范圍內(nèi),VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ具有極顯著的促進(jìn)作用。

2.2.3 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-6的影響 IL-6是細(xì)胞因子的重要組成部分,不僅能使B細(xì)胞前體成為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞,能促進(jìn)原始骨髓源細(xì)胞的生長和分化,增強自然殺傷細(xì)胞的裂解功能。而且還參與機體炎性反應(yīng)促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生。VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-6的影響結(jié)果見圖5。

圖5 VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-6的影響Fig.5 Effect of VL8-EPS on IL-6 induction of spleen lymphocyte

由圖5可知,100～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)的VL8-EPS均可促進(jìn)ConA誘導(dǎo)脾細(xì)胞分泌IL-6,其分泌量顯著高于ConA單獨刺激組(p<0.01),并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。在多糖濃度為800 μg/mL時,IL-6的分泌量達(dá)到最大含量值279.30 pg/mL,比對照組提高了71.11%。由此表明,VL8-EPS對小鼠脾細(xì)胞分泌IL-6具有促進(jìn)作用。

3 討論

免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)是機體執(zhí)行免疫應(yīng)答的一個重要系統(tǒng),淋巴細(xì)胞則是參與機體免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)細(xì)胞[11]。脾臟淋巴細(xì)胞中含有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞,它們均是機體的免疫活性細(xì)胞,其增殖是反映細(xì)胞免疫最直接的指標(biāo)[17]。本實驗研究發(fā)現(xiàn),VL8-EPS對小鼠淋巴細(xì)胞的增殖作用顯著,并在一定濃度范圍內(nèi)存在著量效關(guān)系。ConA是T淋巴細(xì)胞的有絲分裂原,作用于T細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體,主要促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖[18]。劉翠平[19]等已經(jīng)報道5～80 μg/mL的干酪乳桿菌LC2W胞外多糖可以顯著地促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖。劉佳[20]等在硒化乳酸菌胞外多糖免疫功能機制研究中發(fā)現(xiàn),在250～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)的硒化乳酸菌胞外多糖顯著地促進(jìn)了小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖,表明硒化乳酸菌胞外多糖與ConA有協(xié)同作用。據(jù)顧笑梅[21]報道,乳酸菌Z222胞外多糖EPSⅠ單獨作用小鼠脾細(xì)胞就能促進(jìn)體外淋巴細(xì)胞增殖,且具有劑量依賴關(guān)系。EPSⅠ也可促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的體外小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。本研究發(fā)現(xiàn),VL8-EPS與ConA共同作用對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)具有明顯的促進(jìn)作用,由此推斷VL8-EPS可能是淋巴細(xì)胞的有絲分裂原,通過誘導(dǎo)細(xì)胞分裂、促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,達(dá)到增強機體免疫能力的目的,對調(diào)節(jié)機體免疫發(fā)揮重要作用。

細(xì)胞因子(cytokine,CK)是免疫原、有絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能,是免疫系統(tǒng)重要的信息分子,在免疫調(diào)節(jié)中充當(dāng)十分重要的角色[22]。1986年,Mosmann等[23]根據(jù)輔助T細(xì)胞活化后分泌細(xì)胞因子的不同將其分為Th1和Th2細(xì)胞,這兩種輔助性T細(xì)胞均從Th0細(xì)胞分化而來,在免疫應(yīng)答反應(yīng)中維持相互平衡進(jìn)而調(diào)節(jié)機體免疫。Th1細(xì)胞主要分泌TNF-α、IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子,通過抑制Th2分化和促進(jìn)Th1分化使Th1細(xì)胞處于優(yōu)勢,介導(dǎo)機體細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子,主要通過促進(jìn)Th2分化和抑制Th1分化使Th2細(xì)胞處于優(yōu)勢,介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)。Wei[15]等研究發(fā)現(xiàn)滸苔多糖可以增加T淋巴細(xì)胞中IFN-γ和IL-2的分泌。吳廣楓[24]等還發(fā)現(xiàn)改性的雙歧桿菌胞外多糖能顯著提高IL-2、IFN-γ細(xì)胞因子的含量。鄭乃珍[25]等研究發(fā)現(xiàn)猴頭菇多糖在25～400 mg/L濃度范圍內(nèi)能顯著協(xié)同ConA刺激Th1細(xì)胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)和Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL-6)的分泌,通過調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。且在癌癥治療中發(fā)現(xiàn)IL-2、TNF-α和IFN-γ分泌物增加可以增強身體的免疫功能和抗腫瘤的活動[26-27]。本研究發(fā)現(xiàn),VL8-EPS協(xié)同ConA可以顯著地促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞中IL-2、IFN-γ、IL-6因子的分泌,說明VL8-EPS可以調(diào)控機體的雙重免疫功能。

4 結(jié)論

綜上所述,VL8-EPS能夠顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖,并且可協(xié)同ConA促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖,還對脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞因子的分泌有促進(jìn)作用。由此表明,VL8-EPS可能是通過促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖及細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ的分泌發(fā)揮免疫增強作用,而關(guān)于VL8-EPS對免疫功能的影響及作用機制還需做進(jìn)一步深入研究。

[1]劉晶,王建昌,孫文菊,等. 芬蘭傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品viili中乳酸菌的分離鑒定及其抑菌性的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(5):181-184.

[2]劉晶. Viili中乳酸菌的分離及其胞外多糖的研究[D]. 保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2015:25-60.

[3]Yoshid T. Synthesis of polysaccharides having specific biological activities[J]. Progress in Polymer Science,2001,26(3):379-441.

[4]Makino S,Ikegami S,Kano H,et al. Immunomodulatory effects of polysaccharides produced by Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus OLL1073R-1 [J]. Journal of Dairy Science,2006,89(8):2873-2881.

[5]Kitazawa H,Yamaguchi T,Miuri M,et al. B-cell mitogen produced by slime-forming,encapsulated Lactococcus lactis ssp. cremoris Isolated from ropy sour milk,viili [J]. Journal of Dairy Science,1993,76(6):1514-1519.

[6]Cross M L,Stevenson L M,Gill H S. Anti-allergy properties of fermented foods:an important immunoregulatory mechanism of lactic acid bacteria? [J]. International Immunopharmacology,2001,1(5):891-901.

[7]楊結(jié)彬. 乳酸菌-生物學(xué)基礎(chǔ)及應(yīng)用[M]. 北京:中國輕工業(yè)出版社,1996.

[8]霍思序,唐彥君,劉寧. 乳酸菌胞外多糖生理功能的研究進(jìn)展[J]. 食品科技,2013,38(9):153-157.

[9]劉宇,孟祥晨. 乳酸菌胞外多糖及其抗腫瘤活性[J]. 中國乳品工業(yè),2008,36(1):39-43.

[10]金麗琴,薛勝霞,呂建新,等. 牛膝多糖衍生物對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及誘生 IL-2 和 TNF-α的影響[J]. 中國生化藥物雜志,2008,29(5):312-314.

[11]Cho C W,Han C J,Rhee Y K,et al. Cheonggukjang polysaccharides enhance immune activities and prevent cyclophosphamide-induced immunosuppression[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2015,72:519-525.

[12]張卓然. 培養(yǎng)細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)[M]. 上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2004:39-41;92-94.

[13]Chen J R,Yang Z Q,Hu T J,et al. Immunomodulatory activityinvitroandinvivoof polysaccharide from Potentilla anserina[J]. Fitoterapia,2010,81(8):1117-1124.

[14]張元,林強,宋玥. 殼寡糖及其磷酸化修飾產(chǎn)物對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及誘生細(xì)胞因子的影響[J]. 食品科技,2012,37(2):11-15.

[15]Wei J T,Wang S X,Liu G,et al. Polysaccharides from Enteromorpha prolifera enhance the immunity of normal mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2014,64:1-5.

[16]丁孝良,王偉卓. 坤復(fù)康膠囊對慢性盆腔炎模型大鼠的 TNF-α、IL-2 的影響[J]. 陜西中醫(yī),2009,30(3):354-355.

[17]雷慶林,林志彬. 靈芝多糖對老年小鼠脾細(xì)胞DNA多聚酶α活性及免疫功能的影響[J]. 藥學(xué)學(xué)報,1993,28(8):577-582.

[18]裘軍,李維亮,左克源,等. 人工蛹蟲草子實體對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響[J]. 中國藥師,2007,10(1):8-10.

[19]劉翠平,吳正鈞. 干酪乳桿菌 LC2W胞外多糖的體外免疫活性研究[J]. 現(xiàn)代食品科技,2013,29(4):715-718.

[20]劉佳. 硒化乳酸菌胞外多糖免疫功能機制研究[D]. 寧波：寧波大學(xué),2013:43-44.

[21]顧笑梅,王富生,孔健,等. 乳酸菌 Z222 產(chǎn)胞外多糖(EPSⅠ)對免疫細(xì)胞功能的影響[J]. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2003,23(6):442-445.

[22]Raymond C R,Wilkie B N. Th-1/Th-2 type cytokine profiles of pig T-cells cultured with antigen-treated monocyte-derived dendriticcells[J]. Vaccine,2004,22(8):1016-1023.

[23]Mosmann T R,Cherwinski H,Bond M W,et al. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins[J]. The Journal of Immunology,1986,136(7):2348-2357.

[24]吳廣楓,王姣斐,李平蘭. 改性雙歧桿菌胞外多糖體外免疫活性研究[J]. 食品科技,2011(2):2-4.

[25]鄭乃珍,鄭小香,潘曉麗,等. 猴頭菇多糖協(xié)同 ConA 對小鼠脾細(xì)胞分泌 Th1,Th2 細(xì)胞因子及基因表達(dá)的影響[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報,2016,36(5):795-800.

[26]Gerber S A,Sedlacek A L,Cron K R,et al. IFN-γmediates the antitumor effects of radiation therapy in a murine colon tumor[J]. The American Journal of Pathology,2013,182(6):2345-2354.

[27]Ni C,Wu P,Zhu X,et al. IFN-γselectively exerts pro-apoptotic effects on tumor-initiating label-retaining colon cancer cells[J]. Cancer letters,2013,336(1):174-184.

Effect of exopolysaccharides fromLactobacillusparacaseiVL8 cooperated with ConA on spleen lymphocyte proliferation and induction of cytokine in mice

CHEN Yang-yang1,LIU Kun-na2,LI Yun-jiao1,DU Jia-feng1,HUO Chao1,SANG Ya-xin1,*

(1.College of Food Science of Technology,Agricultural University of Hebei,Baoding 071001,China; 2.College of Food Science of Technology,Agricultural University of Hebei, College of Biological Engineering,2014 Undergraduate Students,Baoding 071001,China)

The strains oflactobacillusparacaseiVL8 was isolated form viili as base as described previously,futher researching of the immunomodulation of VL8-EPS was investigated. Firstly,preparation of mouse spleen lymphocytes and the proliferation of spleen lymphocytes in mice with different concentrations of VL8-EPS were determined by MTT. The contents of IL-2,IFN-γand IL-6 were determined by using ELISA. The results showed that VL8-EPS at a concentration ranging from 12.5 μg/mL to 800 μg/mL resulted in a significant increase of spleen lymphocyte proliferation,VL8-EPS could also enhance the effect of ConA-induced spleen lymphocyte proliferation and the induction effects was higher than that of single application of VL8-EPS. Moreover,VL8-EPS could significantly increase the secretion level of IL-2,IFN-γand IL-6 in ConA-induced spleen lymphocyte. In summary,VL8-EPS can effectively increase spleen lymphocyte proliferation and enhance the effect of ConA-induced spleen cell growth. VL8-EPS has the ability to enhance immune responses by increasing the secretion of cytokine. It showed that VL8-EPS could regulate the immune mechanisms partly.

viili;exopolysaccharides;lactobacillusparacasei;spleen lymphocyte;cytokine;immunoregulation

2017-02-21

陳楊揚(1991-)，女，碩士研究生，研究方向：食品微生物，E-mail：yangyangchen1991@163.com。

*通訊作者:桑亞新(1972-)，男，博士，教授，研究方向：食品微生物和農(nóng)副產(chǎn)品綜合加工利用，E-mail：Sangyaxin@sina.com。

國家公益性行業(yè)科研專項(201205031)；河北省科技廳科技支撐項目(15273202D、16227109D)。

TS201.4

A

1002-0306(2017)15-0302-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.15.056