包東東+努爾古麗·買買提

摘 要：文章針對HPLC使用常見故障進(jìn)行了全面的分析，如輸液泵、單向閥、色譜柱、檢測器的常見故障，并總結(jié)日常工作實(shí)際，提出一些個人的做法和解決對策，以便使用者能及時注意所述問題，做到有問題及時解決。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜 色譜柱 檢測器 問題及對策

高效液相色譜（HPLC）作為一種分離技術(shù)和方法，目前已經(jīng)發(fā)展到一個全新的階段。高精度的輸液泵，應(yīng)用廣泛的色譜分離柱，低噪音、高靈敏度的各種檢測器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn)，都推動了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點(diǎn)倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領(lǐng)域。本人從事液相色譜分析工作十年，應(yīng)用HPLC技術(shù)在農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、色素、防腐劑測定等實(shí)際工作中，積累了許多的方法和經(jīng)驗(yàn)，在這里與大家交流，希望能對同行們有所幫助和借鑒，共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展[1]。

1、對流動相的要求

1.1應(yīng)使用色譜純的液體試劑配制流動相，固體試劑至少使用優(yōu)級純。流動相配制后應(yīng)立即使用，時間久了（超過2天），不宜再用；特別是加有緩沖鹽的流動相，過久的貯存會導(dǎo)致其內(nèi)部生長肉眼看不見的細(xì)菌，若仍然使用它，大量的菌絲體就會附著在色譜柱內(nèi)，將大大縮短色譜柱的使用壽命。

1.2高純水也應(yīng)該使用新鮮制備的，否則回出現(xiàn)同樣的問題。高純水中若存在有機(jī)物雜質(zhì)，當(dāng)時對檢測好像也沒有什么影響，當(dāng)日積月累的雜質(zhì)吸附達(dá)到飽和時，在以后某次檢

測中就有可能發(fā)生吸附雜質(zhì)的脫落，引起“鬼峰”現(xiàn)象，如果“鬼峰”疊加到了組分的吸收峰上面，就會出現(xiàn)不準(zhǔn)確的檢測數(shù)據(jù)。

1.3流動相在使用前均應(yīng)進(jìn)行脫氣處理，避免溶解在其中的氣體影響基線的穩(wěn)定性和檢測的靈敏度。

2、輸液泵的常見故障及對策

2.1液相色譜儀壓力過低壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。

2.2液相色譜儀壓力過高這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

（1）首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查。

（2）打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI以下，過濾白頭正常，在檢查。

（3）把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常；如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強(qiáng)的流動相沖至壓力正常。

3、色譜分離柱的使用與維護(hù)

色譜柱加保護(hù)柱（預(yù)柱）是保護(hù)分離柱的有效辦法。保護(hù)柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質(zhì)相近的短柱，接在分離柱之前，或代替流路過濾器。保護(hù)柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學(xué)垃圾，這些垃圾如果直接進(jìn)入分離柱會逐漸堆積在柱頭，最終降低柱效能。保護(hù)柱是消耗品，如分析含糖量較高的樣品，一般分析80個樣品后需更換新柱芯。

4、檢測器的使用與維護(hù)

當(dāng)流動相用了緩沖鹽更換流動相又不當(dāng)時，常會在檢測器管路中產(chǎn)生沉淀，可先用5倍柱積的水沖洗，再用10倍柱積的強(qiáng)溶劑（如乙腈）流過，再用50倍的柱體積的異丙醇沖洗，最后換上反相流動相平衡。當(dāng)檢測器管路堵塞時，可表現(xiàn)為柱壓升高，此時，應(yīng)和柱頭堵塞相區(qū)分?？蓴嚅_柱子，直接接檢測器，如泵壓仍較高，可判斷壓力升高是由于檢測器管道堵塞造成。檢測器進(jìn)口是常發(fā)生阻塞的地方，正向沖洗效果常不明顯，我們的經(jīng)驗(yàn)是將檢測器進(jìn)出口管道對調(diào)，用6mol/L硝酸溶液反沖檢測器，能很快將阻塞沖開，但要注意用低流速沖洗，觀察壓力變化[2]。

檢測池阻塞和污染多見紫外檢測器。池阻塞也可用上述方法反沖，一般都能疏通。通常，池阻塞的故障比較少見，而池污染常發(fā)生，如不干凈的樣品在池窗上積聚等，都會造成檢測池污染。表現(xiàn)為基線噪音增大，儀器靈敏度下降。可用注射器依此回抽異丙醇、6mol/L硝酸，要小心操作，將池中的污物沖洗干凈，最后用100ml純水正向沖洗檢測池。反向沖洗還可防止池滲漏。

以上只是對液相色譜常見的問題進(jìn)行了分析，當(dāng)然在實(shí)際應(yīng)用中還會遇到更多的問題，在排除故障時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，確定假定因素與問題之間的聯(lián)系；如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費(fèi)；養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，這是成功進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵。總之，在使用高效液相色譜儀時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)。

參考文獻(xiàn)

[1]靳建中.如何正確使用高效液相色譜儀[J].內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟(jì)，2006，20：9～10.

[2]孫毓慶，王延琮，方群等.現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2005： 253-254.