黃歡

[摘要] 目的 探討狼瘡性腎炎患者血清白介素-6、白介素-10水平及臨床意義。 方法 選擇2014年1月～2016年6月在我院診斷為狼瘡性腎炎患者40例為實驗組，其中20例患者處于活動期，緩解期患者20例，另選擇同期健康體檢志愿者20例為對照組。檢測三組血清IL-6及IL-10水平。 結(jié)果 實驗組活動期IL-6及IL-10水平顯著高于緩解期及對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。緩解期IL-6及IL-10水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實驗組活動期Trge水平顯著低于緩解期以及對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；實驗組活動期CD19+CD69+顯著高于緩解期以及對照組，緩解期顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 狼瘡性腎炎活動期患者血清IL-6、IL-10以及B淋巴細(xì)胞水平顯著升高，Treg水平下降，其可以作為臨床判斷狼瘡性腎炎活動程度的相關(guān)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 白介素-6；白介素-10；狼瘡性腎炎

[中圖分類號] R593.242 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）13-248-04

[Abstract] Objective To explore levels and clinical significance of serum interleukin-6 and interleukin-10 of patients with lupus nephritis. Methods 40 patients who were diagnosed as lupus nephritis in our hospital from January 2014 to June 2016 were selected as the experimental group.Among whom，20 patients were in active stage and 20 patients were in remission stage.20 healthy volunteers during the same period were selected as the control group.Serum interleukin-6 and interleukin-10 levels of three groups were detected. Results Serum interleukin-6 and interleukin-10 levels in active stage of the experimental group were higher than those in remission stage and those of the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）.Serum interleukin-6 and interleukin-10 levels in remission stage were significantly higher than those of the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）.Trge level in active stage of the experimental group was significantly lower than that of the remission stage and the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）.CD19+CD69+ in active stage of the experimental group was significantly higher than that of the remission stage and that of the control group.And the remission was significantly higher than the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Levels of serum IL-6，IL-10 and B lymphocyte of patients with lupus nephritis are significantly increased while Treg was decreased.They can be regarded as related index to judge the activity of lupus nephritis in clinic.

[Key words] Interleukin-6；Interleukin-10；Lupus nephritis

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種多發(fā)于青年女性的累及多臟器的自身免疫性炎癥性結(jié)締組織病，早期、輕型和不典型的病例日漸增多。本病病因至今尚未肯定，大量研究顯示遺傳、內(nèi)分泌、感染、免疫異常和一些環(huán)境因素與本病的發(fā)病有關(guān)。狼瘡性腎炎的發(fā)病機(jī)制還不十分清楚，涉及多種因素，目前學(xué)界認(rèn)為狼瘡性腎炎由免疫復(fù)合物介導(dǎo)，B細(xì)胞功能亢進(jìn)，T細(xì)胞功能異常，自身免疫耐受喪失。細(xì)胞因子在狼瘡性腎炎的發(fā)生及發(fā)展過程中也發(fā)揮了重要的作用[1-2]。本研究分析IL-6及IL-10對狼瘡性腎炎的影響?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月～2016年6月在我院診斷為狼瘡性腎炎患者40例為實驗組。納入標(biāo)準(zhǔn)：狼瘡腎炎診斷明確，血肌酐低于176.8μmol/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他自身免疫性疾病者，合并嚴(yán)重感染者，合并其他系統(tǒng)實質(zhì)性病變的患者，肌酐>176.8μmol/L。其中20例患者處于活動期，男4例，女16例，年齡16～60歲；病理分型：Ⅱ型1例，Ⅲ型4例，Ⅳ型13例，Ⅴ型2例。緩解期患者20例，男5例，女15例，年齡15～58歲；病理分型：Ⅱ型2例，Ⅲ型3例，Ⅳ型13例，Ⅴ型2例。另選擇同期健康體檢志愿者20例為對照組，其中男6例，女14例，年齡18～60歲。排除合并呼吸、神經(jīng)、循環(huán)、血液、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病的患者。緩解期與活動期患者病理分型比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，三組性別比、平均年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會同意，所有納入研究對象對本次研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集晨起空腹靜脈血3mL，離心后-20℃保存待測。采用酶聯(lián)免疫分析方法檢測IL-6及IL-10水平。比較三組血清IL-6及IL-10水平。檢測外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Treg以及B淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)CD19+CD69+水平。Treg細(xì)胞檢測：晨起采集空腹靜脈血2mL，肝素抗凝，PBS1：1稀釋，加入淋巴分離管，2500轉(zhuǎn)/min離心20min。收集細(xì)胞，加PBS液2mL震蕩，1200轉(zhuǎn)/min離心min，棄上清，加PBS 2mL震蕩，1200轉(zhuǎn)/min離心5min，棄上清。蒸餾水與Buffer液按照9：1稀釋，加入棄上清的標(biāo)本中，分為2管，其中一管加FITC標(biāo)記CD4抗體，為陰性管，另一管加CD4抗體、CD25抗體、CD127抗體為陽性管，避光靜置15min，每管加400μL Buffer液，用流式細(xì)胞儀檢測。B淋巴細(xì)胞活化指標(biāo)CD19+CD69+水平檢測：標(biāo)本分離同Treg細(xì)胞；陰性對照管加10μL FITC標(biāo)記CD19，陽性組加10μL的FITC標(biāo)記的CD19抗體，10μL的PE標(biāo)記的CD69抗體，5μL的AnnexinV，避光孵育15min，加400μL Buffer液，用流式細(xì)胞儀檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS12.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗及F檢驗，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清IL-6及IL-10水平

實驗組活動期IL-6及IL-10水平顯著高于緩解期及對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。緩解期IL-6及IL-10水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 各組外周血Trge以及CD19+CD69+水平

實驗組活動期Trge水平顯著低于緩解期以及對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；實驗組活動期CD19+CD69+顯著高于緩解期以及對照組，緩解期顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生與遺傳、環(huán)境因素以及雌激素水平有關(guān)。外來的抗原引起人體B細(xì)胞活化，在易感者因免疫耐受減弱，B細(xì)胞通過較差反應(yīng)與模擬外來抗原的自身抗原結(jié)合，并將抗原呈遞給T細(xì)胞，使之活化，在細(xì)胞活化刺激下，B細(xì)胞得以產(chǎn)生大量不同類型的自身抗體，造成大量組織損傷[3-4]。其發(fā)病與致病性自身抗體、致病性免疫復(fù)合物以及T細(xì)胞核NK細(xì)胞功能失調(diào)等有關(guān)。致病性自身抗體IgG型，與自身抗原有很高的親和力?？寡“蹇贵w可導(dǎo)致血小板減少，抗紅細(xì)胞抗體可導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞，溶血性貧血，抗SSA抗體可導(dǎo)致新生兒心臟傳導(dǎo)阻滯，抗磷脂抗體可導(dǎo)致抗磷脂抗體綜合征，抗核糖抗體可導(dǎo)致神經(jīng)精神狼瘡。受損的器官出現(xiàn)蘇木子小體，洋蔥皮樣改變。狼瘡性腎炎在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的發(fā)生率較高，大約有80%的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎臟有受累。狼瘡性腎炎在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中屬于重癥，死亡率居于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的第一位或者第二位。并且狼瘡性腎炎治療困難，單純激素治療難以控制病情。狼瘡性腎炎影響腎小球，血清學(xué)指標(biāo)異常。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過抑制T細(xì)胞免疫應(yīng)答、抑制B細(xì)胞應(yīng)答從而抑制系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生。Treg細(xì)胞再生能夠重建自身免疫耐受，預(yù)防自身免疫性疾病的發(fā)生。在本次研究中，狼瘡腎炎活動期患者Treg水平顯著低于緩解期以及對照組。在本次研究中，狼瘡性腎炎活動期患者B細(xì)胞異常增殖，緩解期也顯著高于對照組，說明B細(xì)胞參與了狼瘡性腎炎的發(fā)生及發(fā)展過程。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，輔助性T細(xì)胞激活B細(xì)胞，B細(xì)胞產(chǎn)生致病作用抗DNA抗體，抗DNA抗體以及免疫復(fù)合物損傷腎小球，體內(nèi)呈異常核小體。

IL-6存在與人類第7號染色提上，多種細(xì)胞可合成，包活化的T淋巴細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞。IL-6的靶細(xì)胞很多，包括靜止的T淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、活化的B淋巴細(xì)胞等，生物效應(yīng)也復(fù)雜[5]。IL-6本身并不能刺激相應(yīng)的細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，生理濃度下對免疫細(xì)胞自分泌影響也較弱。IL-6刺激肝細(xì)胞可加速其合成急性期蛋白，作用于T淋巴細(xì)胞，刺激其表面IL-2受體表達(dá)，加強(qiáng)IL-1對Th細(xì)胞有絲分裂的作用。IL-6還能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖及分化，產(chǎn)生抗體[6-7]。IL-6能夠促進(jìn)骨髓造血，合成糖皮質(zhì)激素等。IL-6受體分布在白細(xì)胞亞群中以及肝細(xì)胞上，其與受體結(jié)合后可活化相應(yīng)的細(xì)胞，產(chǎn)生大量自身抗體。研究顯示SLE患者血清中IL-6水平升高，并且與狼瘡活動程度有正相關(guān)的關(guān)系。在本次研究中，狼瘡性腎炎活動期患者IL-6水平顯著高于緩解期以及對照組，緩解期患者也顯著高于對照組，提示IL-6參與了狼瘡性腎炎的發(fā)生，同時與狼瘡性腎炎的活動性有關(guān)，可作為活動性指標(biāo)之一。

IL-10最早由Mossman及其同事發(fā)現(xiàn)，最早由Th2細(xì)胞克隆在體外培養(yǎng)的情況下產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，后來被命名為IL-10。隨后研究發(fā)現(xiàn)IL-10基因與EBV基因組有一段開放讀碼區(qū)高度同源，而EBV基因組該區(qū)編碼的蛋白為vIL-10。IL-10 是一種酸性蛋白，通常以二聚體的形式存在。其主要由T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞等產(chǎn)生[8]。IL-10與其他細(xì)胞因子無明顯的順序同源性，人IL-10對人細(xì)胞以及小鼠細(xì)胞均有作用。在單核細(xì)胞存在時，IL-10能夠直接抑制T淋巴細(xì)胞的增殖以及細(xì)胞素的產(chǎn)生。IL-10抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答，抑制Th1產(chǎn)生IL-2、IFN-γ[9-10]。Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-10能增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答。Th1細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ能下調(diào)Th2克隆抑制IL-10產(chǎn)生，而Th2細(xì)胞產(chǎn)生的IL-10能夠下調(diào)Th1克隆抑制IFN-γ等。IL-10能夠抑制CTL產(chǎn)生IFN-γ，下調(diào)MHC Ⅱ類抗原。單核細(xì)胞是產(chǎn)生IL-10的主要細(xì)胞。IL-10抑制NO的產(chǎn)生。IL-10能夠抑制單核細(xì)胞表面MHCⅡ類分子的表達(dá)[11-13]。IL-10能夠抑制NK細(xì)胞的作用，還能夠抑制Th1細(xì)胞產(chǎn)生IL-12，后者能過激活NK細(xì)胞活性。IL-10能夠促使B細(xì)胞增殖及分化，而成熟的B細(xì)胞才能分泌IL-10[14-15]。IL-10參與了系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生過程，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)IL-10可異常升高，IL-10基因與SLE的易感性有關(guān)，與SLE細(xì)胞凋亡異常關(guān)系密切。在SLE不同時期，IL-10對炎癥細(xì)胞具有不同的效應(yīng)。在本次研究中，活動期狼瘡性腎炎患者血清IL-10水平顯著高于緩解期及對照組，而緩解期也顯著高于對照組，這提示IL-10參與了狼瘡性腎炎的發(fā)生及發(fā)展，其水平可以反映狼瘡腎炎的活動程度，可以作為臨床上判斷狼瘡性腎炎的活動性指標(biāo)之一。

綜上所述，狼瘡性腎炎患者血清IL-6及IL-10、B淋巴細(xì)胞顯著升高，Trge水平顯著下降，尤其活動期患者，更為明顯。臨床上可以將IL-6及IL-10、B淋巴細(xì)胞以及Trge水平作為判斷狼瘡性腎炎活動程度的指標(biāo)。

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（收稿日期：2017-03-23）