嚴(yán)小莉 王莎莎 劉茜 高靜賢江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 （江蘇 南京 210022）

一次性使用注射器用活塞溶血試驗(yàn)的探討

嚴(yán)小莉 王莎莎 劉茜 高靜賢＊江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 （江蘇 南京 210022）

本文依據(jù)YY/T 0243-2016一次性使用注射器用活塞的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，選擇了三個(gè)廠家送檢的一次性使用注射器用活塞進(jìn)行了溶血試驗(yàn)方法的探討。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同的浸提液制備條件，試驗(yàn)結(jié)果存在顯著差異。

一次性使用注射器用活塞 溶血試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)

一次性使用注射器用活塞屬于間接與血液接觸的醫(yī)療器械產(chǎn)品，依據(jù)醫(yī)療器械分類表，其屬于半體外用間接接觸血液的A類醫(yī)療器械[1]。按照ISO10993.1-2009醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)試驗(yàn)指南，一次性使用注射器用活塞需進(jìn)行細(xì)胞毒性、致敏、皮膚或皮內(nèi)刺激、全身急性毒性和血液相容性共5項(xiàng)生物試驗(yàn)[2]。本文依據(jù)YY/T 0243-2016一次性使用注射器用活塞的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，選擇了三個(gè)廠家送檢的一次性使用注射器用活塞進(jìn)行了溶血試驗(yàn)方法的探討[3]。2016版的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中溶血試驗(yàn)體系是將樣品制備成浸提液后進(jìn)行評價(jià)，引用了GB/T 16886.12中浸提液的制備方法。依據(jù)GB/T 16886.12標(biāo)準(zhǔn)，選取了其中兩種浸提液方法制備浸提液，旨在研究不同的浸提試驗(yàn)方法對溶血試驗(yàn)結(jié)果的影響[4]。

1.資料與方法

1.1 一般材料

試驗(yàn)樣品：選用三個(gè)廠家送檢的同批次一次性使用無菌注射器用活塞。

試驗(yàn)主要儀器：紫外可見分光光度計(jì)（北京普析，型號：Tu-1901）；多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（長沙湘儀，型號：TDZ5-WS）；電熱恒溫水浴鍋（Thermo，型號：HWS-26）；高溫高壓滅菌鍋（TOMY，型號：SX-500）。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備

取三個(gè)廠家一次性使用注射器用活塞樣品，剪碎，按照0.2g/mL的浸提比例加入生理鹽水，依據(jù)浸提條件分別分成兩組：A組（37?C±1?C，24h±2h）；B組（121?C±2?C，1h±0.1h）。A組在試驗(yàn)前一天置于恒溫培養(yǎng)箱中；B組在試驗(yàn)當(dāng)天高溫高壓121?C，1h，冷卻后備用。

1.2.2 對照品制備

陽性對照組每管加入10mL蒸餾水；陰性對照組每管加入10mL生理鹽水。

1.2.3 稀釋抗凝兔血制備

采取家兔心臟血液8mL（2%草酸鉀溶液1:9抗凝），與10mL生理鹽水稀釋混勻。

1.2.4 試驗(yàn)步驟

浸提液制備好后，分別加至試管中，每管10mL浸提液，陰性對照組加入10mL生理鹽水，陽性對照組加入10mL蒸餾水，各組設(shè)3個(gè)平行管。將全部試管置于恒溫水浴（37±1）?C保溫30min后，每支試管中加入0.2mL稀釋抗凝兔血，輕輕混勻后（37±1）?C水浴中繼續(xù)保溫60min。取上清液，置于離心機(jī)中800g離心5min，觀察各管上清顏色變化，用分光光度計(jì)在545nm波長處測定吸光度。各組分別取3管平均值，并按照以下公式計(jì)算溶血率：溶血率=（供試品組吸光度-陰性對照組吸光度）/（陽性對照組吸光度-陰性對照組吸光度）×100%。

2.結(jié)果

離心后，肉眼觀察B組上清顏色明顯高于A組。由表1可看出，三個(gè)廠家的一次性使用注射器用活塞經(jīng)兩種浸提方法處理后，其溶血率均有顯著的差異。依據(jù)YY/T 0243-2016標(biāo)準(zhǔn)的要求：活塞的溶血率應(yīng)小于5%，因而三個(gè)廠家的B組均不符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

表1. 一次性使用注射器用活塞的溶血率

3.討論

一次性使用無菌注射器用活塞作為一次性使用注射器的重要組件，在使用中直接接觸藥液，屬于間接與血液接觸類的器械，所以其生物相容性的評價(jià)直接關(guān)系到一次性使用注射器的生物安全性。王文佳等[5]曾對一次性使用無菌注射器用活塞的細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢測進(jìn)行了報(bào)道，何華紅等[6]也對一次性使用無菌注射器用活塞工藝影響其細(xì)胞毒性的方面進(jìn)行了探討，但對于其溶血試驗(yàn)方面的研究報(bào)道還鮮而有之。

溶血試驗(yàn)其原理是將樣品浸泡于生理鹽水中直接與血細(xì)胞接觸，通過檢測溶液中血紅蛋白的含量來評價(jià)供試品的溶血率[7]。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中包含詳細(xì)方法的溶血試驗(yàn)檢驗(yàn)依據(jù)是GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)際的檢驗(yàn)過程中，不管是企業(yè)提供的產(chǎn)品技術(shù)要求還是生物學(xué)評價(jià)委托書，大部分引用的都是YY/T 0243一次性使用注射器用活塞的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，而此行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中溶血試驗(yàn)是引用的標(biāo)準(zhǔn)GB/ T14233.2。2016年3月，國家食品藥品監(jiān)督管理總局頒布了2016版的YY/T 0243的標(biāo)準(zhǔn)，并于2017年1月1日開始實(shí)施。相較于2003版的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，2016版的標(biāo)準(zhǔn)中對溶血試驗(yàn)的試驗(yàn)體系進(jìn)行了較大的改動(dòng)：標(biāo)準(zhǔn)條款中規(guī)定了依據(jù)GB/T 16886.12，按照0.2g/mL的浸提比例制備浸提液用于溶血試驗(yàn)，而2003版中是直接引用的GB/T14233.2-2005，其是將樣品直接與血液接觸以測定溶血率。因而，依據(jù)2016版的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對一次性注射器使用活塞進(jìn)行溶血試驗(yàn)，選擇浸提液的制備條件就極其關(guān)鍵。GB/T 16886.12是醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)第12部分：樣品制備與參照樣品，該標(biāo)準(zhǔn)對樣品浸提液制備條件進(jìn)行了規(guī)定，共列出了5個(gè)常規(guī)制備條件。本試驗(yàn)中選取了其中兩個(gè)常規(guī)制備條件即A（37?C±1?C，24h±2h）和B（121?C±2?C，1h±0.1h），試驗(yàn)結(jié)果表明，這兩種浸提條件的試驗(yàn)結(jié)果截然不同。三個(gè)廠家的B組溶血率均大于5%，不符合標(biāo)準(zhǔn)要求。因而在實(shí)際檢測中，對于一次性使用無菌注射器用活塞而言，如何選擇合適的樣品浸提方法，更科學(xué)、更準(zhǔn)確的評判其生物性能有待進(jìn)一步的研究和明確。

[1] 奚廷斐. 醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)[M]. 北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2012:4-9.

[2] BS Institution. ISO 10993-12:2012.Biological evaluation of medical devices -Part 12:Sample preparation and reference materials[S]. 2012.

[3] YY/T0243-2016.一次性使用注射器用活塞[S]. 2016.

[4] GB/T 16886.12-2005.醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)第12部分:樣品制備與參照樣品[S]. 2005.

[5] 王文佳, 何華紅, 李薇, 等. 不同廠家一次性使用醫(yī)用注射器及活塞體外細(xì)胞毒性的質(zhì)量考察[J]. 中國醫(yī)療器械信息, 2013,19(10):39-41.

[6] 何華紅, 李薇, 吳婷. 一次性使用醫(yī)用注射器活塞體外細(xì)胞毒性檢測[J]. 中國醫(yī)療器械雜志, 2010,34(2):123-125.

[7] GB/T14233.2-2005.醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分:生物學(xué)試驗(yàn)方法[S]. 2005.

Hemolysis Test of Plunger Seal of Syringes for Single Use

YAN Xiao-li WANG Sha-sha LIU Qian GAO Jing-xian＊Jiangsu Province Medical Instrument Testing Institute (Jiangsu Nanjing 210022)

According to the standard of YY/T 0243-2016 Plunger seal of Syringes for Single Use, we performed hemolysis test on the Plunger seal of Syringes for Single Use from three different manufactures. The results showed: there were signifcant differences in the different extraction conditions.

plunger seal of syringes for single use, hemolysis test, standard

1006-6586(2017)11-0032-02

TH446

A

2017-03-20

高靜賢，通訊作者，高級工程師，江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所生物學(xué)評價(jià)中心主任。