黃鄧高,王 嬋,陳 揚(yáng),馮 女,唐小燕,張淑芳*
(1??谑腥嗣襻t(yī)院暨中南大學(xué)湘雅醫(yī)院附屬??卺t(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室,海口 570208;2中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院免疫系;#共同第一作者;*通訊作者,E-mail:haikuoyiyuan@163.com)
IL-35在肺炎支原體感染患者血清的表達(dá)水平及在不同性別、年齡的差異
黃鄧高1,2,王 嬋1#,陳 揚(yáng)1,馮 女1,唐小燕1,張淑芳1*
(1??谑腥嗣襻t(yī)院暨中南大學(xué)湘雅醫(yī)院附屬??卺t(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室,???570208;2中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院免疫系;#共同第一作者;*通訊作者,E-mail:haikuoyiyuan@163.com)
目的 分析不同年齡段肺炎支原體感染患者血清中白細(xì)胞介素35(IL-35)的水平,探討其與性別、年齡的相關(guān)性以及在肺炎支原體感染過(guò)程中的作用。 方法 將納入標(biāo)準(zhǔn)的94例肺炎支原體感染陽(yáng)性作為研究組,69例肺炎支原體陰性作為對(duì)照組。符合入選標(biāo)準(zhǔn)的研究組與對(duì)照組按年齡分為三組:分別是≤1歲組(n=56),>1-10歲組(n=54)和>60歲組(n=53)。通過(guò)ELISA方法分別檢測(cè)各年齡組中血清IL-35水平,分析研究組與對(duì)照組血清IL-35水平在不同年齡組之間的表達(dá)差異以及相關(guān)性。 結(jié)果 ≤1歲組中研究組IL-35水平[(41.65±28.80)ng/L]高于對(duì)照組[(27.87±19.69)ng/L,P=0.041],>1-10歲組中研究組IL-35水平[(18.55±10.08)ng/L]低于對(duì)照組[(30.46±10.61)ng/L,P=0.000],>60歲組中研究組IL-35水平[(33.22±14.65)ng/L]高于對(duì)照組[(22.61±8.92)ng/L,P=0.002];對(duì)照組血清IL-35水平在不同年齡組兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.226);研究組血清IL-35水平≤1歲組高于>1-10歲組(P=0.000);>60歲組高于>1-10歲組(P=0.002);≤1歲組與>60歲組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.086>0.05)。 結(jié)論 IL-35可能在肺炎支原體感染過(guò)程發(fā)揮了抗炎癥作用。對(duì)照組與研究組血清中均存在IL-35表達(dá),其表達(dá)水平與性別、年齡沒(méi)有相關(guān)性,血清IL-35水平可以考慮作為肺炎支原體感染控制水平評(píng)估的免疫學(xué)參考指標(biāo)。
白細(xì)胞介素35; 血清; 肺炎支原體; 免疫性疾病
肺炎支原體病是由肺炎支原體(Mycoplasmapneumonia,MP)引起,該支原體是介于病毒和細(xì)菌之間的原核生物[1],個(gè)體大小僅有1-2 μm長(zhǎng),0.1-0.2 μm寬,光學(xué)顯微鏡下無(wú)法觀察到[2],給臨床診斷帶來(lái)巨大的困難。病人感染后主要表現(xiàn)為上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎等癥狀,也可誘發(fā)其他系統(tǒng)性疾病,嚴(yán)重感染者甚至可致死[3]。目前,肺炎支原體病的發(fā)病機(jī)制尚未明確,多項(xiàng)研究認(rèn)為IL-12,γ干擾素以及Th1型T細(xì)胞應(yīng)答在肺炎支原體感染的過(guò)程扮演重要角色[4],宿主細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能在肺炎支原體相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[5]。
近年來(lái),肺炎支原體感染的發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)[6,7]。因此支原體肺炎發(fā)病機(jī)制和早期診斷已經(jīng)受到越來(lái)越多的重視,對(duì)支原體肺炎的早期診斷不僅可以避免支原體肺炎并發(fā)癥的發(fā)生,同時(shí)也為遏制其傳播起到很好的作用。白細(xì)胞介素35(interleukin-35,IL-35)是近年發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子,主要由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)分泌,是Treg發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)控的主要細(xì)胞因子之一[8,9],被認(rèn)為是一種具有潛在治療前景的新型抗炎因子。在細(xì)胞內(nèi)感染及炎癥過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用,成為細(xì)胞因子研究的新熱點(diǎn)[10]。
目前,尚未看到關(guān)于肺炎支原體感染與IL-35關(guān)系的研究報(bào)道。本研究通過(guò)測(cè)定肺炎支原體陽(yáng)性和陰性對(duì)照人血清IL-35水平,初步了解IL-35在健康人以及肺炎支原體患者血清中的表達(dá)以及與性別、年齡之間的關(guān)系。為了解肺炎支原體發(fā)病機(jī)制和檢測(cè)方式提供參考。
1.1 研究對(duì)象
研究對(duì)象分研究組和對(duì)照組。研究組來(lái)源于2015-01~2016-06就診于??谑腥嗣襻t(yī)院兒科門診、呼吸內(nèi)科門診及收治兒科和呼吸內(nèi)科病房經(jīng)九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)出肺炎支原體陽(yáng)性的患者,共入組94例(57.7%),其中男性52例(55.3%),女性42例(44.6%)。對(duì)照組來(lái)源于同期就診于??谑腥嗣襻t(yī)院兒科、呼吸內(nèi)科門診及收治兒科和呼吸內(nèi)科病房經(jīng)呼吸道九項(xiàng)檢測(cè)出肺炎支原體陰性者,共69例(44.3%),男性41例(59.4%),女性28例(40.5%)。
本研究將研究對(duì)象分為三組:≤1歲組、>1-10歲組和>60歲組。
1.2 方法
1.2.1 九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè) 采用間接免疫熒光法(IFA)(西班牙,VIRCELL,S.L.公司,PNEUMOSLIDE IgM檢測(cè)試劑盒,16M237),同時(shí)檢測(cè)人血清中9種呼吸道感染病原體的IgM抗體,可檢的病原體包括:嗜肺軍團(tuán)菌血清I型、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎支原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型共9種病原體,收集肺炎支原體陽(yáng)性病例。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2.1 兩組患者一般情況
研究組與對(duì)照組的性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表1)。
表 1 研究組與對(duì)照組一般情況
Table 1 Basic information of patients in two groups
年齡 組別 n 性別男 女χ2P年齡(歲)x±s tP≤1歲對(duì)照組2815 130664029407±03-19660060研究組2818 1008±02>1-10歲對(duì)照組2114 717101524±20374071研究組3316 175±2>60歲對(duì)照組2012 80151046175±7 06220537研究組3318 1574±9
2.2 研究組與對(duì)照組IL-35水平
研究組與對(duì)照組血清中均能檢測(cè)出IL-35表達(dá)。≤1歲組:研究組血清IL-35水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表2)。
>1-10歲組:研究組血清IL-35水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001,見(jiàn)表2)。
>60歲組:研究組血清IL-35水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,見(jiàn)表2)。
表 2 研究組與對(duì)照組血清中IL-35表達(dá)水平的分析
Table 2 Analysis of IL-35 concentration in serum of experimental group and control group
年齡 組別 IL?35濃度(ng/L)tP≤1歲對(duì)照組2787±1969-20900041研究組4165±2880>1-10歲對(duì)照組3046±1061 441450000研究組1855±1008>60歲對(duì)照組2261±892 -32270002研究組3322±1465
2.3 不同年齡組之間IL-35水平比較
對(duì)照組:各年齡組間血清IL-35水平兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.522,P=0.226>0.05)。
研究組:血清IL-35水平兩兩比較有差異(F=11.808,P=0.000<0.001):≤1歲組高于>1-10歲組(P=0.000<0.001);>60歲組高于>1-10歲組(P=0.002<0.01);≤1歲組與>60歲組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.086>0.05,見(jiàn)表2)。
2.4 血清中IL-35水平與年齡、性別和肺炎支原體感染之間的相關(guān)性分析
對(duì)所有患者血清中IL-35水平與年齡、性別和肺炎支原體感染進(jìn)行Spearman雙變量相關(guān)性分析,結(jié)果見(jiàn)表3。
表 3 血清中IL-35水平與年齡、性別和肺炎支原體感染之間的相關(guān)性分析
Table 3 Correlation of IL-35 with age, gender andMPinfection
組別年齡性別 肺炎支原體感染≤1歲組P=0.685P=0.505r=0.323,P=0.015<0.05>1-10歲組P=0.074P=0.32 r=-0.554,P=0.000<0.001>60歲組P=0.123P=0.451r=0.372,P=0.006<0.01
IL-35可增強(qiáng)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、抑制輔助性T細(xì)胞17(T-helper cell 17,Th17)分化和效應(yīng)性T細(xì)胞(effector T cell,Teff)增殖,是一種免疫抑制性細(xì)胞因子[11,12]。IL-35既能擴(kuò)增CD4+CD25+T細(xì)胞,又能直接抑制CD4+CD25-效應(yīng)細(xì)胞的產(chǎn)生[13],在治療免疫性疾病、慢性疾病以及維持自身耐受中起重要作用。研究報(bào)道,IL-35是一個(gè)潛在的控制乙型肝炎病毒感染和感染性腸病的治療靶點(diǎn)[14,15],是自身免疫性疾病的潛在治療劑[16],與哮喘、病毒感染、真菌感染和癌癥的發(fā)生機(jī)制有密切關(guān)系[17]。Zhang等[18]分析35例吉蘭-巴雷綜合征患者血清中IL-35的濃度發(fā)現(xiàn),血清IL-35含量與患者的病情嚴(yán)重程度及預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。提示拮抗或促進(jìn)IL-35的表達(dá)可能對(duì)維持機(jī)體免疫平衡具有重要意義。但也有研究證明IL-35與兒童持續(xù)性哮喘沒(méi)有相關(guān)性[19]。因此,IL-35的作用還存在一定的爭(zhēng)議,其具體受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及對(duì)非T細(xì)胞的影響尚未明確,成為IL-35研究的熱點(diǎn)之一。MP是介于病毒和細(xì)菌之間的原核生物,被其感染后可引起多種炎癥[1,3],其感染人群廣泛,從兒童至成年人[20],提示IL-35將參與MP感所導(dǎo)致的炎癥。目前實(shí)驗(yàn)室診斷主要有:ELISA方法檢測(cè)IgM和IgG抗體、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)法、血清冷凝集試驗(yàn)法和PCR法等快速診斷方法[3],雖然這些方法能部分有效檢出MP感染,但是及時(shí)、有效地進(jìn)行MP感染的實(shí)驗(yàn)室診斷十分重要。做好病程發(fā)展的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè),可及時(shí)指導(dǎo)臨床治療,進(jìn)而預(yù)防可能發(fā)生的流行和并發(fā)癥仍是亟需解決的難題。
IL-35作為一個(gè)重要的抑炎因子,目前對(duì)于IL-35的研究尚處于起步階段,其受體及信號(hào)傳導(dǎo)通路等重要問(wèn)題尚未清楚,今后是否有希望被用于肺炎支原體感染患者的治療具體的機(jī)制還需進(jìn)一步探討。
本研究初步探討了肺炎支原體感染患者不同年齡組之間血清IL-35水平的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),對(duì)照組與研究組血清中均可檢測(cè)出IL-35表達(dá)。研究組與對(duì)照組IL-35水平比較:≤1歲組和>60歲組研究組比對(duì)照組高,而>1-10歲組研究組比對(duì)照組低;研究組≤1歲組和>60歲組高于>1-10歲組,對(duì)照組各年齡段之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清中IL-35的表達(dá)水平與性別、年齡沒(méi)有相關(guān)性,但≤1歲組和>60歲組與肺炎支原體感染成正相關(guān),>1-10歲組與肺炎支原體感染成負(fù)相關(guān)。提示IL-35可能是肺炎支原體感染過(guò)程中的一種保護(hù)性因子,血清IL-35水平可以考慮作為評(píng)估肺炎支原體感染的參考指標(biāo)。
研究對(duì)象分為三組:≤1歲組、>1-10歲組和>60歲組,原因是收集標(biāo)本期間患者的病例集中在10歲以下和60歲以上,10-60歲年齡短期間幾乎沒(méi)有,因此我們不將其納入研究范圍。以上三組的研究對(duì)象存在一定的規(guī)律性,數(shù)據(jù)分析結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但本研究也存在一定的不足,首先標(biāo)本較少,其次>1-10歲年齡跨越較長(zhǎng),未能進(jìn)行每個(gè)年齡的分組,今后需要更大的樣本量、觀察時(shí)間更長(zhǎng)來(lái)研究探討,得出其具體量化標(biāo)準(zhǔn)。
綜上所述,本研究顯示對(duì)照組與肺炎支原體感染患者組血清中均可檢測(cè)出IL-35表達(dá),但不同年齡肺炎支原體感染組與對(duì)照組的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且血清中IL-35的表達(dá)水平與肺炎支原體感染疾病密切相關(guān)。提示血清IL-35水平可能作為評(píng)估肺炎支原體感染患者中的免疫學(xué)參考指標(biāo),為感染患者的治療提供診斷依據(jù)。
[1] Stenger S, Hanson DA, Teitelbaum R,etal. An antimicrobial activity of citolytic T cells mediated by granulysin[J]. Science, 1998, 282 (5386): 121-125.
[2] Waites KB,Talkington DF.Mycoplasmapneumoniaeand its roleas a human pathogen[J]. Clin Microbiol Rev, 2004, 17(4):697-728.
[3] 鞠麗麗,任歡,齊穎,等.肺炎支原體感染的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,13(26):5190-5193.
[4] Parrott GL, Kinjo T,Fujita J. A compendium forMycoplasmapneumonia[J]. Front Microbiol, 2016, 7:513.
[5] Christie LJ,Honarmand S,Talkington DF,etal. Pediatric encephalitis: what is the role of Mycoplasma pneumoniae?[J]. Pediatrics, 2007,120(2):305-313.
[6] Ueda N, Minami S, Akimoto M. Mycoplasma pneumoniae-associated mild encephalitis/encephalopathy with a reversible splenial lesion: report of two pediatric cases and a comprehensive literature review[J]. BMC Infect Dis, 2016,16(1):671.
[7] Pereyre S, Goret J, Bébéar C. Mycoplasma pneumoniae: current knowledge on macrolide resistance and treatment[J]. Front Microbiol, 2016, 7:974.
[8] Whitehead GS, Wilson RH, Nakano K,etal. IL-35 production by inducible costimulator (ICOS) —positive regulatory T cells reverses established IL-17 dependent allergic airways disease[J]. J Allergy Clin Immunol, 2012, 129(1): 207-215.
[9] Collison LW, Chaturvedi V, Henderson AL,etal. IL-35-mediated induction of a potent regulatory T cell population[J]. Nat Immunol, 2010,11(12):1093-1101.
[10] 陳爽,鞠曉紅,鄭文彧,等.IL-35與人類疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志,2014,30(7):645-649.
[11] 姜申易,搖魯搖.IL-35在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的研究進(jìn)[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2015,31(12):1714-1717.
[12] 沈二霞.新型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞:iTR35[J].分子診斷與治療雜志,2012,3(4):142-144.
[13] Castellani ML,Anogeianaki A, Felaco P,etal. IL-35, an anti-inflammatory cytokine which expands CD4+CD25+Treg cells[J]. J Biol Regul Homeost Agents,2010,24(2):131-135.
[14] Xiang XG, Xie Q. IL-35: a potential therapeutic target for controlling hepatitis B virus infection[J]. J Dig Dis, 2015,16(1):1-6.
[15] Li Y, Wang Y, Liu Y,etal. The possible role of the novel cytokines IL-35 and IL-37 in inflammatory bowel disease[J]. Mediators Inflamm, 2014,2014:136329.
[16] Guan SY, Leng RX, Khan MI,etal. Interleukin-35: a potential therapeutic agent for autoimmune diseases[J]. Inflammation, 2017,40(1):303-310.
[17] 張慧,曾今誠(chéng),徐軍發(fā).IL-35及其與免疫性疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué)院院報(bào),2011,29(9):540-542.
[18] Zhang LJ, Guo HY, Zhang DQ,etal. Analysis of serum interleukin-27 and interleukin-35 concentrations in patients with Guillain-Barré syndrome[J]. Clin Chim Acta,2017, 468:5-9.
[19] Khoshkhui M, Alyasin S, Sarvestani EK,etal. Evaluation of serum interleukin-35 level in children with persistent asthma[J]. Asian Pac J Allergy Immunol,2016: Epub ahead of print.
[20] 柯莉芹,王鳳美,李銀潔,等.兒童肺炎支原體肺炎流行病學(xué)特征[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2013,15(1):33-36.
Expression of IL-35 in serum patients with infectedMycoplasmapneumoniaeand its difference among different age and gender
HUANG Denggao1,2,WANG Chan1#,CHEN Yang1, FENG Nü1,TANG Xiaoyan1,ZHANG Shufang1*
(1CentralLaboratory,AffiliatedHaikouHospitalXiangyaSchoolofMedicineCentralSouthUniversity,HaikouMunicipalPeople’sHospital,Haikou570208,China;2DepartmentofImmunology,XiangyaHospital,CentralSouthUniversity;#Co-firstauthor;*Correspondingauthor,E-mail:haikuoyiyuan@163.com)
ObjectiveTo investigate the concentration of IL-35 in serum of patients infected withMycoplasmapneumoniae(MP) and its difference in different age and gender, and to explore its possible roles in the process of infection.MethodsNinety-four patients infected with MP were selected as experimental group and 69 controls without infection were included as control group. All subjects were divided into three groups:less than 1 year old group,>1-10 year-old group and over 60-year-old group. The serum IL-35 concentration was detected in experimental groups and control group, and then the difference of serum IL-35 concentration among different age and gender patients was analyzed.ResultsSerum IL-35 concentration(ng/ml) in less than 1-year-old patients was higher in experimental group than in control group(41.65±28.80vs27.87±19.69,t=-2.090,P=0.041). Serum IL-35 concentration(ng/ml) in >1-10-year-old patients was lower in experimental group than in control group(18.55±10.08vs30.46±10.61,t=4.414 5,P<0.001).Serum IL-35 concentration(ng/ml) was higher in over 60-year-old patients in experimental group than in control group (33.22±14.65vs22.61±8.92,t=-3.227,P=0.002). There was no significant difference in serum IL-35 concentrations among controls with different age. The serum IL-35 level in less than 1-year-old group and over 60-year-old group was higher than that in >1-10 year-old group.ConclusionIL-35 may play an anti-inflammatory inMycoplasmapneumoniaeinfection. The IL-35 expression in serum shows significant difference betweenMPinfection patients and controls.Serum IL-35 concentration may be used as an immunological indicator to testMPinfection.
interleukin 35; serum;Mycoplasmapneumoniae(MP); autoimmune disease
黃鄧高,男,1985-04生,在讀碩士,助理研究員,E-mail:hdg_qx@163.com 王嬋,女,1987-09生,學(xué)士,檢驗(yàn)師,E-mail:286734744@qq.com
2017-03-16
R375.2
A
1007-6611(2017)07-0698-04
10.13753/j.issn.1007-6611.2017.07.013