李一冰，陳國(guó)斌，趙靜，陳璐

（南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳市婦幼保健院 婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518028）

宮頸脫落細(xì)胞HPVL1蛋白及HPVDNA載量在宮頸病變中的臨床意義

李一冰，陳國(guó)斌，趙靜，陳璐

（南方醫(yī)科大學(xué)附屬深圳市婦幼保健院 婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518028）

目的探討宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白及HPV DNA載量在宮頸病變中的臨床意義。方法收集我院2014年5月至2016年1月的237例患者的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，檢測(cè)其HPV DNA載量，并對(duì)高危型HPV陽(yáng)性者行HPV L1蛋白檢測(cè)，分析檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果HPV L1蛋白陽(yáng)性率為21.52% （51例），正常／慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌患者的HPV L1蛋白陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。HPV陽(yáng)性率為74.26% （176例），正常／慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌患者的HPV陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。HPV DNA載量低度組、中度組、高度組的HPV L1蛋白陽(yáng)性率分別為39.22%、51.95%、77.08%，高度組的HPV L1蛋白陽(yáng)性率顯著高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。結(jié)論HPV L1蛋白與HPV DNA載量對(duì)評(píng)估宮頸病變有一定作用，對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)能夠?yàn)閷m頸病變預(yù)測(cè)、治療及預(yù)后提供有效參考。

宮頸病變；人乳頭瘤病毒 （HPV）；HPV DNA載量

宮頸癌發(fā)病率居女性生殖道腫瘤的第一位［1］，其發(fā)生、發(fā)展與HPV密切相關(guān)［2］。HPV L1殼蛋白是HPV的主要衣殼蛋白，其表達(dá)與HPV復(fù)制密切相關(guān)，因此可反映病毒感染狀態(tài)，從而判斷和預(yù)測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變的生物學(xué)行為特征。目前尚無(wú)關(guān)于HPV DNA載量與宮頸病變關(guān)系的確切定論。研究［3］發(fā)現(xiàn)不同組織類型宮頸病變與HPV DNA載量有關(guān)，宮頸病變?cè)絿?yán)重，HPV DNA載量越高。本研究探討宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白及HPV DNA載量在宮頸病變中的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集我院2014年5月至2016年1月收治的237例患者的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本?；颊吣挲g21～65歲，平均年齡 （43.21±4.35）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡≥18歲；有性生活史；無(wú)宮頸手術(shù)及子宮切除術(shù)史。排除標(biāo)準(zhǔn)：重要臟器嚴(yán)重功能不全；有宮頸手術(shù)及子宮切除術(shù)史；有盆腔放化療史；妊娠期婦女。根據(jù)宮頸組織病理學(xué)診斷結(jié)果對(duì)患者進(jìn)行分組：正常／慢性宮頸炎92例，CINⅠ40例，CINⅡ37例，CINⅢ36例，宮頸癌32例。

1.2 方法窺陰器暴露宮頸后，HPV DNA采樣通過(guò)刷子在宮頸口均勻旋轉(zhuǎn)3圈后取出，儲(chǔ)存于冰凍箱中待檢，宮頸刷插入宮頸口，旋轉(zhuǎn)3周后，將收集的脫落細(xì)胞置于液基細(xì)胞保存液中涮洗。通過(guò)免疫化學(xué)法測(cè)定HPV L1蛋白，采用第二代雜交捕獲試驗(yàn)檢測(cè)HPV DNA載量，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。HPV L1檢測(cè)后出現(xiàn)紅染細(xì)胞核則提示HPV L1蛋白陽(yáng)性，HPV DNA載量檢測(cè)中，RLUs／CO＜1為陰性［4］，≥1為陽(yáng)性 （1～100為低度；100～1 000為中度，＞1 000為高度）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同病理學(xué)組織學(xué)類型的HPV L1蛋白及HPV DNA載量比較 ［n（%）］

2 結(jié)果

2.1 不同病理組織學(xué)類型的HPV L1蛋白及HPV DNA載量比較HPV L1蛋白陽(yáng)性率為21.52% （51例），正常／慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌患者的HPV L1蛋白陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；HPV陽(yáng)性率為74.26% （176例），正常／慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌患者的HPV陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 HPV L1蛋白與HPV DNA載量的相關(guān)性HPV DNA載量低度組、中度組、高度組的 HPV L1蛋白陽(yáng)性率分別為39.22%、51.95%、77.08%。高度組的HPV L1蛋白陽(yáng)性率顯著高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 HPV L1蛋白與HPV DNA載量的相關(guān)性 ［n（%）］

3 討論

目前，宮頸癌前病變篩查尚無(wú)確切的敏感性指標(biāo)，難以進(jìn)行早期干預(yù)，但研究［5］顯示，高危型HPV持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生及發(fā)展的主要因素。HPV感染分為病毒復(fù)制與病毒轉(zhuǎn)化兩個(gè)階段：病毒復(fù)制為HPV感染早期階段，該階段HPV L1蛋白可被檢出；病毒轉(zhuǎn)化階段是HPV DNA整合到宿主基因組的過(guò)程。病毒整合狀態(tài)被認(rèn)為是病毒致癌的主要因素，低度病變向高度病變發(fā)展時(shí)，病毒基因整合至宿主基因組中，從而使細(xì)胞發(fā)生癌變。低度CIN及良性病變患者的HPV基因通常為游離狀態(tài)。而高度CIN中，HPV基因整合于細(xì)胞基因不穩(wěn)定區(qū)及轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)。研究［6－7］表明，由于HPV L1蛋白只能在復(fù)制過(guò)程中的病毒顆粒上表達(dá)，當(dāng)病毒整合到宿主基因組后，會(huì)逐漸消失，因此HPV L1蛋白只能在病毒復(fù)制階段被檢出。

HPV L1蛋白是特異性 HPV抗原［8］，其陽(yáng)性表達(dá)表明HPV復(fù)制，未與宿主DNA整合，宿主細(xì)胞分化正常。HPV L1蛋白與T細(xì)胞形成免疫復(fù)合物，刺激免疫聯(lián)合反應(yīng)，局部產(chǎn)生高濃度免疫抗體，形成病變自愈傾向。若HPV L1蛋白失表達(dá)，證明病毒與宿主DNA結(jié)合，細(xì)胞凋亡［9］，弱化人體免疫，導(dǎo)致病情進(jìn)展，而HPV潛伏感染也會(huì)出現(xiàn)HPV L1蛋白陰性表達(dá)。

本研究對(duì)不同組織病理學(xué)類型的宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示HPV L1蛋白陽(yáng)性率最高為CINⅠ組，最低為宮頸癌，表明HPV L1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與宮頸病變密切相關(guān)，宮頸病變?cè)絿?yán)重，其陽(yáng)性表達(dá)率越低。另外，HPV L1蛋白陽(yáng)性率在宮頸病變中隨著病變程度加重呈下降趨勢(shì)，且HPV DNA載量也呈下降趨勢(shì) （P均＜0.05），提示兩者均與宮頸病變程度相關(guān)。研究［10］顯示，大部分CINⅠ均可自然轉(zhuǎn)歸，無(wú)需治療，很多治療屬于過(guò)度治療，而宮頸病變患者進(jìn)行HPV L1蛋白與HPV DNA載量檢測(cè)可在一定程度上預(yù)測(cè)宮頸病變是否進(jìn)展，從而對(duì)CINⅠ患者進(jìn)行更好的分流，給予正確的治療。

綜上所述，宮頸脫落細(xì)胞檢測(cè)HPV L1蛋白與HPV DNA載量在一定程度上可早期預(yù)測(cè)宮頸病變發(fā)展，防治浸潤(rùn)癌，HPV L1蛋白陽(yáng)性表達(dá)隨著病變程度加重而下降，可作為宮頸癌早期篩查指標(biāo)，值得推廣。

[1] 趙艷,孫立新,趙宏偉.乳頭瘤病毒L1衣殼蛋白及p16INK4A基因在子宮頸病變中的表達(dá)及其相關(guān)性 [J].腫瘤研究與臨床,2013, 25(4):241-244.

[2] 宋曉霞,劉玉玲,楊曉,等.HPV L1殼蛋白聯(lián)合HPV分型、TCT檢測(cè)技術(shù)對(duì)子宮頸病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估 [J].國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志, 2013,40(2):179-181.

[3] 韓世超,蘇紅,朱金明.HPV DNA與宮頸上皮內(nèi)病變發(fā)生及發(fā)展的相關(guān)性研究 [J].中國(guó)婦幼保健,2015,30(23):3940-3943.

[4] 馬曉星,李亞里,胡凌云,等.HR-HPV載量與宮頸病變的相關(guān)性分析 [J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2012,37(5):477-481.

[5] 周世媛,薄立偉,王艷麗,等.人乳頭瘤病毒基因型與宮頸病變關(guān)系的研究 [J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志,2012,20(11):765-768.

[6] 張燕,楊紅梅,董麗萍,等.宮頸脫落細(xì)胞學(xué)病理組織學(xué)檢查和人乳頭瘤樣病毒檢測(cè)在診斷宮頸病變中的臨床意義 [J].河北醫(yī)學(xué), 2014,20(9):1509-1511.

[7] 趙鵑,楊銀忠,張朝明.人乳頭瘤病毒檢測(cè)對(duì)宮頸病變的診斷價(jià)值[J].實(shí)用癌癥雜志,2016,31(1):53-55.

[8] 張金偉,余進(jìn)進(jìn),楊樹(shù)東,等.HPV L1殼蛋白與p16檢測(cè)在宮頸病變的診斷價(jià)值 [J].江蘇醫(yī)藥,2014,40(10):1153-1156.

[9] 班振英,雷冬梅,智艷芳,等.HPV L1殼蛋白在宮頸脫落細(xì)胞及宮頸組織中的表達(dá)及意義 [J].中國(guó)婦幼保健,2014,29(14):2245-2247.

[10]李美琴,李春宏,裴圣林,等.宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白及HPV DNA載量對(duì)宮頸病變的預(yù)測(cè)價(jià)值 [J].重慶醫(yī)學(xué),2015,44(13): 1804-1806.

（責(zé)任編輯：何華）

Clinical Significance of HPV L1 Protein and HPV DNA Load of Cervical Exfoliated Cells in Cervical Lesions

LI Yibing,CHEN Guobin,ZHAO Jing,CHEN Lu(Department of Obstetrics and Gynecology,Shenzhen Maternal and Child Health Care Hospital Affiliated to Southern Medical University,Shenzhen 518028,China)

Objective To explore the clinical significance of HPV L1 protein and HPV DNA load of cervical exfoliated cells in cervical lesions.Methods237 samples of cervical exfoliated cells of patients in our hospital from May 2014 to January 2016 were collected. The HPV DNA load was detected,and the L1 HPV protein of high-risk HPV positive patients were detected.The detection results were analyzed.ResultsThe HPV L1 protein positive rate was 21.52%(51 cases).Statistical difference was found in the HPV L1 protein positive rates of patients with normal/chronic cervicitis,CINⅠand CINⅡ,CINⅢand cervical cancer(P＜0.05).The HPV positive rate was 74.26% (176 cases).Statistical difference was found in the HPV positive rates of patients with norma/chronic cervicitis,CINⅠ,CINⅡ,CINⅢand cervical cancer(P＜0.05).The HPV L1 protein positive rate of low HPV DNA load group,medium group and high group were respectively 39.22%,51.95%and 77.08%.The HPV L1 protein positive rate of high group was significantly higher than that of other groups,with statistical differences(P＜0.05).ConclusionsHPV L1 protein and HPV DNA load has certain effect in the evaluation of cervical lesions. Monitoring both indicators can provide effective reference for prediction,treatment and prognosis of cervical lesions.

Cervical lesions;Human papilloma virus(HPV);HPV DNA load

R737.33

A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.07.0967

2016-12-23

2017-04-07

李一冰 （1982-），女，陜西西安人，碩士學(xué)位，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。