劉楚陽，劉 韻

HPLC法同時測定沉香舒郁丸中四種成分的含量

劉楚陽*，劉 韻

目的 建立波長切換聯(lián)合梯度洗脫HPLC法同時測定沉香舒郁丸中和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯4個成分的含量。方法 采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇(A)-0.5%磷酸溶液(B)為流動相，進行梯度洗脫，流速0.9 mL/min，檢測波長：294 nm(和厚樸酚、厚樸酚)，225 nm(木香烴內酯、去氫木香內酯)，柱溫30 ℃，進樣量10 μL。結果 和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯4個成分的質量濃度分別在4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 8)、4.46～89.20 μg/mL(r=0.999 5)、5.12～102.40 μg/mL(r=0.999 9)、6.18～123.60 μg/mL(r=0.999 2)范圍內與峰面積呈良好的線性關系；平均加樣回收率及相應的RSD分別為98.57%(1.08%)、99.93%(0.73%)、97.26%(1.24%)、97.65%(0.99%)；重復性良好，RSD≤1.75%；精密度良好，RSD≤1.06%。供試品溶液在室溫條件下24 h 內穩(wěn)定，RSD≤1.11%。平均加樣回收率在97.26%～99.93%，RSD≤1.24%。結論 所建立的方法專屬性好，準確度高，靈敏度高，快速，為沉香舒郁丸的質量控制提供依據(jù)。

沉香舒郁丸；和厚樸酚；厚樸酚；木香烴內酯；去氫木香內酯

0 引言

沉香舒郁丸收載于《衛(wèi)生部頒藥品標準》中藥成方制劑第十冊，是由厚樸(姜制)、木香、沉香、陳皮、豆蔻、砂仁、枳殼(麩炒)、青皮(醋制)、香附(醋制)、延胡索(醋制)、柴胡、姜黃、甘草等13味中藥材加工而成的大蜜丸，具有舒氣開胃、化郁止痛的功效，主要用于胸腹脹滿、胃部疼痛、嘔吐酸水、消化不良、食欲不振、郁悶不舒等病癥的治療。

沉香舒郁丸現(xiàn)標準僅規(guī)定了性狀，無任何定性和定量的檢測項目[1]，不能全面有效地控制本品的質量。厚樸和木香為沉香舒郁丸的主要藥味。木香的指標性成分為木香烴內酯和去氫木香內酯；厚樸的指標性成分和厚樸酚及厚樸酚。本文采用HPLC梯度洗脫聯(lián)合波長切換法對4個成分進行了同時測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100系列四元梯度泵高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；島津AUD 220D型電子天平(精度：0.01 mg)(日本島津公司)；KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

厚樸酚對照品(110729-201513，含量98.8%，常溫干燥保存)、和厚樸酚對照品(110730-201313，冷處保存)、木香烴內酯對照品(111524-201509，含量99.0%，冷凍保存)均購于中國食品藥品檢定研究院，使用前均不需干燥處理；去氫木香內酯對照品(477-43-0，含量98.0%，冷藏保存)購于上海佰世凱化學科技有限公司。沉香舒郁丸(每丸重6 g)購于天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠，批號：5970021、5970026、5970029。甲醇和乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動相A：甲醇，流動相B：0.5%磷酸溶液，梯度洗脫[2-4](0～11 min，54.0%A；11～19 min,54.0%A→65.0%A；19～32 min,65.0%A→70.0%A；32～40 min,70.0%A→54.0%A)；0～19 min時在294 nm[5-6]波長下檢測厚樸酚和厚樸酚，19～40 min在225 nm[7-8]波長下檢測木香烴內酯和去氫木香內酯；流速：0.9 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取對照品和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯適量，用70%甲醇溶液溶解并稀釋，制成含和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯分別為0.430、0.446、0.512、0.618 mg單一成分的對照品儲備溶液。再分別依次量取對照品儲備液適量，用70%甲醇溶液稀釋，制成含和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯分別為0.0129、0.0223、0.0256、0.0309 mg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取沉香舒郁丸適量，將其剪碎，取約2.0 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入70%甲醇溶液[9-10]45 mL，超聲提取30 min，放冷后，采用70%甲醇溶液補加至刻度，振搖均勻，過濾，取續(xù)濾液作為沉香舒郁丸測定用供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照《衛(wèi)生部頒藥品標準》中藥成方制劑第十冊中沉香舒郁丸的處方比例，分別稱取除厚樸以外的其他藥味和除木香以外的其他藥味各一份，嚴格按照沉香舒郁丸的工藝過程制成厚樸陰性樣品和木香陰性樣品，按“2.2.2”項下方法操作，制成相應的陰性樣品溶液。

2.3 專屬性考察 精密吸取“2.2.1”項下混合對照品溶液、“2.2.2”項下供試品溶液、“2.2.3”項下2個陰性樣品溶液各適量，按照“2.1”項下的色譜條件進行檢測，試驗結果顯示，厚樸陰性樣品和木香陰性樣品溶液的色譜圖中，在所測和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯對應的位置均無干擾，且理論塔板數(shù)均>3 000。色譜圖見圖1。

2.4 線性范圍考察 分別精密吸取以上4個對照品儲備液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，將其置于10 mL的量瓶中，并采用70%甲醇溶液進行稀釋至刻度，振搖均勻，即得到一系列濃度的混合對照品溶液，按照上述測定方法進行測定，以測得的峰面積Y對質量濃度X作線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程,見表1。

圖1 色譜圖

表1 線性關系實驗結果

2.5 精密度考察 取混合對照品溶液，按上述的色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結果和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯峰面積的RSD(n=6)分別為1.06%、1.03%、0.91%和0.83%。

2.6 重復性考察 取沉香舒郁丸樣品(批號：5970021)，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備沉香舒郁丸供試品溶液6份，按照“2.1”項下的色譜條件進行測定，分別計算所測各成分含量，并計算相對應的RSD，結果所測4個組分的RSD依次為1.75%、1.63%、1.47%和1.25%。

2.7 穩(wěn)定性考察 取沉香舒郁丸樣品(批號：5970021)同一供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h來評價供試品溶液的穩(wěn)定性，按上述色譜條件測定和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內酯和去氫木香內酯的峰面積值，4個組分峰面積的RSD分別為1.11%、1.07%、1.03%和0.99%。結果顯示，供試品溶液自制備起，在室溫下24 h內穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率考察 依據(jù)2015年版《中國藥典》四部藥品質量標準分析方法驗證指導原則，取已知含量的沉香舒郁丸(批號：5970021)6份，剪碎，每份約1.0 g，精密稱定，分置不同的50 mL量瓶中，精密加入混合對照品溶液25 mL、70%甲醇溶液20 mL，超聲提取30 min，放冷，用70%甲醇溶液加至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為加樣回收樣品試液。按照上述色譜條件及檢測方法測定，計算這4個組分的平均加樣回收率及RSD，結果見表2。

2.9 沉香舒郁丸樣品測定 取3批沉香舒郁丸，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備沉香舒郁丸供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣測定，結果見表3。

3 討論

3.1 流動相的優(yōu)化 筆者在實驗過程中曾考察了甲醇-水流動相體系、乙腈-水流動相體系、乙腈-0.5%磷酸溶液流動相體系、甲醇-0.5%磷酸溶液流動相體系，以所測各組分的分離效果、出峰時間長短、基線噪音等為指標，優(yōu)選最佳的流動相體系，對比實驗結果表明，以甲醇-0.5%磷酸溶液流動相體系按照文中的梯度洗脫程序，所測各組分出峰時間較快，峰型對稱，基線平穩(wěn)。

3.2 供試品溶液制備方法的優(yōu)化 本試驗分別考察了不同提取方式(超聲提取、加熱回流提取)對所測各組分提取效果的影響。結果顯示，超聲提取和加熱回流提取對沉香舒郁丸所測各組分的提取率效果差異不大，考慮到含量測定操作的便捷性，最終選取超聲提取作為沉香舒郁丸樣品制備的提取方式；同時在此基礎上對不同提取溶劑(甲醇、70%甲醇溶液、50%甲醇溶液)和不同提取時間(20、30、40 min)分別進行了考察實驗，結果顯示，70%甲醇溶液提取30 min，所測各組分的提取效果最佳。故沉香舒郁丸最終供試品溶液制備方法為70%甲醇溶液超聲提取30 min。

表2 加樣回收率實驗結果

表3 含量測定結果(mg/g)

4 小結

本文采用HPLC梯度洗脫聯(lián)合波長切換法同時對厚樸的指標性成分和厚樸酚及厚樸酚、木香的指標性成分木香烴內酯和去氫木香內酯進行了測定，結果準確可靠，專屬性強，重現(xiàn)性好，為確保臨床用藥的安全、有效控制沉香舒郁丸的質量，提供了較有力的依據(jù)。

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Simultaneous determination of the content of four constituents in Chenxiang Shuyu Pill by HPLC

LIU Chu-yang*,LIU Yun

(Department of Pharmacy,the South Hospital of Southern Medical University,Guangzhou 510515,China)

Objective To develop an HPLC gradient elution method for simultaneous determination of the content of honokiol,magnolol,costunolide and dehydrocostus lactone in Chenxiang Shuyu Pill.Methods The Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5μm) chromatographic column was adopted;the mobile phase was methanol(A)-0.5% phosphoric acid solution (B) with gradient elution,at a flow rate of 0.9 mL/min;honokiol and magnolol were detected at 294 nm,and costunolide and dehydrocostus lactone were detected at 225 nm;the column temperature was set at 30 ℃,and sample quantity was 10 μL.Results Honokiol,magnolol,costunolide and dehydrocostus lactone has a good linear relationship with peak area within the scope of concentration of 4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 8),4.46～89.20 μg/mL(r=0.999 5),5.12～102.40 μg/mL(r=0.999 9),and 6.18～123.60 μg/mL(r=0.999 2).The average recoveries and the correspondingRSDwere 98.57%(1.08%)，99.93%(0.73%)，97.26%(1.24%)and 97.65%(0.99%),respectively;the repeatability was good,RSD≤1.75%;the precision was good,RSD≤1.06%.Test solution was stable at room temperature within 24 h,RSD≤1.11%.The recovery rate was 97.26%～99.93%(RSD≤1.24%).Conclusion The established method is of good specificity,high accuracy,high sensitivity and rapidity,which can be applied to the quality control of Chenxiang Shuyu Pill.

Chenxiang Shuyu Pill;Honokiol;Magnolol;Costunolide;Dehydrocostus lactone

2016-08-30

南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院藥學部，廣州 510515

*通信作者

10.14053/j.cnki.ppcr.201705022